胃癌患者血清斯鈣素-2基因的表達及臨床意義

楊立成 吳 醒 姚國忠 湯偉民

江蘇省溧陽市人民醫(yī)院普外科，江蘇溧陽 213300

胃癌是我國常見的惡性腫瘤，5年生存率在10%左右。早期診斷可明顯改善胃癌預(yù)后，但在我國內(nèi)鏡篩查尚未普及，因此，尋找胃癌特異性的血清腫瘤標(biāo)志物具有重要意義[1]。斯鈣素（stanniocalcin-2，STC-2）是一種糖蛋白激素，參與調(diào)節(jié)鈣磷代謝，促進腦神經(jīng)元分化，以及影響骨骼和肌肉的發(fā)育[2]。近來研究發(fā)現(xiàn)，STC-2在包括胃癌在內(nèi)的多種腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起著十分重要的作用，并可能作為一種新型腫瘤標(biāo)記物[3]。因此，本研究擬檢測STC-2蛋白在胃癌外周血中的表達，并分析其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

75例原發(fā)性胃癌外周血標(biāo)本來自溧陽市人民醫(yī)院普外科2007年7月～2010年7月住院患者，所有病例均經(jīng)病理組織學(xué)檢查明確診斷，術(shù)前均未接受放、化療，男 44例，女 31例，年齡44～82歲，中位年齡62歲，腫瘤分期根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）2010標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期8例，Ⅱ期23例，Ⅲ期37例，Ⅳ期7例。患者術(shù)前常規(guī)檢查及術(shù)后7～10 d分別以促凝管留取外周血10 mL。同期收集40例胃良性疾病（20例慢性胃炎、20例胃潰瘍）患者血標(biāo)本做對照，其中男22例，女18例，中位年齡61歲，與腫瘤患者具有可比性。血清收集方法：3000 r/min，離心10 min，離心半徑為7.5 cm，保留上層血清。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)并取得患者知情同意。

1.2 方法

采用ELISA方法檢測血清STC-2表達。DuoSet ELISA試劑盒購自美國R&D公司，按試劑盒說明操作，于450 nm波長下讀取吸光度值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進行分析，計量資料采取t檢驗，診斷敏感性和特異性根據(jù)受試者特征曲線（receiver operating characteristics，ROC）計算，P ＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清STC-2水平

75例胃癌患者術(shù)前血清STC-2平均水平為（1694.4±566.16）ng/L，同期40例良性胃疾病患者血清STC-2蛋白水平為（691.75±318.48）ng/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.001）。 術(shù)后 7～10 d，胃癌患者血清STC-2 平均水平為（1126.0±419.43）ng/L，較術(shù)前明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。見圖1。

圖1 各組血清斯鈣素-2表達水平

2.2 血清STC-2的診斷效能

ROC曲線表明，血清STC-2水平具有良好的診斷敏感性和特異性，曲線下面積（area under the curve，AUC）為 0.945（95%CI：0.908～0.982，P ＜ 0.001），約登指數(shù)（Youden index）為 0.76。 見圖 2。

圖2 胃癌患者與胃良性疾病患者血清斯鈣素-2表達的受試者ROC曲線

3 討論

STC是一種首先在硬骨魚類中發(fā)現(xiàn)，并已被充分闡明的糖蛋白激素。隨后在人和哺乳動物中發(fā)現(xiàn)也存在類似的蛋白，根據(jù)氨基酸序列的差異可以分為STC-1和STC-2，在生物體內(nèi)發(fā)揮著相輔相成的作用。STC-2基因定位于人染色體5q35.1，全長5341 bp，所編碼的分泌蛋白含302個氨基酸。目前認為STC-2在人體組織器官中廣泛表達，但主要在心臟、脾臟、腎臟和胰腺中表達，以旁分泌和自分泌方式，參與調(diào)節(jié)多種病理生理過程[2]。STC-2對鈣磷濃度的調(diào)節(jié)可能參與腫瘤細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的信號傳導(dǎo)，有誘導(dǎo)腫瘤細胞適應(yīng)低氧環(huán)境以維持能量代謝穩(wěn)定等作用。Law等[4]證實，STC-2啟動子上有缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1）的結(jié)合位點，缺氧條件下HIF-1可上調(diào)STC-2表達，促進乳腺癌和卵巢癌細胞增殖。STC-2還可通過VEGF/VEGFR2和血管生成素途徑，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞功能，促進新生血管形成[5]。由于缺血缺氧是腫瘤微環(huán)境的重要特征[6]，因此，SCT-2過表達可能是對腫瘤微環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)。

近來研究表明，STC-2可能是一個新的腫瘤標(biāo)志物。有學(xué)者[7]通過基因芯片在食管癌組織與正常組織，以及原位食管癌與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中篩選差異基因，發(fā)現(xiàn)STC-2是二者中重復(fù)的基因，進一步通過實時定量PCR證實，88.5%（62/70）的食管癌組織STC-2 mRNA水平高于癌周正常組織，且STC-2高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期和不良預(yù)后有關(guān)。在膽囊癌[8]、結(jié)直腸癌[9]、肝癌[10]和激素抵抗前列腺癌[11]中均有報道STC-2表達上調(diào)，體外實驗也證實STC-2過表達可促進肝癌細胞（YY-8103）和前列腺癌細胞（22Rv1）生長。Yokobori等[3]發(fā)現(xiàn)，108例胃癌的STC-2 mRNA表達水平明顯高于相應(yīng)正常組織，且STC-2高表達（54例）與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管癌栓以及腹膜轉(zhuǎn)移相關(guān)。還有報道，STC-2 mRNA在胃癌外周血中的表達也較健康志愿者增高，外周血STC-2 mRNA高表達與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)[12]。

本研究的結(jié)果進一步證實，胃癌患者血清STC-2蛋白水平明顯高于胃良性疾病患者，且在術(shù)后7～10 d，胃癌患者血清STC-2蛋白水平明顯下調(diào)，考慮是由于腫瘤負荷減低所致，因此提示其不僅是胃癌早期診斷的潛在指標(biāo)，還有可能成為預(yù)后判斷的分子標(biāo)記，如動態(tài)監(jiān)測血清STC-2水平升高，則高度懷疑腫瘤有復(fù)發(fā)或進展之可能。由于蛋白分子標(biāo)志物的穩(wěn)定性，ELISA檢測技術(shù)也較PCR方便，故血清STC-2蛋白水平較mRNA表達具有更好的應(yīng)用前景。

[1]梁大立，李介華，陸灶其，等.血清癌胚抗原、糖類抗原199、糖類抗原724檢測對胃癌的診斷價值[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（28）：89-90.

[2]Yeung BH，Law AY，Wong CK.Evolution and roles of stanniocalcin [J].Mol Cell Endocrinol，2012，349 （2）：272-280.

[3]Yokobori T，Mimori K，Ishii H，et al.Clinical significance of stanniocalcin 2 as a prognostic marker in gastric cancer[J].Ann Surg Oncol，2010，17（10）：2601-2607.

[4]Law AY，Wong CK.Stanniocalcin-2 is a HIF-1 target gene that promotes cell proliferation in hypoxia [J].Exp Cell Res，2010，316（3）：466-476.

[5]Law AY，Wong CK.Stanniocalcin-1 and-2 promote angiogenic sprouting in HUVECs via VEGF/VEGFR2 and angiopoietin signaling pathways[J].Mol Cell Endocrinol，2013，374（1-2）：73-81.

[6]楊紅麗，董少婷，王爽.微環(huán)境對腫瘤發(fā)生和發(fā)展的影響[J].實用腫瘤雜志，2013，28（1）：100-104.

[7]Yuan Y，Yang ZL，Zou Q，et al.A Comparative study of clinicopathological significance， BIRC7，and STC2 expression between squamous cell/adenosquamous carcino masandadenocarcinomaofgallbladder[J].Neoplasma，2013，60（6）：698-705.

[8]Kita Y，Mimori K，Iwatsuki M，et al.STC2：a predictive marker for lymph node metastasis in esophageal squamous-cell carcinoma[J].Ann Surg Oncol，2011，18（1）：261-272.

[9]Ieta K，Tanaka F，Yokobori T，et al.Clinicopathological significance of stanniocalcin 2 gene expression in colorectal cancer[J].Int J Cancer，2009，125（4）：926-931.

[10]Wang H，Wu K，Sun Y，et al.STC2 is upregulated in hepatocellular carcinoma and promotes cell proliferation and migration in vitro[J].BMB Rep，2012，45（11）：629-634.

[11]Tamura K，F(xiàn)urihata M，Chung SY，et al.Stanniocalcin 2 overexpression in castration-resistant prostate cancer and aggressive prostate cancer[J].Cancer Sci，2009，100（5）：914-919.

[12]Wang YY，Li L，Zhao ZS，et al.Clinical utility of measuring expression levels of KAP1，TIMP1 and STC2 in peripheral blood of patients with gastric cancer[J].World J Surg Oncol，2013，11：81.