高效液相色譜法測(cè)定接骨丹片中人參皂苷R g1含量

陳武軍，林永山

(1.福建省漳州市中醫(yī)院，福建 漳州 363000； 福建省漳州市同溢堂藥業(yè)有限公司，福建 漳州 363000)

接骨丹片由三七、制馬錢(qián)子、骨碎補(bǔ)、煅自然銅、紅花、當(dāng)歸、丹皮、續(xù)斷、土鱉蟲(chóng)、白芍、茯苓、木香、兒茶、公丁香、沉香、制大黃、蓮子、桔梗等中藥組方，是漳州市中醫(yī)院的特色制劑之一，為骨傷科專(zhuān)科用藥，已在臨床應(yīng)用40多年[1]。其具有續(xù)筋接骨、通絡(luò)消腫止痛之功效，用于骨折中、后期治療和急性軟組織挫傷。為控制其質(zhì)量，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[2]，對(duì)接骨丹片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)。人參皂苷Rg1對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110703-201108)；接骨丹片(委托方為漳州市中醫(yī)院，受托方為同溢堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20120501)；乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil C18柱(250mm×4.6mm，10μm，大連依利特科學(xué)儀器公司)；流動(dòng)相:乙腈-水(19∶81)；流速:1.0mL/min；柱溫:室溫；檢測(cè)波長(zhǎng):203nm；進(jìn)樣量:10μL。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取人參皂苷Rg1對(duì)照品10 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0.4 g/L的人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液。取接骨丹片20片，研細(xì)，取約2.0 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加乙醚適量，置水浴上回流2 h，棄去乙醚液，取出濾紙筒揮盡乙醚，藥渣轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，精密稱(chēng)定，加熱回流2 h，放冷，再精密稱(chēng)定，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取25 mL，置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取5次(20，20，10，10，10 mL)，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 mL，棄去水液，正丁醇回收至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按處方比例稱(chēng)取除三七外的其他藥材，按生產(chǎn)工藝制成陰性對(duì)照樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。分別取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，樣品中其他成分對(duì)人參皂苷Rg1的測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液(0.4g/L)2，4，8，12，16，20，24 μL，分別注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定峰面積，得回歸方程 Y=360 291X-19 582，r=0.999 6(n=7)。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1進(jìn)樣量在0.843 2-5.902 4 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為0.45%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品6份(批號(hào)為20120501)，分別精密稱(chēng)定，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果平均含量為0.982 4 mg/g，RSD為1.4%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，8，24 h 時(shí)進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD 為0.82%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為20120501)6份，每份1.0 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果3批樣品中人參皂苷Rg1的含量分別為0.986 7，1.001 3，0.981 6 mg/g。

表1 人參皂苷Rg1加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3 討論

曾采用如下方法提取樣品:樣品置索氏提取器中，精密加入甲醇30 mL，置80℃水浴上加熱回流3 h，殘?jiān)鼡]干，加水10 mL使溶解，加石油醚(30～60℃)提取2 h，每次10 mL，棄去醚液，水液通過(guò)D101大孔樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，長(zhǎng)15 cm)，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用20%乙醇洗脫，棄去洗脫液，用80%乙醇洗脫，收集洗脫液70 mL，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。但由于雜質(zhì)較多，分離效果不好，故采用文中的樣品提取方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:11.

[2]張立軍.高效液相色譜法測(cè)定通脈降脂片中人參皂苷Rg1含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17(20):29.