鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠的制備及質(zhì)量評價

沈丹丹 ，劉 杰 ，黃 華 ，張 濤

（1.重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121； 2.重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121；3.重慶醫(yī)藥工業(yè)研究院有限責(zé)任公司，重慶 400061； 4.重慶市化學(xué)制藥工程技術(shù)研究中心，重慶 400061；5.重慶醫(yī)科大學(xué)藥劑學(xué)教研室，重慶 400016）

鹽酸奧昔布寧既是M3膽堿受體阻斷藥，又是鈣拮抗藥，是臨床上使用較多的M膽堿受體阻斷藥[1]，是1975年在美國首次上市的老藥，近幾年其緩釋劑型被再度開發(fā)利用，且擁有良好的臨床療效[2]。研究發(fā)現(xiàn)，醇脂質(zhì)體能夠提高鹽酸奧昔布寧的經(jīng)皮滲透性[3]。但醇脂質(zhì)體作為液體制劑，給藥不方便。將鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體制備成凝膠劑，不僅使用方便，而且將醇脂質(zhì)體分散于適宜黏度的凝膠中，脂質(zhì)囊泡不易聚集，增加了醇脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。本研究是在醇脂質(zhì)體基礎(chǔ)上以羥丙基纖維素（HPC）為凝膠基質(zhì)，制備鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠制劑，并與自制普通凝膠比較。參照2010年版《中國藥典（二部）》制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指導(dǎo)原則，進行鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠的初步質(zhì)量檢查及穩(wěn)定性研究。

1 儀器、試藥與動物

S-3400N型掃描電子顯微鏡（日本 Hitachi公司）；H-600型透射電子顯微鏡（日本日立公司）；NDJ-1型旋轉(zhuǎn)粘度計（上海平軒科學(xué)儀器有限公司）；FA25型均質(zhì)機（德國 Fluko公司）；TK-60B型透皮擴散試驗儀大（上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司）；S212型恒速機械攪拌器（上海申順科技有限公司）；LC-10ATVP型高效液相色譜儀（日本島津公司）。鹽酸奧昔布寧（威海迪素制藥有限公司，批號為OX090301）；羥丙基纖維素（日本曹達株式會社，批號為NOE-1801）；蛋黃卵磷脂（上海艾偉特有限公司，含量98%，批號為PC98T）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。大鼠，雄性，體重（200±20）g，重慶市中藥研究院實驗動物中心提供，合格證號 SCXK（渝）20070006。

2 方法與結(jié)果

2.1 凝膠制備

2.1.1 OXB 醇脂質(zhì)體凝膠

取適量HPC，用適量水充分溶脹后，加入一定量的乙醇，使其中乙醇濃度與醇脂質(zhì)體系統(tǒng)中乙醇含量一致，再加入甘油，溶脹均勻即得空白凝膠基質(zhì)。然后將空白凝膠基質(zhì)與按已報道方法[3]制備的OXB醇脂質(zhì)體溶液混合均勻，得到均勻的淡黃色透明醇脂質(zhì)體凝膠。其中OXB含量為4%，乙醇含量為45%。

2.1.2 OXB 凝膠

將HPC用適量水充分溶脹后，加入一定量的乙醇、甘油，溶脹均勻。再加入一定量的藥物乙醇溶液，用5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào) pH至 5.5，補加蒸餾水至 100%，攪拌均勻，得到透明的OXB凝膠。其中OXB含量為10%，乙醇含量為70%。

2.2 體外透皮試驗

2.2.1 離體皮膚制備

取體重（200±20）g的雄性大鼠，斷頸處死，剃除腹毛，剝離腹部皮膚，去除皮下脂肪，用新鮮生理鹽水洗凈。將上述離體皮膚平鋪于2張濾紙中，于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｔ囼炃坝梅糯箸R仔細檢查鼠皮的完整性，皮膚不應(yīng)有任何損傷。

2.2.2 體外透皮試驗

采用垂直透皮擴散實驗儀，進行鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠及普通凝膠體外經(jīng)皮滲透試驗。擴散池有效滲透面積是2.54 cm2，接受池容積18 mL。將皮膚固定于擴散池的供給室，角質(zhì)層面向供藥池，真皮層面向接收池，接收池中加30%乙醇溶液作釋放介質(zhì)，與皮膚緊密接觸，不留空腔。取定量凝膠（約25 mg）置供給室內(nèi)，維持溫度恒定（37±1）℃，以 200 r/min的速率恒溫攪拌，于2，4，8，12，24 h 時吸取接受液 0.5 mL，同時補充等量接受液。按擬訂的色譜條件測定，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求得濃度 Ci，藥物單位面積累積透過量 Q按下試計算：

式中 Q為單位面積藥物累積透過量，Ci為第i次取樣時接受介質(zhì)中的藥物濃度，V為接收室體積，Vi為每次取樣體積，A為擴散池有效滲透面積。以單位面積累積滲透量 Q為縱坐標(biāo)，時間 t為橫坐標(biāo)作圖，得藥物累積滲透曲線，見圖1。對所得曲線的直線部分進行回歸，求出的斜率即為藥物的穩(wěn)態(tài)滲透速率[Jss，μg /(h·cm2）]（表 1）。結(jié)果表明，醇脂質(zhì)體凝膠累積滲透率是普通凝膠劑的3.9倍。

圖1 醇脂質(zhì)體凝膠劑和普通凝膠劑的累積滲透百分比曲線圖

表1 鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠劑和普通凝膠劑的經(jīng)皮滲透特性

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -2.5 mmol/L 磷酸鹽緩沖液（80 ∶20）；流速：1.0 mL /min；檢測波長：220 nm；靈敏度：0.1 AUFS；進樣量：20 μL。

2.3.2 樣品處理

精密稱取鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠0.25 g（約相當(dāng)于鹽酸奧昔布寧10 mg），置25 mL容量瓶中，加5 mL無水乙醇，振搖5 min使溶解后，用流動相稀釋至刻度。0.45 μm濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。空白凝膠劑同法操作。

2.3.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：空白醇脂質(zhì)體凝膠、鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠按2.3.2項下方法處理。精密量取續(xù)濾液20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。在此條件下鹽酸奧昔布寧與空白輔料色譜峰得到很好分離，專屬性良好。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精密稱取干燥至質(zhì)量恒定的鹽酸奧昔布寧對照品適量，置100 mL容量瓶中，用流動相配制成質(zhì)量濃度為5 g/L 的貯備液。分別精密量取貯備液 0.10，0.40，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置 50 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得一系列對照品溶液。搖勻，按擬訂色譜條件，分別精密量取續(xù)濾液20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（A）對質(zhì)量濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程 A＝2.075 5×103C+1.300 3 × 104（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，鹽酸奧昔布寧質(zhì)量濃度在10～1 000 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

回收率與精密度試驗：按處方配比制備空白醇脂質(zhì)體凝膠，加入處方量的80%，100%，120%鹽酸奧昔布寧，攪拌均勻。精密稱取 0.25 g，按 2.3.2項下方法處理，使藥物質(zhì)量濃度分別為320，400，480 μg/mL。按擬訂色譜條件，分別精密量取續(xù)濾液 20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。取上述低、中、高3個質(zhì)量濃度樣品溶液各1份，分別在日內(nèi)和日間各測5次，每份重復(fù)測3次，平均回收率為99.58%，RSD＝0.49%。結(jié)果的日內(nèi)與日間精密度RSD均小于2%，說明該測定條件的準(zhǔn)確度和精密度均良好。

2.3.4 樣品含量測定

精密稱取鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠0.25 g（約相當(dāng)于鹽酸奧昔布寧10 mg），按2.3.2項下方法處理，作為供試品溶液。另取干燥至質(zhì)量恒定的鹽酸奧昔布寧對照品適量，用流動相稀釋成每1 mL含400 μg的溶液作為對照品溶液。按擬訂色譜條件測定，按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果批號分別為20100918-1，20100919-1，20100920-1的3批鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠的含量分別為 4.02% ，4.08% ，3.98% 。

2.4 OXB醇脂質(zhì)體凝膠的質(zhì)量評價

性狀：本品為淡黃色透明的半固體凝膠。

掃描電鏡（SEM）與透射電鏡（TEM）觀察醇脂質(zhì)體凝膠的形態(tài)：將樣品（批號為20100918-1）10 μL均勻地分散于載玻片上，于40℃過夜烘干。樣品用小型離子濺射儀噴金，然后在S-3400N型掃描電子顯微鏡下以30 kV加速電壓觀測粒子形態(tài)，見圖3 A。可見將醇脂質(zhì)體制備成凝膠后，醇脂質(zhì)體粒子形態(tài)仍然保持圓整，大小均一。另取樣品滴在銅載網(wǎng)上，過量的樣品用濾紙吸干，于格網(wǎng)上滴加2%醋酸鈾酰溶液，除去過量的染色液，在透射電子顯微鏡下以40 kV檢查格網(wǎng)，見圖3 B。可見，在醇脂質(zhì)體凝膠體系中，藥物被包裹醇脂質(zhì)體中，仍然呈圓形或橢圓形，形成單室或多室雙分子層。

pH：取樣品（批號為20100918-1）2 g于燒杯中，加入蒸餾水50 mL稀釋后，攪拌 5 min，測得 pH為5.52。

黏度：取樣品（批號為20100918-1）適量，選擇 2號轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速為12 r/min，測得醇脂質(zhì)體凝膠黏度為1 250 mPa·s。

離心試驗：取樣品（批號為20100918-1）5 g，置離心管中，以3 000 r/min的速率離心30 min，樣品無分層現(xiàn)象。

耐熱耐寒試驗：取樣品（批號為20100918-1）置60℃恒溫箱和-19℃冷凍室，24 h后取出，結(jié)果凝膠外觀無明顯變化及無分層現(xiàn)象。

圖3 電鏡圖

3 討論

本研究在鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體的研究基礎(chǔ)上，將醇脂質(zhì)體載體載入HPC空白凝膠基質(zhì)中，具有藥物容量高、性質(zhì)穩(wěn)定、保濕性好、使用方便等優(yōu)點。體外透皮試驗表明，鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體凝膠累計滲透率是普通凝膠的3.9倍。相關(guān)研究證實，醇脂質(zhì)體是鹽酸奧昔布寧經(jīng)皮給藥的良好載體[3]。醇脂質(zhì)體凝膠劑滲透通過皮膚角質(zhì)層可能包括醇脂質(zhì)體載體從凝膠基質(zhì)的釋放過程和擴散的醇脂質(zhì)體載體與皮膚角質(zhì)層融合釋放藥物的過程。

本研究首次采用了掃描電鏡與透射電鏡對醇脂質(zhì)體凝膠的形態(tài)進行檢測，進一步驗證醇脂質(zhì)體的形態(tài)在凝膠體系中不會發(fā)生改變，表明醇脂質(zhì)體分散于凝膠基質(zhì)中，與基質(zhì)沒有發(fā)生相互作用。制備的醇脂質(zhì)體凝膠穩(wěn)定性較好，這可能是由于凝膠基質(zhì)較大的平均孔徑可抑制醇脂質(zhì)體囊泡的聚集，從而增加了醇脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。但醇脂質(zhì)體凝膠對人體皮膚的安全性、刺激性和有效性還有待進一步研究。

參考文獻：

[1]呂蕙蘭，溫 情，王本杰，等.健康志愿者鹽酸奧西布寧緩釋制劑與普通制劑藥代動力學(xué)及生物等效性研究[J].山東大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，43（7）：657-660.

[2]溫 清，賀 坤，郭瑞臣.鹽酸奧昔布寧臨床應(yīng)用進展[J].中國藥事，2004，18（7）：445-447.

[3]沈丹丹，張 濤，黃 華.鹽酸奧昔布寧醇脂質(zhì)體的制備及體外透皮吸收研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，2011，42（1）：48-52.