紫外分光光度法測定香菊膠囊黃酮總含量

付佳樂，耿 直，徐鵬虎，李 陽

(陜西國際商貿學院，陜西 咸陽 712046)

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紫外分光光度法測定香菊膠囊黃酮總含量

付佳樂，耿 直，徐鵬虎，李 陽

(陜西國際商貿學院，陜西 咸陽 712046)

目的：建立香菊膠囊中黃酮總含量的測定方法。方法：采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，檢測波長525nm，以線性、精密度、重現性、穩定性、回收率等作為效能指標，進行方法學驗證。結果：回歸方程為Y=0.476 0X-0.003 7，r=0.999 8，化香樹果序黃酮總含量在0.201 2～1.003 0mg范圍內線性關系良好，平均加樣回收率為98.2%，RSD=1.83%。結論：該方法靈敏快速,準確可靠，可用于香菊膠囊中黃酮成分總含量的測定。

香菊膠囊；蘆丁；總黃酮；紫外分光光度法

香菊膠囊為山東步長制藥有限公司產品，根據中華人民共和國藥品標準《新藥轉正標準》第31冊香菊片的基礎劑型制成[1]，具有辛散祛風、清熱通竅之功效。臨床常用于治療慢性鼻竇炎、呼吸道感染、鼻炎、慢性鼻炎鼻竇炎鼻息肉等病癥，同時可有效治療急性鼻炎鼻竇炎[2]。臨床研究發現，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌等為鼻炎、鼻竇炎主要感染菌；體外抑菌試驗表明，香菊膠囊中君藥化香樹果序的有效成分為總酚和總黃酮類，抑制細菌作用較強，可用于治療鼻炎、鼻竇炎等。根據香菊膠囊質量標準含量測定項，主要采用薄層掃描法檢測黃芪中黃芪甲苷作為質量控制指標，而處方中黃芪并非君藥，且臨床主要功效為補氣固表，與香菊膠囊辛散祛風、清熱通竅的作用不相符，不能正確體現該藥品確切療效[1]。因此，本文在香菊膠囊原有質量標準基礎上，通過研究化香樹果序藥材的主要化學成分，選擇穩定、可靠的指標，篩選專屬性好、準確度高的檢測方法。建立合理、有效的香菊膠囊含量測定方法，提高香菊膠囊的質量可控性，以期完善該品的質量標準，增強企業的品牌效應，現具體報告如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

722型紫外分光光度計(上海精密儀器有限公司)；KQ300YDB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；BSA224S型電子天平(Sartorius公司)。

1.2 試劑

步長必暢香菊膠囊，由山東步長制藥有限公司提供；化香樹果序藥材，購自西安盛興飲片廠；蘆丁對照品(批號：20101112，中國食品藥品檢定研究院)；亞硝酸鈉(天津市鴻鑫化學試劑有限公司)；硝酸鋁(天津市科密歐化學試劑有限公司)。

2 方法

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備 精密稱定于120℃干燥至恒重的蘆丁對照品20.06mg，置100mL容量瓶，加95%乙醇50mL，超聲處理，待溶解完全后，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.20mg/mL的對照品溶液。

2.1.2 標準曲線繪制[4]精密量取對照品溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置于25mL容量瓶，各加50%乙醇溶液5mL；精密加入 5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min；加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加1%氫氧化鈉試液4mL；分別加入50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min。以第1瓶做空白對照，采用紫外分光光度法，在525nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制吸收標準曲線。

2.1.3 化香樹果序藥材溶液制備 取化香樹果序藥材，粉成細粉，稱取5g，置索氏提取器中，加乙醚120mL，加熱回流至提取液無色，放冷，揮去乙醚液；再加甲醇90mL，加熱回流至提取液無色，移置100mL容量瓶，加入少量甲醇洗滌容器，洗液并入容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取10mL，置100mL容量瓶，加水至刻度，搖勻；精密量取3mL，置25mL量瓶，按上述標準曲線制備方法進行測定，根據標準曲線可計算藥材中總黃酮含量。

2.1.4 供試品溶液制備 取香菊膠囊20粒，內容物混勻，取3.0g，精密稱定，置索氏提取器中，按 “2.1.3”項方法制備供試品溶液，根據標準曲線可測得黃酮總含量。

2.2 方法學考察[5-6]

2.2.1 線性關系考察 以空白管為參比溶液，在525nm波長處測定各標準溶液的吸光度，以蘆丁濃度X為橫坐標，以吸光度Y為縱坐標，繪制蘆丁標準曲線。

2.2.2 精密度試驗 取本品內容物3.0g，精密稱定，置索氏提取器中，按照“2.1.3”項方法進行試驗，測定吸光度值，連續測定6次，計算RSD值。

2.2.3 重現性試驗 取本品內容物3g(同一批號)6份，精密稱定，按照含量測定方法測定黃酮的總含量，計算RSD值。

2.2.4 穩定性試驗 取本品內容物3g精密稱定，按照含量測定方法，制備供試品溶液，以相應溶液為空白，每隔1h記錄1次數據，測定吸光度值，連續測定6次，共5h，計算RSD值。

2.2.5 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品(黃酮平均含量為27.54mg/粒)6份，分別精密加入一定量蘆丁對照品，按照含量測定方法操作，制備供試品溶液，測定黃酮總含量，計算回收率及RSD值。

3 實驗結果[5-6]

3.1 標準曲線繪制

按照“2.1.2”線制備方法繪制標準曲線，由試驗得出蘆丁溶液含量與吸光度結果見表1。

表1 蘆丁對照品標準溶液含量與吸光度關系

以蘆丁含量為橫坐標(X)，吸收度值為縱坐標(Y),根據吸收度值對蘆丁量進行線性回歸，得回歸方程：Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8)。由結果可知，蘆丁在0.200 6～1.003 0 mg范圍內，吸收度與蘆丁量線性關系良好。見圖1。

圖1 蘆丁標準曲線

3.2 精密度試驗

試驗得出，6次重復試驗的吸光度分別為0.281 1、0.285 0、0.280 0、0.283 7、0.282 8、0.281 3，由吸光度差值計算，相對標準差為0.63%(n=6)，說明精密度良好。

3.3 重現性試驗

試驗得出，6次試驗樣品的黃酮總含量分別為27.61、27.67、27.46、27.56、27.63、27.35(mg/粒)，黃酮含量平均為27.55mg/粒，由吸光度差值計算，相對標準差為0.44%(n=6)，說明該試驗重現性良好。

3.4 穩定性試驗

試驗得出， 5h內樣品的吸光度值分別為0.283 1、0.281 4、0.279 5、0.278 7、0.276 8、0.275 3，由吸光度差值計算，相對標準差為1.08%(n=6)，結果表明：5h內吸收度值基本穩定，不影響定量分析結果。

3.5 回收率試驗

試驗結果表明，平均回收率為98.2%，RSD=1.83%，加樣回收率良好。

3.6 藥材含量測定

分別按照含量測定方法操作，測定化香樹果序藥材的黃酮含量，計算平均值為5.57%。根據測定結果，其中化香樹果序藥材黃酮總含量以無水蘆丁(C27H30O16)計，不低于4.5%。

3.7 樣品含量測定[6]

分別取3個不同批次的香菊膠囊，內容物研細，分別稱取3.0g，各取兩份，精密稱定，置于索氏提取器，按“2.1.3”項方法，測定吸光度值，計算總黃酮含量。結果顯示：三批共六組香菊膠囊中黃酮總含量分別為28.45、29.32、25.36、23.14、24.18、25.69mg/粒，平均含量為26.02mg/粒。

根據試樣品測定結果，考慮大生產及藥材來源等因素，該品每粒黃酮總含量以無水蘆丁(C27H30O16)計，不低于20.0mg。

4 結論

本研究表明：采用乙醇提取香菊膠囊化香樹果序成分中黃酮總含量方法良好。在波長525nm處，采用紫外分光光度法，樣品在0.201 2～1.003 0mg范圍內黃酮總含量呈良好線性關系，回歸方程為Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8)，加樣平均回收率為98.2%，RSD=1.83%。

采用紫外分光光度法可簡便、靈敏、準確用于測定化香樹果序黃酮的總含量，可為香菊膠囊質量控制研究提供有效的實驗依據。以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH為顯色劑，蘆丁標準品在525nm波長測定化香樹果序黃酮總含量。該方法靈敏快速,準確可靠，重復性好，可用于香菊膠囊中黃酮成分總含量的測定。

化香樹果序化學成分的研究尚不成熟，雖已有關于黃酮類、揮發油、酚類等成分的研究與文獻報道，但由于化香樹果序的成分復雜，還不能將一些有效成分完全分離出來，對其藥理作用尚不明確，因此化香樹果序的進一步研究勢在必行。近年來，根據花香樹果序在心血管系統、內分泌系統、抗腫瘤等方面的藥理作用研究成果，多種以黃酮類成分為主的制劑已經上市，臨床應用較為廣泛。

[1] 國家食品藥品監督管理局.中華人民共和國新藥轉正標準[S].第31冊,2011:21.

[2] 頓寶生.步長中成藥[M].北京：人民衛生出版社,2008:321-323.

[3] 仇錦春,卡慧敏,俞晶華,等.香菊軟膠囊的主要藥效研究[J].現代中藥研究與實踐,2006,20(6):19-22.

[4] 汪樹理,賀鳳成,董金平.長白山區野生款冬花不同采收期蘆丁含量的差異[J].時珍國醫國藥,2010(4):842-843.

[5] 宋麗萍.銀杏葉總黃酮的提取工藝研究[J].海峽藥學,2013,35(6):37-39.

[6] 孔慧,郝麗靜,邢紅霞,等.寧心解郁膠囊的質量標準研究[J].中成藥,2012,34(12):2452-2454.

(責任編輯：李嵐春)

Determination of Total Flavonoids in Xiangju Capsule by Ultraviolet Spectrometry

Fu Jiale, Geng Zhi,Xu Penghu，Li Yang

(Shanxi Institute of International Trade and Commerce, Xi’an 712046,China)

Objective:To establish the determination method for total flavonoids from Xiangju Capsule.Methods:The contents of total flavonoids were determined by UV spectrophotometry at detection wavelength of 525 nm with rutin as standard substance, using linear ity and linear range, accuracy,reproducibility,selectivity as the performance parameters.Results:The linear regression equation was Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8).The linear range of rutin were 0.201 2～1.003 0mg with average recovery of 98.2%(RSD=1.83%,n=6).Conclusion:This method is sensitive,accurate and rapid,which can be used for quality control of total flavonoids in Xiangju Capsule.

Xiangju Capsule;Rutin; total flavonoids; UV spectrophotometry

2014-07-30

陜西省大學生創業創新訓練計劃項目(201213123002)

付佳樂(1984-)，女，陜西國際商貿學院講師，研究方向為中藥制劑。

R256

A

1673-2197(2014)24-0017-02