鹽酸沙格雷酯對大鼠體內細胞色素P4502D1／2的影響

許美娟，蔣志濤，趙文珠，臧雨馨，孫冰婷，容 納，鄒建東，居文政

（1.南京中醫藥大學附屬醫院臨床藥理實驗室，江蘇 南京 210029；2.張家港市中醫醫院藥學部，江蘇張家港 215600；3.南京中醫藥大學，江蘇 南京 210002）

鹽酸沙格雷酯（sarpogrelate Hydrochloride，SH）是血小板以及血管平滑肌的5-HT2受體的特異性拮抗劑，它能逆轉5-HT所產生的病理生理學變化，顯示抗血小板聚集、抑制血管收縮、緩解血管痙攣、改善腎臟功能、減少尿蛋白排泄的功能［1－2］，在臨床上主要用于改善慢性動脈閉塞癥引起的潰瘍、疼痛及冷感等缺血性癥狀。此外，SH還對血管平滑肌細胞的生長具有抑制作用，對心臟肥厚的抑制作用及腎臟的保護作用等，因而在臨床上具有廣泛的應用前景［3］。

CYP2D6是人體肝臟內的重要代謝酶，雖然其含量僅占所有CYP酶含量的1%～2%，但是卻負責代謝約30%的處方藥物［4］。體外微粒體抑制實驗表明［5］，沙格雷酯及其主要活性代謝產物M-1對CYP2D6有較強的抑制作用，但其到體內是否存在抑制作用仍需進一步驗證。因此，本實驗以CYP2D的底物右美沙芬（dextromethorphan，DM）為探針，研究了SH對其在大鼠體內過程的影響，為臨床合理用藥提供線索。

1 材料與方法

1.1 動物 ♂ SD大鼠，體質量（230±30）g，由南京中醫藥大學實驗動物中心提供，合格證號SCXX（滬）2009-0008。

1.2 藥品與試劑 鹽酸沙格雷酯 （金陵藥業股份有限公司南京金陵制藥廠，批號：SG140103，含量100.3%），右 美 沙 芬 （Sigma公 司，批 號：097K11348），替硝唑對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100338-200502），乙酸乙酯為分析純（南京化學試劑有限公司，批號：13062010889），乙腈、甲酸銨、甲酸為色譜純 （Merck Company），實驗用水為超純水。

1.3 儀器 Waters Quattro Micro LC-MS／MS液質聯用儀（美國Waters公司），色譜工作站：Masslynx 4.1；Labconco離心濃縮儀（美國照生公司）；梅特勒-托利多AE240電子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）；Biofuge PrimoR冷凍高速離心機（德國Heraeus公司）；Millipore Drict-Q5超純水機（法國Millipore公司）；WH.2微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）。

1.4 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB C18（150 mm×4.6 mm，5μm）（美國 Agilent公司）；保護柱：Agilent Zorbax SB C18（12.5 mm×4.6 mm，5μm）（美國 Agilent公司）；流動相為含0.1%甲酸的4 mmol·L－1甲酸銨（A液）：乙腈（B液）＝25∶75，流速：0.2 ml·min－1；柱溫：35℃。

1.5 質譜條件 離子化方式為電噴霧（ESI）；多反應監測（MRM）；檢測離子為正離子。DM為［M＋H］＋，m／z 272.1～171.1；替硝唑為 ［M＋H］＋，m／z 248.2～121.0。檢測電壓：3.5 kV；錐孔電壓：40 V；離子源溫度：120℃；脫溶劑溫度：350℃；脫溶劑氣體流速：550 L·h－1；碰撞氣能量：37 eV。

1.6 血漿樣品的處理 精密量取血漿樣品50μl，加入內標溶液（2.5 mg·L－1替硝唑甲醇溶液）10 μl，空白甲醇 5μl，旋渦 30 s混勻，加入400μl乙酸乙酯，旋渦震蕩3 min，于4℃ 12 000 r·min－1離心5 min，吸取上層溶液350μl，置離心濃縮儀中于40℃吹干，殘渣用75μl75%的乙腈復溶，旋渦震蕩1 min，于 4℃ 12 000 r·min－1離心5 min后，取上清5μl進樣分析。

1.7 標準曲線的制備 取大鼠空白血漿50μl，加入內標替硝唑溶液（2.5 mg·L－1）10μl，再加入不同濃度的DM的標準溶液5μl，使血漿中 DM的濃度分別為 1、2.5、10、50、200、500和 1000μg·L－1，按“1.6”項下處理。

1.8 動物實驗 動物隨機分為對照組（僅灌胃DM）和鹽酸沙格雷酯（DM和SH合并給藥）組，每組6只。給藥劑量為：對照組DM 10 mg·kg－1，鹽酸沙格雷酯組DM和SH均為10 mg·kg－1。將DM用少量羧甲基纖維素鈉制成混懸液灌胃，SH用水溶解灌胃。

在灌胃給藥前及給藥后的 0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8和 12 h后眼底靜脈叢取血約 0.2 ml，置肝素抗凝試管內，3000 r·min－1離心 5 min，分離血漿存于 －20℃保存。此外，在給藥4 h后，給大鼠灌胃葡萄糖－生理鹽水適量，以補充損失的血容量。葡萄糖-生理鹽水的配制：每500 ml蒸餾水中加入氯化鈉4.5 g和葡萄糖粉25 g，使用前置于37℃恒溫水浴箱預熱。

1.9 統計學分析 用 DAS 2.0藥動學軟件，對求出的DM的血藥濃度和時間數據進行處理，計算其藥動學參數。采用SPSS 10.0統計學軟件對兩組的藥動學數據進行Student’s t檢驗分析。

2 結果

2.1 色譜行為 在所選的試驗條件下，分析物峰形良好，右美沙芬和內標替硝唑的保留時間分別為3.00 min和2.06 min，血漿中的雜質不干擾化合物的測定，色譜圖見Fig 1。

2.2 線性范圍 以 DM與內標峰面積比（Y）為縱坐標，DM濃度為橫坐標，得DM的標準曲線方程為Y＝0.0115X＋0.0045（r＝0.9990）。結果表明，DM在1～1000μg·L－1的范圍內，線性關系良好。右美沙芬的最低定量限為1μg·L－1。

2.3 藥－時曲線 DM單用及合用 SH后的藥-時曲線見Fig 2。由圖可見，合用SH后，DM的血藥濃度升高明顯。

2.4 藥動學參數 DM單用及與SH合用后的DM的藥動學參數見Tab 1。合用SH后，DM的T12較單用明顯延長（P＜0.05），Cmax明顯升高（P＜0.05），AUC0－t及 AUC0－∞明顯增大（P＜0.05），且合用 SH后DM的AUC是單用時的3.2倍。

Fig 1 HPLC chromatograms of a.blank p lasma b.blank p lasma spiked w ith standards（dextromethorphan 150μg·L－1）c.rat p lasma sam p le（1.dextromethorphan；2.tinidazole）

Fig 2 Pharmacokinetic profile of dextromethorphan（DM）in rat p lasma follow ing single and combined introgastric adm inistration of sarpogrelate hydrochloride（SH）.（n＝6）

Tab 1 Pharmacokinetic parameters of DM after single and combined introgastric adm inistration of SH in rats±s，n＝6）

Tab 1 Pharmacokinetic parameters of DM after single and combined introgastric adm inistration of SH in rats±s，n＝6）

*P＜0.05 vs control

Parameter Control group Sarpogrelate group Ratio T 1.62 T max／h 1.05±0.51 1.15±0.74 1.10 C max／μg·L－1 104.5±52.4 325.7±133.2* 3.12 AUC0－t／μg·L－1·h 244.8±168.3 785.5±451.9* 3.21 AUC0－∞ ／μg·L－1·h 251.4±173.4 804.7±445.6*12／h 1.47±0.20 2.49±0.93*3.20

3 討論

體外微粒體抑制試驗研究發現，SH及其體內的代謝產物M-1對人CYP2D6有較強的抑制作用（Ki值分別為 3.05μmol·L－1和 1.24μmol·L－1），而對其他的 CYP酶如 CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1和 CYP3A 4／5無明顯影響［5］。雖然體外溫孵法常用于藥物的篩選和預測，但其試驗結果仍需進行進一步的體內驗證。DM是CYP2D6的底物，在人體內經CYP2D6代謝成 O-去甲基右美沙芬［6］，而大鼠的CYP2D亞族 包 含 CYP2D1、CYP2D2、CYP2D3、CYP2D4、CYP2D5和CYP2D18，其分布表達存在組織特異性，其中CYP2D1和CYP2D2主要分布在肝、腎和小腸黏膜，與人CYP2D6的同源性達到70%，且均具有催化右美沙芬 O-位去甲基的活性［6－7］，DM在大鼠體內主要經CYP2D1／2代謝為O-去甲右美沙芬［8］。因此，本實驗研究了SH與CYP2D1／2的底物 DM在大鼠體內的相互作用，對人CYP2D6的研究具有重要的參考價值。

本實驗結果顯示，SH（10 mg·kg－1）與 DM合用后，DM的較單用明顯延長（P＜0.05），Cmax明顯升高（P＜0.05），AUC0－t及 AUC0－∞明顯增大（P＜0.05），提示沙格雷酯大大增加了 DM在大鼠體內的暴露量，降低了其清除過程，對DM的吸收及消除均有明顯影響。合用SH后，DM的AUC是單用時的3.2倍，提示 SH是CYP2D1／2中等強度的抑制劑［9］，進一步證實了 SH在大鼠體內也能抑制CYP2D1／2的功能。

CYP2D6是一種重要的P450系氧化代謝酶，參與多種重要藥物代謝，包括抗心律失常藥、β受體阻斷藥、抗高血壓藥、鎮痛藥、抗精神病藥、抗抑郁藥等［10－11］。而 SH作為一種5-HT2受體拮抗劑，經常用于治療或者合并治療如糖尿病腎病、冠心病、動脈粥樣硬化、腦缺血發作等疾病［3，12－13］。老年人通常合并以上多種疾病，每天同時服用4～5種藥物的情況極為普遍，藥物相互作用所致的藥品不良反應問題也日趨嚴重。因此，本研究結果提示在與SH合并用藥時，需要特別注意CYP2D6的底物，兩者合用很有可能會增加這些藥物的體內濃度，增加藥物的用藥風險。

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