miR—126在冠脈病變中的表達(dá)及與血脂相關(guān)性的臨床研究

鄭煒華　吳學(xué)周　張愛(ài)鵬

[摘要] 目的 觀察冠心病患者血液中miR-126表達(dá)的變化，探討其與冠脈病變、血脂相關(guān)的臨床意義。方法 收集2011年3月～2013年6月我院心內(nèi)科診治的冠心病患者98例，另取本院同期健康體檢者40例作為對(duì)照組。miR-126表達(dá)使用熒光定量PCR檢測(cè)。結(jié)果 對(duì)照組miR-126和HDL-C顯著高于冠心病組 （P <0.05），對(duì)照組TC 和LDL-C顯著低于冠心病組 （P <0.05）。miR-126、TC 、LDL-C和HDL-C表達(dá)在單支病變組、雙支病變組和多支病變組之間存在顯著性差異 （P <0.05）。miR-126與TC表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.324， P <0.05），與LDL-C表達(dá)亦呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.381， P <0.05），而與HDL-C表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.416，P <0.05）。 結(jié)論 冠心病患者中miR-126與TC和LDL-C表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，與HDL-C表達(dá)呈顯著正相關(guān)，miR-126表達(dá)隨著冠脈病變分支的增加而逐漸下調(diào)，miR-126的檢測(cè)可用于冠心病患者冠脈病變程度的評(píng)估。

[關(guān)鍵詞] 冠心病；miR-126；血脂

[中圖分類(lèi)號(hào)] R587.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）12-0088-02

[Abstract] Objective To detect the expression of plasma circulating miR-126 and explore its clinical significance in patients with coronary atherosclerotic heart diease （CHD）. Methods A total of 98 patients with CHD were enrolled in this study. Another 40 healthy person were collected as control. The expression of miR-126 was detected with Real time-PCR assay. Results The expression of miR-126 and HDL-C in control group was higher than that in CHD group（P <0.05）. The expression of miR-126， TC， LDL-C and HDL-C were significant difference among single-vessel group， double-vessel group， and many-vessel group（P <0.05）. The expression of miR-126 was significantly negative correlation with TC （r = -0.324， P <0.05） and LDL-C（r = -0.381， P <0.05）. The expression of miR-126 was significantly positive correlation with HDL-C（r = 0.416， P <0.05）. Conclusion The low-level expression of miR-126 is found in CHD patients. The expression of miR-126 is gradually reduced according to increased coronary artery branch lesion. Detection of miR-126 may be used for early diagnosis and evaluation of CHD.

[Key words] Coronary atherosclerotic heart diease（CHD）； The miR-126； Lipid

microRNA（miRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)約18～24 個(gè)核苷酸的小分子非編碼單鏈RNA，其通過(guò)與靶基因互補(bǔ)配對(duì)，在翻譯水平調(diào)控基因的表達(dá)[1]。miRNA廣泛表達(dá)于各種組織和器官，在細(xì)胞的增殖和凋亡、器官形成、血液形成、發(fā)育進(jìn)程等生命過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[2]。miR-126是與血管內(nèi)皮細(xì)胞以及血管功能密切相關(guān)的一種miRNA，定位于表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域7基因7號(hào)內(nèi)含子區(qū)[3，4]。以動(dòng)脈粥樣硬化病變?yōu)榛A(chǔ)的冠心病（coronary heart disease，CHD）是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)心血管疾病，本研究觀察了CHD患者血液循環(huán)中miR-126表達(dá)的變化，并探討其相關(guān)臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2011年3月～2013年6月我院心內(nèi)科診治的冠心病患者98例，其中男52例，女46例，年齡51～75歲，平均（61.4±11.3）歲，所有冠心病患者均經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查確診。根據(jù)冠脈病變范圍分為：30例單支病變組、36例雙支病變組、32例多支病變組。另取本院同期健康體檢者40例作為對(duì)照組，四組受試者在性別、年齡等一般臨床資料方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性（P>0.05）。

1.2 血脂的檢測(cè)

總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白 （LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）生化指標(biāo)的檢測(cè)由檢驗(yàn)科完成。

1.3 miR-126表達(dá)的熒光定量PCR（Real time-PCR）檢測(cè)

參照鄭志偉等[5]的方法，采集受試者靜脈血2 mL，3000 r/min 15min分離上清，加入Trizol（大連寶生物科技有限公司），按照試劑說(shuō)明提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄莖環(huán)引物和M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶（北京天根生物科技技術(shù)有限公司）反轉(zhuǎn)錄，TaqDNA聚合酶、Has-miR-126莖環(huán)引物和SYBR Green熒光染料（上海吉瑪生物科技技術(shù)有限公司）定量檢測(cè)miR-126的表達(dá)量。Has-miR-126莖環(huán)引物序列為5'-TATCCAGTGATTCCGACCGCCGCATGGAGTCTG-3'（sence）和5'- TCCGCTCTTGGTGTGGTGTGAGTCGC-3'（antisence），miR-126的表達(dá)量使用2-△Ct評(píng)估。endprint

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間的比較采用方差分析，Pearson相關(guān)性分析檢測(cè)各檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病患者miR-126表達(dá)及其與血脂的關(guān)系

從表1可見(jiàn)，對(duì)照組miR-126和HDL-C顯著高于冠心病組（P < 0.05），對(duì)照組TC 和LDL-C顯著低于冠心病組（P < 0.05）。

3 討論

冠心病的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明了，因此臨床上也缺乏有效的防治手段，探尋冠心病的發(fā)病機(jī)制一直是學(xué)者們努力研究的方向[6]。血液循環(huán)中miRNA的變化與心血管疾病發(fā)病中的作用近年來(lái)逐漸受到關(guān)注，并已有研究使用循環(huán) miRNA作為心血管疾病診斷及藥物療效評(píng)價(jià)的生物標(biāo)志物[7]。本研究采用莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量的方法檢測(cè)了98份冠心病患者血漿循環(huán)中miR-126的表達(dá)，與40份健康對(duì)照的血漿樣本比較，發(fā)現(xiàn)冠心病組miR-126表達(dá)顯著低于對(duì)照組，提示了miR-126表達(dá)的下調(diào)可能參與了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。血脂的升高導(dǎo)致局部血管壁的脂質(zhì)沉積是冠心病動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要成因[8]， TC和LDL-C是致動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要血液因子，HDL-C是致動(dòng)脈粥樣硬化病變保護(hù)因子，相關(guān)性分析顯示，miR-126與TC和LDL-C表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，與HDL-C表達(dá)呈顯著正相關(guān)，提示了miR-126可能調(diào)控著某些脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因，冠心病患者中miR-126表達(dá)的下調(diào)可能導(dǎo)致了患者脂質(zhì)代謝的紊亂，其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究[9]。

本研究顯示了冠心病患者外周血液循環(huán)中miR-126表達(dá)有隨著冠脈病變分支的增加而逐漸減低的趨勢(shì)，提示了miR-126檢測(cè)可用于冠心病病變程度的評(píng)估。有研究顯示，miR-126可以調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)[10]，大量的研究已證實(shí)VEGF在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的增殖和活化中起著重要作用[11]，例如可以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增殖過(guò)程中滋養(yǎng)血管的生長(zhǎng)，以及巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞遷移到動(dòng)脈粥樣硬化斑，參與到血管壁的慢性炎癥中[12]，這可能也是miR-126表達(dá)的下調(diào)致血管粥樣病變發(fā)展的一個(gè)機(jī)制。endprint

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間的比較采用方差分析，Pearson相關(guān)性分析檢測(cè)各檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病患者miR-126表達(dá)及其與血脂的關(guān)系

從表1可見(jiàn)，對(duì)照組miR-126和HDL-C顯著高于冠心病組（P < 0.05），對(duì)照組TC 和LDL-C顯著低于冠心病組（P < 0.05）。

3 討論

冠心病的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明了，因此臨床上也缺乏有效的防治手段，探尋冠心病的發(fā)病機(jī)制一直是學(xué)者們努力研究的方向[6]。血液循環(huán)中miRNA的變化與心血管疾病發(fā)病中的作用近年來(lái)逐漸受到關(guān)注，并已有研究使用循環(huán) miRNA作為心血管疾病診斷及藥物療效評(píng)價(jià)的生物標(biāo)志物[7]。本研究采用莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量的方法檢測(cè)了98份冠心病患者血漿循環(huán)中miR-126的表達(dá)，與40份健康對(duì)照的血漿樣本比較，發(fā)現(xiàn)冠心病組miR-126表達(dá)顯著低于對(duì)照組，提示了miR-126表達(dá)的下調(diào)可能參與了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。血脂的升高導(dǎo)致局部血管壁的脂質(zhì)沉積是冠心病動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要成因[8]， TC和LDL-C是致動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要血液因子，HDL-C是致動(dòng)脈粥樣硬化病變保護(hù)因子，相關(guān)性分析顯示，miR-126與TC和LDL-C表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，與HDL-C表達(dá)呈顯著正相關(guān)，提示了miR-126可能調(diào)控著某些脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因，冠心病患者中miR-126表達(dá)的下調(diào)可能導(dǎo)致了患者脂質(zhì)代謝的紊亂，其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究[9]。

本研究顯示了冠心病患者外周血液循環(huán)中miR-126表達(dá)有隨著冠脈病變分支的增加而逐漸減低的趨勢(shì)，提示了miR-126檢測(cè)可用于冠心病病變程度的評(píng)估。有研究顯示，miR-126可以調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)[10]，大量的研究已證實(shí)VEGF在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的增殖和活化中起著重要作用[11]，例如可以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增殖過(guò)程中滋養(yǎng)血管的生長(zhǎng)，以及巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞遷移到動(dòng)脈粥樣硬化斑，參與到血管壁的慢性炎癥中[12]，這可能也是miR-126表達(dá)的下調(diào)致血管粥樣病變發(fā)展的一個(gè)機(jī)制。endprint

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間的比較采用方差分析，Pearson相關(guān)性分析檢測(cè)各檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病患者miR-126表達(dá)及其與血脂的關(guān)系

從表1可見(jiàn)，對(duì)照組miR-126和HDL-C顯著高于冠心病組（P < 0.05），對(duì)照組TC 和LDL-C顯著低于冠心病組（P < 0.05）。

3 討論

冠心病的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明了，因此臨床上也缺乏有效的防治手段，探尋冠心病的發(fā)病機(jī)制一直是學(xué)者們努力研究的方向[6]。血液循環(huán)中miRNA的變化與心血管疾病發(fā)病中的作用近年來(lái)逐漸受到關(guān)注，并已有研究使用循環(huán) miRNA作為心血管疾病診斷及藥物療效評(píng)價(jià)的生物標(biāo)志物[7]。本研究采用莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量的方法檢測(cè)了98份冠心病患者血漿循環(huán)中miR-126的表達(dá)，與40份健康對(duì)照的血漿樣本比較，發(fā)現(xiàn)冠心病組miR-126表達(dá)顯著低于對(duì)照組，提示了miR-126表達(dá)的下調(diào)可能參與了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。血脂的升高導(dǎo)致局部血管壁的脂質(zhì)沉積是冠心病動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要成因[8]， TC和LDL-C是致動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要血液因子，HDL-C是致動(dòng)脈粥樣硬化病變保護(hù)因子，相關(guān)性分析顯示，miR-126與TC和LDL-C表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，與HDL-C表達(dá)呈顯著正相關(guān)，提示了miR-126可能調(diào)控著某些脂質(zhì)代謝相關(guān)的基因，冠心病患者中miR-126表達(dá)的下調(diào)可能導(dǎo)致了患者脂質(zhì)代謝的紊亂，其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究[9]。

本研究顯示了冠心病患者外周血液循環(huán)中miR-126表達(dá)有隨著冠脈病變分支的增加而逐漸減低的趨勢(shì)，提示了miR-126檢測(cè)可用于冠心病病變程度的評(píng)估。有研究顯示，miR-126可以調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)[10]，大量的研究已證實(shí)VEGF在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的增殖和活化中起著重要作用[11]，例如可以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增殖過(guò)程中滋養(yǎng)血管的生長(zhǎng)，以及巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞遷移到動(dòng)脈粥樣硬化斑，參與到血管壁的慢性炎癥中[12]，這可能也是miR-126表達(dá)的下調(diào)致血管粥樣病變發(fā)展的一個(gè)機(jī)制。endprint