肝X受體通過NF-κB信號通路減輕高糖誘導的H9C2細胞凋亡

雷梅先，王云開，殷 然，李衛(wèi)勇，王迎春

（1.九江市第一人民醫(yī)院心血管內科，江西 九江 332000；2.南昌大學第一附屬醫(yī)院心血管內科，江西省高血壓病研究所，3.江西省腫瘤醫(yī)院，江西 南昌 330006）

長期處于高糖環(huán)境的細胞，核酸和脂類物質面對被氧化的趨勢，活性氧簇激活糖基化終產物形成，蛋白激酶C及腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)（reninangiotensin system，RASS）激活等途徑使核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）激活［1－3］。NF-κB激活后核內轉移，抗凋亡作用減弱；同時激活各種炎性因子的產生，而這些促炎因子又刺激NF-κB的不斷活化，并增強Caspase-3的活性，導致細胞凋亡增加。研究已經證實，心肌細胞凋亡導致心肌重塑參與了糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy，DCM）的發(fā)生發(fā)展，NF-κB是參與細胞凋亡的關鍵因子。肝X受體（liver X receptors，LXRs）屬于配體激活型轉錄因子的核受體超家族成員，主要包括 LXRα和LXRβ兩個亞型，參與機體多種生理活動的調節(jié)，包括膽固醇代謝、脂肪代謝、糖代謝和炎癥調控等過程［4］。近年研究證實，通過 LXR途徑拮抗 NF-κB信號轉導通路，抑制炎癥基因NF-κB的表達，人工合成的LXR激動劑TO901317治療脊髓損傷的實驗模型中，通過減少促凋亡基因Bax及上調抑凋亡基因Bcl-2的表達，產生細胞凋亡保護的作用［5］。深入研究LXRs在DCM中的作用，對揭示DCM發(fā)病機制及尋找有效防治DCM心肌細胞凋亡具有重要的意義。

本實驗采用高糖培養(yǎng)H9C2細胞，攜帶Nr1h2（LXRβ）和Nr1h3（LXRα）基因及空載體的重組慢病毒成功感染高糖培養(yǎng)的H9C2細胞以構建過表達LXRs模型，觀察其對高糖培養(yǎng)H9C2細胞的影響，探討其作為分子靶點用于DCM防治的潛在價值。

1 材料與方法

1.1 材料 H9C2細胞購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心的大鼠胚胎心肌細胞；低糖培養(yǎng)基、高糖培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Hyclone公司；葡萄糖粉、甘露醇粉購自美國Simga公司；含Nr1h2、Nr1h3基因及空載體的慢病毒、感染添加劑、感染增強溶液購自上海吉凱基因化學技術有限公司；CCK-8溶液、細胞核蛋白提取試劑盒、Hoechst 33342購自上海碧云天生物技術有限公司；TRIzol reagent、聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）引物購自美國 Invitrogen公司（Tab 1）；Firststrand cDNA synthesis kit、qPCR Mix購自美國 Gene Copoeia公司；總蛋白提取試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒購自Vazyme有限公司；兔抗NF-κB p65磷酸化抗體購自CST公司；兔抗Cleaved caspase-3抗體購自Cell Signaling公司；鼠抗Bax抗體購自美國Santa Cruz公司；鼠抗 Bcl-2抗體、小鼠 anti-β-actin、辣根酶標記山羊抗小鼠IgG、辣根酶標記山羊抗兔IgG購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 LXRs過表達慢病毒載體的構建及轉染

1.2.1 慢病毒載體的構建 從含有目的基因的質粒中將Nr1h2和Nr1h3酶切下來，酶切GV287載體使其線性化，將Nr1h2和Nr1h3片段交換入線性化慢病毒載體，后轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，從大腸桿菌篩選出正確的載體克隆：GV287-Nr1h2和GV287-Nr1h3。PCR鑒定引物 Nr1h2，KL4081-P3：TGCAACAAGCGATCTTTCTC，EGFP-N-R：CTGGTCGAGCTGGACGGCGACG。Nr1h3，KL4077-P3：CTGGGCATGATTGAGAAGTTG，EGFP-N-R：CTGGTCGAGCTGGACGGCGACG。

Tab 1 Primer sequences for qRT-PCR

1.2.2 H9C2細胞轉染及鑒定 本課題組前期實驗證實空載體病毒滴度約為1.5×109TU·ml－1，目的基因病毒滴度約為2×108TU·ml－1；確定 H9C2細胞感染復數(shù)（multiplicity of infection，MOI）＝40為最佳感染復數(shù)，其最佳感染時間為72 h。

H9C2細胞低糖培養(yǎng)24 h，當細胞融合至40%，以MOI為40進行轉染，具體操作參照Lentiviral Vector Particle進行，制備H9C2 LXRs過表達細胞模型。

熒光顯微鏡下轉染效率觀察：攜帶綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）慢病毒熒光鏡下呈綠色熒光表達，轉染72 h后，用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌細胞3次，熒光顯微鏡下觀察熒光照片和同視野下明場的細胞照片。

熒光轉染效率／%＝熒光細胞數(shù)／同視野下白光所見細胞總數(shù) ×100%。實時定量逆轉錄 PCR（quantitative real-time RT-PCR，qRT-PCR）檢測轉染效果：以高糖未轉染組為陰性對照組，轉染72 h后，用qRT-PCR檢測LXRα和LXRβmRNA的表達。

1.3 方法

1.3.1 細胞分組 H9C2細胞分為6組：①對照組：正常（5.5 mmol·L－1葡萄糖）培養(yǎng) H9C2細胞；②甘露醇組：正常培養(yǎng)24 h后換液，加入5.5 mmol·L－1葡萄糖 ＋27.5 mmol·L－1甘露醇繼續(xù)培養(yǎng)；③高糖組：正常培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后換液，加入33 mmol·L－1葡萄糖繼續(xù)培養(yǎng)；④GFP組：低糖培養(yǎng)24 h后感染空載體慢病毒，8 h后PBS洗滌，加入33 mmol·L－1葡萄糖繼續(xù)培養(yǎng)；⑤LXRα組：正常培養(yǎng)24 h后感染攜帶Nr1h3基因的慢病毒，8 h后PBS洗滌，加入33 mmol·L－1葡萄糖繼續(xù)培養(yǎng)；⑥LXRβ組：正常培養(yǎng)24 h后感染攜帶Nr1h2基因的慢病毒，8 h后PBS洗滌，加入33 mmol·L－1葡萄糖繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3.2 CCK-8檢測細胞增殖抑制率 采用CCK8法檢測H9C2細胞增殖抑制率。H9C2細胞消化后計數(shù)，加入100μl細胞懸液（約5 000個細胞）于96孔板，每組6個復孔，每孔加入10μl CCK-8，另設置沒有加入細胞的空白對照孔，孔中加入相應培養(yǎng)基和CCK-8溶液，37℃培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育0.5～4 h，期間每間隔1 h用酶標儀檢測450 nm處的光密度（optical density，OD）值。

1.3.3 qRT-PCR法檢測各組細胞 Bax、Bcl-2 mRNA表達 提取各組細胞RNA，分光光度計檢測RNA純度及濃度（RNA原液濃度（mg·L－1）＝OD260×40×稀釋倍數(shù)，純度要求：OD260／OD280比值為 1.8～2.1之間）。按濃度計算出2μg RNA逆轉錄合成cDNA，取2μl cDNA進行qRT-PCR，以GADPH作為內參對照，檢測 Bax mRNA，Bcl-2 mRNA水平。Bax、Bcl-2、GADPH引物序列見 Tab 1。ΔCt值 ＝樣本基因Ct值－對應內參Ct值，取參照組的平均ΔCt值為對照，ΔΔCt值＝每個樣本ΔCt值－參照組的ΔCt值，計算出 2－ΔΔCt值后進行統(tǒng)計分析。

1.3.4 Western blot法檢測 H9C2細胞 NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、蛋白量 分別提取各組細胞的細胞核蛋白、總蛋白，用BCA法蛋白定量檢測，取等量蛋白質進行SDS-PAGE和電轉移至NC膜，先后行一抗及二抗封閉，按照Supcrsignal west fomto trial kit試劑盒進行操作，于化學發(fā)光成像儀中進行曝光，檢測 NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白表達。目的蛋白相對表達量＝目的蛋白條帶光密度值／β-actin條帶光密度值，再以Control組為標準，進行統(tǒng)計學分析。

1.3.5 Hoechst 33342細胞凋亡染色 取出6孔板培養(yǎng)的細胞，PBS洗滌后加入4%多聚甲醛固定細胞30 min，PBS洗滌；按說明書操作，加入預混Hoechst33342染色液，均勻覆蓋后避光、37℃孵育30 min，充分洗滌后置于倒置熒光顯微鏡下觀察。

細胞凋亡率／%＝凋亡細胞數(shù)／同視野下細胞總數(shù)×100%

1.4 統(tǒng)計學處理 所有實驗數(shù)據(jù)均用ˉx±s表示，應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用方差分析。

2 結果

2.1 慢病毒感染H9C2效果 熒光鏡下慢病毒感染H9C2細胞表達綠色熒光，qRT-PCR檢測LXRα、LXRβmRNA表達較未感染組明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見 Fig 1、2。

2.2 過表達LXRs對高糖培養(yǎng)H9C2細胞增殖抑制率的作用 與對照組相比，高糖組、GFP組H9C2細胞細胞增殖抑制率明顯增高（P＜0.01），甘露醇組細胞增殖抑制率無差異（P＞0.05）；LXRα明顯降低高糖培養(yǎng)細胞增殖抑制率（P＜0.01）；LXRβ降低高糖培養(yǎng)細胞增殖抑制率（P＜0.05）；而GFP組與高糖組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見 Tab 2，F(xiàn)ig 3。

Tab 2 Cell inhibition rate（%±s，n＝3）

Tab 2 Cell inhibition rate（%±s，n＝3）

Group ˉx s Control 0 0 Mannitol 1 1.72 High glucose 42.08 0.63 GFP 41.93 1.52 LXRα 17.22 2.34 LXRβ 36.62 2.30

Fig 1 Transfection effect of fluorescent lentivirus in H9C2 cells A：LXRα（×100）；B：LXRβ（×100）；C：GFP（×100）

Fig 2 The LXRαmRNA and LXRβmRNA expression after transfection lentivirus of LXRα，LXRβor empty vector respectively in H9C2 cells（xˉ±s，n＝3）**P＜0.01 vs high glucose

Fig 3 Proliferation inhibition rate of H9C2 cells（ˉx±s，n＝3）**P＜0.01 vs control；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs high glucose

2.3 過表達 LXRs對高糖培養(yǎng) H9C2細胞 Bax m RNA、Bcl-2 mRNA表達的影響 與對照組相比，高糖組與GFP組Bax上調及Bcl-2下調表達明顯（P＜0.01），甘露醇組BaxmRNA、BclmRNA無差異（P＞0.05）；LXRα明顯抑制高糖培養(yǎng) H9C2細胞Bax上調及Bcl-2下調表達（P＜0.01），LXRβ抑制高糖培養(yǎng)H9C2細胞Bax上調及Bcl-2下調表達（P＜0.05）；GFP組 BaxmRNA、BclmRNA與高糖組無差異（P＞0.05）。見 Fig 4。

2.4 過表達LXRs對高糖培養(yǎng)H9C2細胞NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白量的影響與對照組相比，高糖組與 GFP組 NF-κB p65、Bax、Cleaved caspase-3蛋白均明顯增高，Bcl-2蛋白降低（P＜0.01），甘 露 醇 組 NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白無差異（P＞0.05）；LXRα組明顯抑制高糖培養(yǎng) H9C2細胞 NF-κB p65、Bax、Cleaved caspase-3蛋白，上調Bcl-2蛋白（P＜0.01）；LXRβ抑制高糖培養(yǎng) H9C2細胞 NF-κB p65、Bax、Cleaved caspase-3蛋白，上調Bcl-2蛋白（P＜0.05）；GFP組 NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白與高糖組無差異（P＞0.05）。見 Fig 5、6。

2.5 過表達LXRs對高糖培養(yǎng)H9C2細胞凋亡的影響 與對照組相比，高糖組與GFP組細胞凋亡率均明顯增高（P＜0.01），甘露醇組細胞凋亡率無差異（P＞0.05）；LXRα明顯降低高糖培養(yǎng) H9C2細胞凋亡率（P＜0.01）；LXRβ降低高糖培養(yǎng) H9C2細胞凋亡率（P＜0.05）；GFP組細胞凋亡率與高糖組無差異（P＞0.05）見 Tab 3，F(xiàn)ig 7、8。

Fig 4 Effects of LXRs overexpression on changes of Bax，Bcl-2 level in H9C2 cells cultured in high glucose（xˉ±s，n＝3）**P＜0.01 vs control；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs high glucose

Fig 5 Effects of LXRs overexpression on changes of NF-κB p65 protein level in H9C2 cells cultured in high glucose（±s，n＝3）**P＜0.01 vs control；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs high glucose

Tab 3 H9C2 cells apoptosis after lentiviral transfection（%ˉx±s，n＝6）

Tab 3 H9C2 cells apoptosis after lentiviral transfection（%ˉx±s，n＝6）

Groupˉx±s Control 5.9±0.88 Mannitol 6.1±0.88 High glucose 15.5±1.96 GFP 14.9±3.11 LXRα 11.8±1.48 LXRβ13.1±2.08

Fig 6 Effects of LXRs overexpression on changes of Bax，Bcl-2 and cleaved caspase-3 protein level in H9C2 cells cultured in high glucose±s，n＝3）**P＜0.01 vs control；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs high glucose

3 討論

隨著人們生活水平的不斷提高，生活習慣及生活方式的改變，社會人口老齡化的出現(xiàn)，糖尿病發(fā)病率逐年上升。長期的高血糖可以引起眼、腎、神經、心臟、血管等重要器官的損害，糖尿病慢性并發(fā)癥已成為糖尿病致殘、致死的主要原因。糖尿病心血管并發(fā)癥包括心臟和大血管上的微血管病變、心肌病變、心臟自主神經病變和冠心病，是2型糖尿病患者的首要死亡原因［6］。DCM是糖尿病獨立的并發(fā)癥，是糖尿病引起心臟微血管病變和心肌代謝紊亂所致心肌的廣泛局灶性壞死；其發(fā)病機制涉及糖脂代謝紊亂、胰島素抵抗、氧化應激、RASS激活、心臟自主神經病變、心肌細胞凋亡等；重要特征之一是心肌間質膠原纖維沉積和心肌纖維化，早期通常表現(xiàn)為心肌順應性降低和舒張期充盈受限為主的舒張功能不全，晚期以收縮功能不全為主，易發(fā)生充血性心力衰竭［7］。

高血糖通過NF-κB、p38絲裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶／應激激活蛋白酶、蛋白激酶K、活性氧物質增加和細胞內抗氧化物谷胱甘肽衰竭等導致細胞凋亡［8］。大量的細胞內信號可以引起前-凋亡蛋白Bax的活化，誘導線粒體釋放細胞色素C、形成凋亡小體或啟動caspase-9的活化，該凋亡途徑可被各種抗凋亡蛋白，包括Bcl-2蛋白等凋亡抑制因子所調控。本研究通過H9C2細胞體外高糖培養(yǎng)證實，高糖通過激活NF-κB信號通路，上調促凋亡基因（Bax）及抑制抑凋亡基因（Bcl-2）的表達，啟動凋亡程序，激活凋亡執(zhí)行蛋白（caspase-3）的表達，誘導H9C2細胞凋亡。相關實驗表明，與高糖相同滲透壓的低糖培養(yǎng)對細胞凋亡相關因子及細胞的凋亡未見明顯影響，本實驗中甘露醇組與低糖組NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白及細胞凋亡均無明顯差異［9-10］。

Fig 7 H9C2 cell apoptosis after LXRs overexpressionA：Control；B：Mannitol（×100）；C：High glucose；D：GFP（×100）；E：LXRα；F：LXRβ（×100）

Fig 8 Effects of LXRs overexpression on changes of cell apoptosis rate in H9C2 cells cultured in high glucoseˉx±s，n＝10）**P＜0.01 vs control；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs high glucose

LXRs作為一種氧化型固醇激活的核受體，LXRs包括 LXRα（NR1H3）和 LXRβ（NR1H2）兩種同源亞型，參與機體多種生理活動的調節(jié)，包括膽固醇代謝、脂肪代謝、糖代謝和炎癥調控等過程［4］。LXRs可抑制肝臟糖異生和減少血漿中葡萄糖的濃度，改善胰島素抵抗，促進胰島B細胞分泌胰島素［4，11］，因此有望作為治療2型糖尿病的藥物靶點。LXRs激動劑可以抑制一系列炎癥介質的表達，與LXRs抑制 NF-κB的表達有關［12］。研究證實［13］，在致病菌感染的巨噬細胞，LXRs通過上調抗凋亡因子，緩解巨噬細胞的凋亡。LXRs激動劑GW3695可減輕大鼠腦缺血／再灌注損傷，這一效應與LXRs抑制神經細胞NF-κB活性、降低其靶基因環(huán)氧化酶-2表達有關［14］。小鼠內臟動脈阻斷性休克的研究發(fā)現(xiàn)，LXRs激動劑T0901317通過抑制絲裂原活化蛋白激酶、NF-κB信號通路，調控凋亡相關基因Fas、Bax、Bcl-2的表達，從而減輕內臟器官的再灌注損傷［15］。體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞中復制缺氧／復氧模型，觀察到外源性激活LXRs通過抑制NF-κB活化、減輕心肌細胞炎癥及凋亡［16］。本研究通過LXRs過表達慢病毒載體的構建，轉染高糖體外培養(yǎng)的H9C2細胞，檢測NF-κB及凋亡相關蛋白Cleaved caspase-3、促凋亡及抑制凋亡因子的表達。結果顯示，轉染過表達LXRs慢病毒組NF-κB及凋亡相關蛋白Cleaved caspase-3的表達、Bax mRNA的表達、細胞凋亡率明顯降低，而Bcl-2 mRNA明顯上調，過表達LXRα組更為明顯，表明過表達LXRs明顯抑制高糖環(huán)境 NF-κB的活化，下調 Bax／Bcl-2的比例及Cleaved caspase-3的表達，抑制細胞凋亡的發(fā)生。我們的實驗發(fā)現(xiàn)LXRα減輕高糖誘導H9C2細胞凋亡的作用較LXRβ更為明顯，LXRα、LXRβ兩者在DNA及配體結合域中77%的氨基酸序列具有同一性，LXRα在肝臟高度表達，其他與脂代謝密切的組織也有大量表達，LXRβ在全身各組織中都有廣泛的表達，但其作用的區(qū)別尚待進一步研究。動物實驗結果表明，非選擇性LXRs激動劑上調脂肪酸合成酶的表達，使肝細胞合成甘油三酯增加，引發(fā)高甘油三酯血癥和脂肪肝，還能使低密度脂蛋白膽固醇水平升高［17-20］，潛在的危險性使我們需要設計更高選擇性和組織特異性的的LXRs激動劑。

參考文獻：

［1］ 涂焰明，吳 鏗.炎癥因子—核因子-κB對糖尿病心肌病的影響［J］.國際心血管病雜志，2012，39：28－31.

［1］ Tu Y M，Wu J.Inflammatory-nuclear factor kappa B hanve effect on diabetic cardiomyopathy［J］.Int J Cardiovascul Dis，2012，39：28－31.

［2］ Almeida M，Han L，Ambrogini E，et al.Oxidative stress stimulates apoptosis and activates NF-kappa B in osteoblastic cells via a PKC-beta／p66shc signaling cascade：counter regulation by estrogens or androgens［J］.Mol Endocrinol，2010，24（10）：2030－7.

［3］ Boudina S，Sena S，O’Neill B T，etal.Reducedmitochondrialoxidative capacity and increased mitochondrial uncoupling impairmyocardial energetics in obesity［J］.Circulation，2005：112：2686－95.

［4］ Geyeregger R，Zeyda M，Stulnig TM，et al.Liver X receptors in cardiovascular and metabolic disease［J］.Cell Mol Life Sci，2006，63：524－39.

［5］ Patermiti I，Genovese T，Mazzon E，et al.Liver X receptor agonist treatment regulates inflammatory response after spinal cord trauma［J］.JNeurochem，2010，112：611－24.

［6］ 陳灝珠，林果為.糖尿病［M］.實用內科學，北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：1042.

［6］ Chen H Z，Lin GW，Diabetes［M］.Practice of internalmedicine，Beijing：People’s Medical Publishing House，2010：1042.

［7］ 黃婭茜，王 憲，孔 煒.糖尿病心肌病發(fā)病機制的研究進展［J］.生理科學進展，2010，41：31－6.

［7］ Huang Y X，Wang X，Kong W.Aadvances on pathogenesis of diabetic cardiomyopathy［J］.Progr Phys Sci，2010，41：31－6.

［8］ Thandavarayan R A，Watanabe K，Ma M，et al.Dominant negative p38 alphamitogen-activated protein kinase prevents cardiac apoptosis and remodeling after streptozotocin induced diabetesmellitus［J］.Am JPhysiol Heart Circ Physiol，2009，297：H911－H9.

［9］ Trudeau K，Molina A J，Roy S.High glucose inducesmitochondrial morphology and metabolic changes in retinal pericytes［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，2011，52（12）：8657－64.

［10］Tsai K H，Wang W J，Lin CW，et al.NADPH oxidase-derived superoxide anion-induced apoptosis ismediated via the JNK-dependent activation of NF-κB in cardiomyocytes exposed to high glucose［J］.JCell Physiol，2012，227（4）：1347－57.

［11］Commerford SR，Vargas L，Dorfnan SE，etal.Dissection of the insulin-sensitizing effect of liver X receptor ligands［J］.Mol Endocrinol，2007，21：3002－12.

［12］Liu Y，Yan C，Wang Y，et al.Liver X receptor agonist T0901317 inhibition of glucocorticoid receptor expression in hepatocytesmay contribute to the amelioration of diabetic syndrome in db／db mice［J］.Endocrinology，2006，（147）：5061－8.

［13］Joseph SB，Bradley M N，Castrillo A，et al.LXR-dependent gene expression is important formacrophage survival and the innate immune response［J］.Cell，2004，119：299－309.

［14］Morales JR，BaUesteros I，Deniz JM，et al.Activation of liver X receptors promotes neuroprotection and reduces brain inflammation in experimental stroke［J］.Circulation，2008，118（14）：1450－9.

［15］Crisafulli C，Di Paola R，Mazzon E，et al.Liver X receptor agonist treatment reduced splanchnic ischemia and reperfusion injury［J］.J Leukoc Biol，2009，87（2）：309－21.

［16］殷 然，王夢洪，鄭澤琪，彭景添.肝X受體抑制乳鼠心肌細胞缺氧／復氧損傷［J］.中國病理生理雜志，2011，27（9）：1671－5.

［16］Yin R，Wang M H，Zheng ZQ，Peng JT.Liver X receptors attenuate anoxia／reoxygenation injury in neonatal rat cardiomyocytes［J］.Chin JPathophysiol，2011，27（9）：1671－5.

［17］Zelcer N，Tontonoz P.Liver X receptors as integrators ofmetabolic and inflammatory signaling［J］.JClin Invest，2006，116：607－14.

［18］Shulman A I，Mangelsdorf D J.Retinoid X receptor hetero dimers in themetabolic syndrome［J］.N Engl JMed，2005，353：604－15.

［19］Cha JY，Repa J J.The Liver X receptor（LXR）and hepatic lipogenesis.The carbohydrate-response element-binding protein is a target gene of LXR［J］.JBiol Chem，2007，282：743－51.

［20］Zhou J，F(xiàn)ebbraio M，Wada T，et al.Hepatic fatty acid transporter Cd36 is a common target of LXR，PXR，and PPAR gamma in promoting steatosis［J］.Gastroenterology，2008，134：556－67.