軟骨凝集蛋白與C-myc在人非小細胞肺癌中的表達及其意義

文 浩，劉明建，曾湘寧

（鎮安縣人民醫院胸外科1、病理科2，陜西 鎮安 711500）

軟骨凝集蛋白與C-myc在人非小細胞肺癌中的表達及其意義

文 浩1，劉明建2，曾湘寧1

（鎮安縣人民醫院胸外科1、病理科2，陜西 鎮安 711500）

目的探討軟骨凝集蛋白（Chondrolectin,CHODL）與C-myc在人非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理特征之間的關系。方法采用免疫組織化學方法檢測53例非小細胞肺癌石蠟標本以及43例癌旁對照組織標本，并進行相關分析。結果CHODL主要分布在胞質與胞膜中，其在癌組織中的陽性表達率為79.25%，明顯高于在癌旁組織中的表達（18.60%），C-myc在癌組織中的表達率為60.37%，明顯高于其在癌旁組織中過度表達（30.23%），且差異均具有統計學意義；CHODL在癌組織中的表達與淋巴結轉移有關，而與年齡、性別、組織分化、TNM分期、腫塊大小均無關；C-myc在非小細胞肺癌組織中的表達與淋巴結轉移、組織學分化、TNM分期有關（P＜0.05），與年齡、性別、腫塊大小無關（P＞0.05），且差異具有統計學意義；CHODL與C-myc在肺癌組織中的表達呈正相關。結論CHODL在肺癌組織中的作用可能與C-myc呈某種程度的相關性，并與腫瘤淋巴結轉移相關，為CHODL在腫瘤轉移方面打下基礎。

肺癌；軟骨凝集蛋白；C-myc；腫瘤標志物

肺癌為目前全世界最常見的惡性腫瘤之一，隨著環境污染的加重，其發病率亦呈逐年上升趨勢發展[1]。肺癌的發展為多因素、多階段、多基因變異的結果，發病較為隱匿，早期發現就診的患者極少，往往發現時都已經進展為晚期階段，預后較差。因而尋找一種特異性的分子靶點，進行針對性的早期診斷與靶向治療為近年來研究熱點。軟骨凝集蛋白(Chondrolectin，CHODL)為新發現的蛋白，之前研究主要集中在其在人體正常組織中表達情況，如睪丸血管平滑肌、前列腺平滑肌等[2]，然而新近研究發現CHODL在人肺癌組織中高表達，且與腫瘤的侵襲相關[3]。C-myc為一種原癌基因，其在核內表達一種特異性DNA結合蛋白[4]，研究發現C-myc在人類乳腺癌[5]、胃癌[6]、腎癌[7]、結腸癌[8]、彌漫性大B細胞瘤[9]等多種惡性腫瘤中高表達，參與到細胞分化、凋亡、周期與增值等過程。本研究首次探討CHODL在非小細胞肺癌組織中的表達情況，并且進一步研究其與C-myc在非小細胞肺癌組織中表達的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究所用標本均來自我院2007年12月至2012年12月期間手術切除，并經病理學確診為非小細胞肺癌石蠟標本，共計53例。其中男性35例，女性18例；年齡39～74歲，中位年齡58歲；伴淋巴結轉移43例，不伴淋巴結轉移10例；高分化18例，中分化22例，低分化13例。TNM分期標準：局限于黏膜或黏膜下層的早期胃癌定為T1；侵及胃壁肌層，但大小不超過一個分區的1/2者為T2；腫瘤侵及胃壁漿膜層，或雖未侵及漿膜層，但病變已大于一個分區的1/2，但未超出一個分區定位者為T3；腫瘤占一個分區以上或已累及周圍臟器定位者為T4。TNM分期T1期和T2期共34例，T3期與T4期共19例；其中T1+T2組28例，T3+T4組39例。腫瘤≥3 cm者31例，＜3 cm者22例。另取自距癌組織邊緣5 cm以上的組織，均經HE染色證實無腫瘤細胞浸潤，無明顯細胞增生等病變的癌旁組織43例。所有的病例術前均無化療、放療及免疫治療史。

1.2 方法 所有切片均使用4%的多聚甲醛固定，然后進行石蠟包埋，常規制備4 μm厚度連續切片，使用免疫組化SP法進行檢測。嚴格按照說明書依次進行二甲苯脫蠟，檸檬酸緩沖液進行抗原修復，10%正常羊血清室溫孵育，一抗-4度過夜(CHODL抗體購自Santa Cruz公司，貨號：sc-54867，稀釋為1:200；C-myc抗體購自Santa Cruz公司，貨號：sc-40，稀釋為1:300)，進而常溫二抗孵育、DAB顯色等步驟。使用PBS代替一抗作為陰性對照。SP試劑盒與DAB顯色劑均購自中山金橋生物有限公司。

1.3 結果判定 根據參考文獻[10]，采用半定量積分方法，每張切片選擇5個高倍視野，計數不少于1 000個細胞，依據視野下陽性細胞數進行評分：陽性細胞數為0～24%為1分，25%～49%為2分，50%～74%為3分，＞75%為4分。依據染色強度評分：細胞未著色或呈淡黃色為0分，棕黃色為1分，棕褐色為2分。采用將顯色深淺與顯色范圍評分相乘的方法進行綜合評分，而為便于統計分析，統一將0～3分為陰性，4～8分為陽性。

1.4 統計學方法 使用SPSS18.0統計軟件對結果進行處理，計數資料的組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗，配對資料采用Spearman秩相關性分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 CHODL與C-myc在人非小細胞肺癌中的表達情況 結果顯示，CHODL主要分布在胞質與胞膜中，53例癌組織中有42例高表達CHODL，其高表達率為79.25%，明顯高于CHODL在癌旁組織中的表達率(8/43，18.60%)，差異有統計學意義(χ2=34.980，P＜0.05)；而C-myc在癌組織中的表達率為60.37%(32/53)，明顯高于其在癌旁組織中過度表達(13/43，30.23%)，差異具有統計學意義(χ2=8.663，P＜0.05)，見圖1～圖4。

圖1 CHODL在非小細胞肺癌組織中的強陽性表達（×400）；圖2 C-myc在非小細胞肺癌組織中的陽性表達（×400）；圖3 陰性對照（×200）；圖4 癌旁組織（×200）。

2.2 CHODL與C-myc的表達與臨床病理參數之間的關系 CHODL在非小細胞肺癌組織中的表達與淋巴結轉移有關，差異具有統計學意義(χ2=4.221，P=0.040)，而與年齡、性別、組織分化、TNM分期、腫塊大小均無關(P＞0.05)；C-myc在非小細胞肺癌組織中的表達與淋巴結轉移(χ2=6.448，P=0.011)、組織學分化(χ2=8.286，P=0.016)、TNM分期(χ2=19.145， P=0.000)有關，而與年齡、性別、腫塊大小無關(P＞0.05)，見表1。

2.3 CHODL與C-myc在非小細胞肺癌組織中表達的關系 結果顯示，53例癌組織中CHODL與C-myc同時高表達者29例，同時低表達者8例，兩者表達呈正相關，且差異具有統計學意義(r=0.346，P=0.012)，見表2。

表1 CHODL與C-myc在非小細胞肺癌組織中的表達與臨床病理參數之間的關系(例)

表2 CHODL與C-myc在非小細胞肺癌組織中表達的相關性(例)

3 討 論

靶向治療由于其針對性強，腫瘤殺傷作用明顯，副作用低，一直為近年來腫瘤治療研究的熱點。CHODL位于21號染色體長臂，為C型凝集素家族中的一員，可以編碼一條具有碳水化合物識別區域的跨膜溶解蛋白，參與到糖蛋白的內吞作用，由于主要定位在細胞核周圍的區域，因而轉錄過程的變異可導致其出現一些變異蛋白。C型凝集素家族是一組動物蛋白質，其發揮作用的鈣離子依賴性的碳水化合物結合區并不是必須的，從而區別于其他凝集素。之前的研究發現CHODL的生理作用主要包括細胞的識別、細胞之間的通信、細胞與細胞之間粘附、細胞外基質與細胞之間的粘附等[11]，如一些依賴于蛋白凝集素家族的蛋白聚糖，在細胞外基質結構的穩定性維持上，以及ECM與外界細胞交互作用之間具有重要的作用[12]。

研究發現CHODL的結合體在T淋巴細胞中具有不同程度的表達，白細胞與內皮細胞之間的相互作用部分依賴于C型凝集素跨膜結合域的體現的選擇作用[13]。凝集素與胚胎的發育和免疫反應密切相關，主要通過與分子之間的識別而發揮作用。一些鈣連接蛋白，如鈣網蛋白，這些蛋白結合到錯誤折疊蛋白上后可以阻止錯誤蛋白從內質網向高爾基體的輸送，因而如果發生在腫瘤細胞中可能會有相似的作用，從而阻止致瘤蛋白的產生。Masuda等[14]的研究發現，CHODL在肺癌的發生發展中具有重要的作用，并參與到腫瘤的侵襲與轉移。本研究發現CHODL在非小細胞肺癌中明顯高于其在癌旁組織中的表達。

C-myc為一種原核基因，人C-myc基因定位于第8條染色體上，由3個外顯子和2個內含子組成，其表達產物主要定位于細胞核，為細胞傳導的下游基因，作為反式作用因子，可以直接激活轉錄活性的轉錄因子樣作用，決定細胞從G0/G1向S期轉變[15]。C-myc對細胞具有雙重作用，既可以刺激細胞凋亡，也可促進細胞增殖。研究發現C-myc蛋白的羧基端含核酸靶序列，氨基酸富含谷氨酰氨和脯氨酸，而這些都為腫瘤轉化所必需的氨基酸[16]。研究表明C-myc在人類多種惡性腫瘤中都有表達[17]。本研究亦發現C-myc在人非小細胞肺癌組織中高表達，與之前的研究結果類似。

綜上所述，本研究首次發現CHODL在人非小細胞肺癌組織中明顯高表達，且其表達與腫瘤淋巴結轉移與否密切相關，而C-myc同樣在非小細胞肺癌組織中的表達亦明顯高于其癌旁組織，且與淋巴結轉移，腫瘤分化程度，TNM分期密切相關。兩者的相關性分析發現CHODL與C-myc在非小細胞肺癌組織中的表達呈正相關，但兩者具體機制還有待我們進一步的探討，以期CHODL能夠成為非小細胞肺癌診斷與治療的新靶點。

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Expression and clinical significance of chondrolectin and C-myc in human non-small cell lung cancer.WEN

Hao1,LIU Ming-jian2,ZENG Xiang-ning1.
Department of Thoracic Surgery1,Department of Pathology2,County People's Hospital of Zhenan,Zhenan 711500,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of chondrolectin and C-myc in human non-small cell lung cancer and their clinical implication.MethodsImmunohistochemical study was carried out to examine the expression of chondrolectin and C-myc and its association with clinicopathologic features in human non-small cell lung cancer.ResultsThe positive rate for chondrolectin and C-myc expression in squamous tissues (79.25%and 60.73%)was significantly higher than those in non-tumor tissues(18.60%and 30.23%);the positive expression of chondrolectin was not correlated with the patient's gender,age and histologic differentiation except that lymph node metastasis,the positive expression of C-myc was correlated with the patient's lymph node metastasis,histologic differentiation and TNM stage,but without gender,age and size.In non-small cell lung cancer chondrolectin was positively correlated with C-myc.Conclusion Chondrolectin may be an important molecular marker in human non-small cell lung cancer.

Lung cancer;Chondrolectin;C-myc;Cancer marker

R734.2

A

1003—6350（2014）09—1262—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.09.0490

2013-10-21)

文 浩。E-mail：wenhaohhh@163.com