參花婦康膠囊中丹參醇提取工藝研究

周 健 ，宋 岐 ，金向群

(1．吉林輝南三和制藥有限公司，吉林 通化 135100； 2．吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130021）

參花婦康膠囊是中藥6類新藥（臨床批件號為2011L01664），由當(dāng)歸、丹參、芍藥、川芎、香附、紅花、苦參 7味中藥提取而制成的膠囊劑。處方中丹參的化學(xué)成分為脂溶性和水溶性兩部分，前者為丹參酮類，主要有丹參酮Ⅰ(tanshinoneⅠ)、丹參酮ⅡA(tanshinoneⅡA)、丹參酮ⅡB(tanshinoneⅡB)、隱丹參酮(crytotanshinone)、羥基丹參酮(hydroxytanshinone)、丹參羥基酯(methyltanshinonenate)、二氫丹參酮Ⅰ(dinydrotanshinoneⅠ)及異丹參酮Ⅰ、異丹參酮Ⅱ、異隱丹參酮、二氫異丹參酮Ⅰ，后者主要為酚酸類，包括丹參素、原兒茶醛和丹參酸甲、乙、丙。為了保證其療效，丹參的提取應(yīng)先采用醇提取，醇提取后的殘?jiān)倥c其他藥物進(jìn)行煎煮。本試驗(yàn)中以干膏率及干膏中含丹參酮ⅡA的量為指標(biāo)，優(yōu)選丹參藥材乙醇提取的最佳工藝。

1 儀器與試藥

微壓循環(huán)煎藥機(jī)（北京東華醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）；萬分之一電子分析天平（上海梅特勒－托利多儀器有限公司）；電熱真空干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司），LC－10A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；KQ－250D型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。藥材均購于吉林省藥材公司；丹參酮ⅡA對照品（批號為 0766－9909，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇、乙腈為色譜純（Fisher Scientific）；水為二蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 丹參酮ⅡA含量測定

2．1．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent zorbax NH2柱（150 mm ×4．6 mm，5 μm），十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇－水(72∶28)；檢測波長：270 nm；流速：1．0 mL ／min。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于 2 000。

2．1．2 線性關(guān)系考察

精密稱取丹參酮ⅡA對照品適量，加流動相制成每1 mL含0．033 mg的對照品溶液，分別精密吸取該對照品溶液 1，2，3，4，5 μL，注入高效液相色譜儀，依法測定。以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)作圖，得近似通過原點(diǎn)的直線。回歸方程為 Y＝199 353．5 X＋10 709．17，r＝0．999 8（n＝6）。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA進(jìn)樣量在 0．033～0．165 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2．1．3 供試品溶液制備

取干膏0．7 g，研細(xì)，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇40 mL，超聲處理1 h，取出，放至室溫，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，濾液用微孔濾膜（0．45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．1．4 含量測定方法

精密吸取2．1．3項(xiàng)下方法制備的供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，每份樣品測定2次，峰面積取2次平均值。

2．2 提取工藝考察

2．2．1 因素水平確定

為了尋求丹參藥材乙醇提取的最佳工藝條件，擬以正交試驗(yàn)表 L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)，其中提取次數(shù)為因素A，乙醇用量為因素B，乙醇濃度為因素C，提取時(shí)間為因素D，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2．2．2 考察指標(biāo)

由于丹參中主要有效成分為丹參酮ⅡA，故確定以出膏量、干膏中含丹參酮ⅡA的量為考察指標(biāo)。干膏率（%）＝干膏質(zhì)量／提取的藥材量×100%，干膏中丹參酮ⅡA的量＝干膏重×百分含量(%)＝干膏重×（樣品峰面積×對照品進(jìn)樣量×對照品質(zhì)量濃度×定容體積）／(對照品峰面積×樣品進(jìn)樣量×稱樣量)×100%。

2．2．3 正交試驗(yàn)與結(jié)果

準(zhǔn)確稱取5倍處方量藥材9份，每份800 g，按表1進(jìn)行提取，合并提取液，濾過，濾液濃縮并減壓干燥（真空度為0．08 MPa，溫度為 80℃），粉碎，稱量，取一定量的干膏粉，按 2．1．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2．1．4項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測定，按正交試驗(yàn)軟件設(shè)計(jì)表格，并進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表2和表3。可見，以干膏得量為指標(biāo)進(jìn)行方差分析所得的最佳條件是A2B2C2D3，以干膏中含丹參酮ⅡA的量為指標(biāo)進(jìn)行方差分析所得的最佳工藝條件也是A2B2C2D3，所得結(jié)果一致。由這兩個結(jié)果可見，影響乙醇提取的主要因素是提取次數(shù)及溶劑量，其次是提取時(shí)間和乙醇濃度。因此，最終確定的最佳工藝是，乙醇濃度為70%，溶劑量為6倍，提取時(shí)間為3 h，提取次數(shù)為2次。

表2 乙醇提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果（干膏量）

表3 乙醇提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表與結(jié)果分析（丹參酮ⅡA含量）

2．2．4 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

為了進(jìn)一步驗(yàn)證所選工藝條件A2B2C2D3，進(jìn)行如下試驗(yàn)。取丹參8 000 g共3份，分別按上述工藝條件A2B2C2D3進(jìn)行提取，合并提取液，濃縮并減壓干燥得干膏，稱定干膏量并測定干膏中含丹參酮ⅡA量。結(jié)果見表4。可見，丹參乙醇最佳提取工藝條件可行。

表4 最佳提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果(g)

3 討論

丹參酮ⅡA為處方中丹參的脂溶性指標(biāo)性成分，具有較好的生理活性[1]，主要有抗炎、抑菌、改善血循環(huán)、抗癌等作用[2－7]。本試驗(yàn)中以干膏量及干膏中含丹參酮ⅡA的量為考核指標(biāo)，較以單一成分為指標(biāo)考察更能全面地體現(xiàn)中藥復(fù)方藥效物質(zhì)的作用。

考慮到大生產(chǎn)時(shí)提取時(shí)間太短，有效成分不易提取完全；提取時(shí)間太長，又費(fèi)時(shí)，且會提高成本。因此，提取時(shí)間選擇為1，2，3 h 3種水平。

稱取丹參藥材適量，加5倍量乙醇就可浸沒藥材；加溶劑量太大，不但浪費(fèi)溶劑，而且會使成本過高。因此，選擇溶劑量為5，6，7 倍。

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