高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿中鹽酸麻黃堿的含量

張曉燕，孫 雪

(1.河北省衡水市哈勵(lì)遜國(guó)際和平醫(yī)院藥學(xué)部，河北 衡水 053000；2.河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 衡水 053000)

復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿收載于《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)地標(biāo)升國(guó)標(biāo)》第七冊(cè)，主治咳嗽、多痰，也可用于喘息性支氣管炎引起的咳嗽。其主要成分有鹽酸麻黃堿、遠(yuǎn)志流浸膏、紫菀流浸膏、桔梗流浸膏、氯化銨、芳香醑等，其中鹽酸麻黃堿為麻黃中主要有效成分。原標(biāo)準(zhǔn)中未設(shè)含量測(cè)定項(xiàng)，為更好地控制藥品的質(zhì)量，對(duì)復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究。經(jīng)方法學(xué)考察及陰性對(duì)照試驗(yàn)，結(jié)果試驗(yàn)中其他組分對(duì)鹽酸麻黃堿的測(cè)定無(wú)干擾，表明該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可作為復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

AG135型電子天平；PB20型標(biāo)準(zhǔn)酸度計(jì)；UV-2401 PC型紫外分光光度計(jì)；Agilent 1100型高效液相色譜儀。鹽酸麻黃堿對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為171241-201007，供含量測(cè)定用)；復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿(河北美圖制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為120302，120407，121205)；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:迪馬公司生產(chǎn)的 C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺(10∶90∶0.1)[1]；柱溫:30 ℃；流速:1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng):207 nm；進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品14.72 mg，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

精密量取供試品20 mL，置分液漏斗中，加水10 mL，搖勻，用乙醚液提取 3 次(30，30，30 mL)，合并乙醚液，水浴(50 ℃)蒸干，用10 mL甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，再精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液[2]。取按處方比例并以相同工藝制備的不含鹽酸麻黃堿的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):在擬訂色譜條件下，分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察:精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品14.72 mg，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取 1.0，2.0，3.0，5.0，10.0，20.0 mL，置 50 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，各取20 μL依法進(jìn)樣，按擬訂色譜條件測(cè)定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=7.71×102X+1.018，r=0.999 8(n=6)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.060 0～1.500 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件依法重復(fù)進(jìn)樣5次，按鹽酸麻黃堿的峰面積計(jì)算。結(jié)果的 RSD為0.2%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為120302)樣品6份，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法，平行制備6份，依法進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果的 RSD為0.6%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):將同一供試品溶液于室溫下放置 0，2，4，6，8，12 h測(cè)定，按鹽酸麻黃堿的峰面積計(jì)算。結(jié)果的 RSD為1.2%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密量取供試品20 mL，精密加鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定[3-5]

取3批樣品，分別按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件依法進(jìn)樣測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中麻黃堿的含量。結(jié)果批號(hào)為120302，120407，121205的復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿中每1mL含鹽酸麻黃堿 0.35，0.35，0.36mg。

3 討論

本試驗(yàn)中曾采用了多種流動(dòng)相，先后用了甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺，經(jīng)試驗(yàn)比較，以乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺(10∶90∶0.1)作為流動(dòng)相，鹽酸麻黃堿的峰形好，分離度好，保留時(shí)間適中。試驗(yàn)中采用了多種試劑對(duì)樣品中的麻黃堿進(jìn)行提取，先后用石油醚、正丁醇、乙醚進(jìn)行提取，結(jié)果表明用乙醚提取完全，并且色譜圖的峰形好。用紫外分光光度計(jì)測(cè)得供試品溶液中的鹽酸麻黃堿在207 nm波長(zhǎng)處吸收最佳。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:777.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:587.

[3]蔡俊安.高效液相色譜法測(cè)定傷風(fēng)停膠囊中鹽酸麻黃堿含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19(10):39.

[4]魏 萍.高效液相色譜法測(cè)定定喘止咳膠囊中鹽酸麻黃堿含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21(9):28.

[5]董嘉德，戴德雄，宋 瑩.HPLC法測(cè)定克咳軟膠囊中鹽酸麻黃堿[J].中草藥，2009，40(12):1 915-1 917.