兩種滅酶方法對苦杏仁及苦巴旦杏仁中苦杏仁苷含量的影響

趙江林 ，劉建紅 ，侯擁 ，楊曉君

（1.新疆維吾爾自治區克拉瑪依市中心醫院，新疆 克拉瑪依 834000； 2.新疆維吾爾自治區烏魯木齊市中醫醫院，新疆 烏魯木齊 830000； 3.新疆農業大學食品科學與藥學學院，新疆 烏魯木齊 830052）

苦杏仁為薔薇科植物杏 Prunus armeniaca L.的成熟果實苦味種仁，我國主產于新疆、黑龍江、遼寧、吉林、內蒙古、寧夏、甘肅、河北、陜西、山西等省區，具有祛寒止咳、燥濕祛痰、除腐愈傷等功效，臨床用于寒性咳嗽、濕性痰多、支氣管炎及各種皮膚創傷[1]。巴旦杏為薔薇科植物巴旦杏 Amygdales communist L.的成熟果實，根據植物種子苦或甜分為苦巴旦杏 Amygdalus communist L.val.amara 和甜巴旦杏 Amygdalus communist L.var.dulcis 兩種，我國新疆、甘肅、陜西、內蒙古等地有栽培，國外北非、地中海沿岸地區和歐洲其他地區等亦有栽培[2]，具有潤肺止咳、潤腸軟便、祛寒壯腰、熱膚生輝、身寒壯陽、提高視力、填精固精等功效，臨床主治干寒性或黑膽質性疾病，如干性肺虛咳嗽、身瘦體弱、記憶減退、大便不通、寒性腰膝酸軟[1]228-229，近年來的研究有所增加[3]。苦杏仁苷（amygdalim）屬芳香族氰苷，在植物界分布廣泛，其中以薔薇科植物（杏、桃、李）種子的含量最高[4]。其結構式為苯羥基乙氰-β-D葡萄糖-6-β-D葡萄糖苷，是由1分子苯甲醛、1分子氫氰酸和2分子葡萄糖組成，本身無毒，遇熱易分解，生成的氫氰酸有劇毒。其主要生理功能有鎮咳、平喘、抗炎、鎮痛、抗腫瘤、降血糖和抗潰瘍[5]。本試驗中，對苦杏仁和苦巴旦杏仁進行不同滅酶方法處理，采用紫外分光光度法測定苦杏仁苷的含量，并進行含量比較分析[6]，旨在為建立適宜的苦杏仁苷加工方法提供基礎依據。

1 儀器與試藥

TU-1800SPC型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；AL204型電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；RE-52B型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；HH-S型數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市醫療儀器廠)；SHB-Ⅲ型循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）。苦杏仁、苦巴旦杏仁購于新特藥醫藥公司（批號為20100925001），經本院生藥室鑒定為杏 Prunus armeniaca L.和巴旦杏 Amygdales communist L.的成熟干燥種仁；苦杏仁苷對照品(C20H27NO11＝457.44，中國藥品生物制品檢定所，批號為820-200002)；無水乙醇，石油醚，蒸餾水均為分析純。

2 方法與結果

2.1 苦杏仁苷對照品溶液配制

精密稱取在105℃恒溫干燥至恒重的苦杏仁苷對照品2.5 mg，置5 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，定容至刻度，制成質量濃度為0.5 g/L的苦杏仁苷對照品貯備溶液。

2.2 供試品溶液制備

2.2.1 藥材處理

分別稱取4份藥材（苦杏仁3份、苦巴旦杏仁1份），均20 g，快速沖洗，去除灰塵，室溫下晾干，備用。

2.2.2 滅酶

將4份供試品分別用不同方法進行滅酶處理，苦杏仁1號沸水煮5 min，苦杏仁 2號沸水煮 10 min，苦杏仁 3號蒸 30 min，苦巴旦杏沸水煮10 min。滅酶后，將供試藥材自然晾干后，平鋪烘箱中，于60℃下干燥1 h，取出，放冷至室溫，粉碎機粉碎，過20目篩。

2.2.3 脫脂

將粉碎過的4份供試品中分別加入40 mL的石油醚[7]，在70～80℃下，水浴攪拌脫脂40 min，抽濾，濾餅再重復提取2次，每次用石油醚20 mL和15 mL，得4份脫脂醚。

2.2.4 溶液制備

將4份脫脂醚中分別加入40 mL的無水乙醇[8]，在80～90℃下水浴攪拌提取40 min，趁熱過濾，濾餅再重復提取2次，每次用無水乙醇20 mL，合并3次濾液，用旋轉蒸發儀蒸餾回收無水乙醇，至濃縮液約20 mL，倒入干燥至恒重的蒸發皿中，水浴鍋上蒸干，用水溶解，移至100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，得苦杏仁1號、苦杏仁2號、苦杏仁3號、苦巴旦杏仁供試品溶液。

2.3 紫外吸收光譜測定

精密稱取苦杏仁苷對照品2.5 mg，制成質量濃度為0.5 g/L的苦杏仁苷對照品溶液，在220～300 nm波長范圍內測定吸光度 A值，并以蒸餾水作空白，記錄其紫外吸收光譜。結果見圖 1。苦杏仁苷于258，264，275 nm 波長處有3個吸收峰，前2個吸收峰顯示較大吸收強度，又以264 nm波長處峰值最大。

圖1 苦杏仁苷的紫外光譜圖

2.4 方法學考察

標準曲線制備：精密稱取在105℃度恒溫干燥至恒重的苦杏仁苷對照品50 mg，置50 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，定容至刻度，得1 g/L的苦杏仁苷對照品貯備溶液，置冰箱（4℃左右）保存，備用。分別取上述溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，用蒸餾水稀釋，定容至5 mL[9]。以蒸餾水作空白，在264 nm波長處測定吸光度 A值。以質量濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 A＝0.644 6C-0.048 5，r＝0.999 2（n＝8）。結果表明，苦杏仁苷質量濃度在0.1～0.8 g/L范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗：取苦杏仁2號供試品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取上清液，在264 nm波長處測定吸光度。結果 6 次試驗吸光度 A值為 0.315，0.313，0.314，0.316，0.312，0.313，平均 0.313，RSD ＝ 0.47% （n ＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取苦杏仁2號供試品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取上清液在264 nm波長處間隔一定時間測定吸光度。結果 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0，35.0，40.0，45.0 h 內 的 平 均 吸 光 度 值 為 0.311，RSD＝0.57%（n＝12），表明供試品溶液在45 h內吸光度基本穩定。

重復性試驗：取苦杏仁樣品約10 g，精密稱定，依法操作，平行制備6份供試品溶液并測定吸光度。結果吸光度 A值分別 為 0.327，0.318，0.323，0.306，0.311，0.315， 平 均 0.317，RSD ＝2.44%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取苦巴旦杏仁供試品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取等體積5 mL的5份上清液，分別加入0.5～2.5 mg的苦杏仁苷對照品，于264 nm波長處分別測定吸光度，計算回收率。結果見表1。

2.5 樣品含量測定

分別從上述4種供試品溶液中各取5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取上清液在264 nm波長處分別測定吸光度，并計算其中苦杏仁苷的含量。結果見表2。可見，苦杏仁中2號即沸水煮10 min滅酶效果最佳，苦杏仁苷含量最高位2.80%，苦杏仁中苦杏仁苷含量均高于苦巴旦杏仁。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗結果（n＝5）

表2 樣品含量測定結果

3 討論

苦杏仁中含有苦杏仁酶，在提取苦杏仁苷過程中，酶會將苦杏仁苷水解[10]，降低提取率。因此，選擇合適的滅酶方法是決定提取率高低的影響因素之一。本試驗中進行了同一品種杏仁采用不同滅酶方法、不同品種杏仁采用同一滅酶方法對苦杏仁苷提取率的影響試驗，結果顯示，不同的滅酶方法對杏仁中的苦杏仁苷含量有影響。

苦杏仁和苦巴旦杏中含有脂質成分，在樣品處理過程中，若有脂質成分的存在，會把苦杏仁苷包裹在內，從而使得苦杏仁苷提取不完全。本試驗中采用了石油醚進行脫脂。大多文獻顯示用乙醚[11]或苯來脫脂，但乙醚和苯具有強的揮發性，且苯還具有毒性，二者對環境有污染作用且脫脂不完全，相比較而言，石油醚的脫脂效果較二者好。

在采用紫外分光光度法進行含量測定時，有文獻用甲醇作為溶劑。雖然苦杏仁苷在甲醇中溶解性較好，但在苦杏仁苷的最大吸收波長處甲醇也顯示有吸收，會影響到苦杏仁苷的含量測定。為此，采用水作為溶劑。苦杏仁苷在水中的溶解度較好，不會影響苦杏仁苷的含量測定。

參考文獻：

[1]中國醫藥百科全書編委會.中國醫藥百科全書（維吾爾醫藥）[M].上海：上海科學技術出版社，2005：230.

[2]劉勇民，沙吾提·伊克木.維吾爾藥志（上）[M].烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1999：77-82.

[3]楊曉君，韓海霞 .巴旦杏的近代研究[J].中國藥業，2009，18（10）：85-86.

[4]鄧 毅，張艷萍.甘肅鎮原杏仁中苦杏仁苷的提取及含量測定[J].甘肅中醫，2000，13(1)： 51-52.

[5]趙宇瑛，尚 冰，宋曉東.苦杏仁苷的研究進展[J].安徽農業科學，2005，33(6)：1 097-1 098.

[6]周 英，郜 文.苦杏仁的生理功能和保健飲料研制[J].食品工業科技，2000，21(5)：49-50.

[7]閭肖波，蘇寶根，楊亦文，等.純苦杏仁苷的制備[J].中國醫藥工業雜志，2006（3）：165-167.

[8]車鳳斌.苦杏仁苷提取工藝研究[J].食品工業科技，1997(3)：11-13.

[9]田士林，李 莉.薔薇科植物種仁中苦杏仁苷含量測定與比較[J].安徽農業科學，2006，34(16)：3 885-3 890.

[10]赤堀昭.桃仁、苦杏仁及桃仁方劑中苦杏仁苷的酶水解[J].國外醫學：中醫中藥分冊，1985(7)：31-35.

[11]馬 辰，李春花.苦杏仁中苦杏仁苷的含量測定[J].中國實驗方劑學雜志，2000，6（2）：17.