凋亡抑制蛋白Livin在結腸癌組織中的表達及與細胞增殖的關系

黃偉強

[摘要] 目的 探討凋亡抑制蛋白Livin在結腸癌組織中的表達及與細胞增殖的關系。 方法 選取結腸癌患者術后病理標本70例，采用S-P免疫組化法檢測Livin基因的表達，并探討其與患者性別、年齡、腫瘤大小、組織分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和遠處轉移等生物學行為及細胞增殖的關系。另取30例癌旁正常的結腸組織作對照。結果 結腸癌組織中Livin基因的陽性率明顯高于癌旁正常結腸組織（χ2=12.19，P <0.01）。Livin基因在結腸癌組織中表達水平與性別、年齡、腫瘤大小及組織分化程度無關（P >0.05），隨原發病灶的浸潤深度、淋巴結轉移和遠處轉移呈明顯上升趨勢（P <0.01或P <0.05）。Livin基因表達陰性的結腸癌組織中PCNA的細胞增殖指數明顯低于Livin基因表達陽性的組織（P <0.05）。 結論 Livin基因不僅參與結腸癌的發病進展過程，而且還參與了結腸癌的局部侵襲和轉移的病理過程。Livin不僅參與結腸癌細胞凋亡的調控，還促進了細胞的增殖過程，可作為大腸癌臨床診斷、轉移和放化療療效及預后評估的敏感指標。

[關鍵詞] 結腸癌；免疫組化；Livin基因；細胞增殖

[中圖分類號] R735.35 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）12-0085-03

[Abstract] Objective To discuss expression of inhibitor of apoptosis protein Livin in colon cancer tissue and its relationship with cell multiplication. Methods A total of 70 cases of postoperative pathological specimen of patients with colon cancer tissue were selected， and the expression of Livin genes was detected by S-P immunohistochemistry， whose relationship with gender， age， size of tumor， histological grade， inasie depth， lymphatic metastasis， distant metastasis and other biological behaviour and cell multiplication of patients were discussed. 30 cases of normal colonic tissue near tumor tissues were additionally selected as the research comparison. Results The positive expression rate of Livin genes in colon cancer tissue was much higher than that in normal colon tissue（χ2=12.19， P <0.01）. The expression level of Livin genes in colon cancer tissue has no relationship with gender， age， size of tumor and histological grade（P >0.05）. As the development of inasie depth of primary lesion， lymphatic metastasis and distant metastasis were showed the rising trend （P <0.01 or P <0.05）. The PCNA cell proliferation index in colon cancer tissue of Livin genes negative expression was much lower than that in Livin genes positive expression（P <0.05）. Conclusion Livin genes participate in not only the disease progression of colon cancer tissue， but also pathologic process of local invasion and transformation. Livin genes participate in not only the apoptosis control of colon cancer tissue， but also the boosting of processing of cell multiplication， which can be the clinical diagnosis， transformation， curative effect of radiotherapy and chemotherapy and reliable index of prognosis evaluation.

[Key words] Colon cancer tissue； Immunohistochemical； Livin gene； Cell multiplication

腫瘤的發生發展過程不僅與細胞過度增生有關，而且與細胞的凋亡受抑制密切相關，細胞凋亡途徑的調節障礙及凋亡相關基因表達異常，均可導致腫瘤發生和發展。Livin基因屬凋亡抑制蛋白（IAPs）家族的抑制細胞凋亡新成員，選擇性表達于人的胚胎和大部分腫瘤組織，而在大部分正常人的終末分化組織中無明顯表達或低表達[1，2]。有關Livin基因在結腸癌組織中的表達及臨床意義近年來逐漸引起臨床重視，但其與患者生物學行為的關系目前國內外報道不一致[3，4]。本研究觀察了Livin基因在結腸癌組織中的表達，并初步探討其與患者生物學行為及細胞增殖的關系?，F報道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究共選取了結腸癌患者術后病理標本70份。所有患者具有完整臨床資料，術前均未進行任何形式的輔助化療、放療和免疫治療。70例患者中男43例，女27例；年齡34 ～87歲，平均（65.4±7.6）歲。另取30例癌旁正常的結腸組織（距腫瘤邊緣5 cm以上的組織）作對照，其中男19例，女11例；年齡36 ～84歲，平均（64.9±7.1）歲。兩組在性別、年齡方面比較差異不明顯（P>0.05），具有可比性。

1.2 免疫組化染色[5]

采用S-P免疫組化法進行染色檢測。將手術標本進行石蠟包埋，切片機連續4μm切片，采用檸檬酸鹽高壓抗原修復，正常血清阻斷封閉10min，傾去血清滴加Livin和PCNA一抗工作液4℃冰箱中孵育過夜，余按說明書操作規范進行操作。用正常扁桃腺組織和磷酸鹽緩沖液PBS行陽性或陰性對照。鼠抗人Livin單克隆抗體和鼠抗人PCNA單克隆抗體由北京中杉金橋公司提供。免疫組化S-P試劑盒由武漢博士德提供。

1.3 觀察指標

1.3.1 Livin免疫組化結果判定[6] Livin陽性表達細胞是指細胞漿或細胞漿與細胞核均出現黃色至棕褐色顆粒狀染色。按照染色細胞的百分比判斷免疫組化結果，其中細胞染色不明顯或染色細胞的百分比≤10%為陰性（-）；染色細胞的百分比>10%為陽性（+）。

1.3.2 PCNA的細胞增殖指數的測定[7] 采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統，將PCNA染色陽性的每張免疫組化切片選擇10個高倍區域，選取1000個腫瘤細胞計數PCNA染色陽性細胞所占的比例即為PCNA的細胞增殖指數。

1.4 統計學處理

應用SPSS18.0軟件，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料用相對數表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為統計學差異的標準。

2 結果

2.1 Livin基因在結腸癌及癌旁正常結腸組織中的表達差異比較

Livin基因主要在細胞漿中染色表達，部分患者也可見到細胞漿和細胞核均染色表達。70例結腸癌標本中Livin的染色陽性表達43例，陽性率為61.43%。30例癌旁正常結腸組織中Livin的染色陽性表達僅7例，陽性率為23.33%。結腸癌組織中Livin基因的陽性率明顯高于癌旁正常結腸組織（χ2=12.19，P<0.01）。

2.2 Livin基因在結腸癌中的表達與患者生物學行為的關系

Livin基因在結腸癌組織中的表達水平與性別、年齡、腫瘤大小及組織分化程度均無明顯關系（P>0.05），隨原發病灶的浸潤深度、淋巴結轉移和遠處轉移呈明顯的上升趨勢（P<0.01或P<0.05）。見表1和圖1。

2.3 結腸癌組織中Livin基因的表達與PI的關系

Livin基因表達陰性的結腸癌組織中PCNA的細胞增殖指數為（32.578±9.23）%；Livin基因表達陽性的結腸癌組織中PCNA的細胞增殖指數為（58.21±12.05）%。Livin基因表達陰性的結腸癌組織中PCNA的細胞增殖指數明顯低于Livin基因表達陽性的結腸癌組織（t=2.37，P<0.05）。

3 討論

結腸癌是目前全球發病率較高的胃腸道惡性腫瘤，其發病過程一般均經過了正常黏膜- 腺瘤-癌的進展過程，其中細胞凋亡途徑及凋亡基因表達異常在結腸癌的發生、發展過程中起到極其重要的作用。Livin基因是近年來研究發現IAPs家族中的新成員，定位于人染色體20號的q13.3處，長度7.6Kb，由7個外顯子和6個內含子組成[8]。Livin基因的BIR結構域能與多種Caspase，尤其是Caspase-3、7和9結合并相互作用，抑制活化的Caspase活性，阻斷凋亡受體和以線粒體為核心的凋亡級聯反應，從而抑制細胞的凋亡進程；另外Livin基因還能激活T AK1/JNK1信號傳導途徑，促進 TAK1介導的JNK1激活效應，最終啟動了Livin基因的抗細胞凋亡作用，并能參與Wnt/-catenin信號通路轉錄后的調控，共同參與惡性腫瘤的發生、發展、預后和轉歸過程[9-12]。

近年來有關Livin基因在結腸癌組織中的表達及其發生、發展、預后和轉歸關系逐漸引起臨床的重視。王永等[13]研究發現，Livin基因在大腸組織異常分化-癌前病變-癌組織發病階段起到了極其重要的作用，參與大腸癌的發病過程，且Livin基因在直腸癌高表達，與大腸癌的病理學特征密切相關。本研究結果發現，結腸癌組織中Livin基因的陽性率明顯高于癌旁正常結腸組織，提示Livin基因參與結腸癌的發病與進展過程。李辰生等[14]研究發現，直腸癌組織中Livin蛋白的表達與病理類型、臨床分期和淋巴結轉移等生物學行為密切相關，是影響患者預后的重要指標。嚴紅等[15]研究發現，Livin基因在大腸癌組織中表達率較正常大腸組織高，且其陽性表達率與腫瘤的浸潤深度、分化程度及臨床分期等密切相關，可作為大腸癌臨床診斷、轉移和放化療療效及預后評估的敏感指標。本研究結果發現，Livin基因在結腸癌組織中的表達水平與性別、年齡、腫瘤大小及組織分化程度無關，隨原發病灶的浸潤深度、淋巴結轉移和遠處轉移呈明顯的上升趨勢。提示Livin基因的表達不僅與結腸癌發生和發展的過程密切相關，而且還參與了結腸癌的局部侵襲和轉移的病理發展過程，可作為影響患者預后的重要指標。汪海等[16]研究發現，Livin基因在胃癌中的表達水平與PCNA的細胞增殖指數呈正相關，Livin基因促進了癌細胞的異常增殖過程。本研究結果發現，Livin基因表達陰性的結腸癌組織中PCNA的細胞增殖指數明顯低于Livin基因表達陽性的結腸癌組織。提示Livin在結腸癌中的表達與PCNA的增殖指數密切相關，表明Livin不僅參與結腸癌細胞凋亡的調控，還促進了細胞的增殖過程。endprint

總之，Livin基因不僅參與結腸癌的發病進展過程，而且還參與了結腸癌的局部侵襲和轉移的病理過程。Livin不僅參與結腸癌細胞凋亡的調控，還促進了細胞的增殖過程，可作為大腸癌臨床診斷、轉移和放化療療效及預后評估的敏感指標[17]。

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（收稿日期：2013-12-05）endprint

總之，Livin基因不僅參與結腸癌的發病進展過程，而且還參與了結腸癌的局部侵襲和轉移的病理過程。Livin不僅參與結腸癌細胞凋亡的調控，還促進了細胞的增殖過程，可作為大腸癌臨床診斷、轉移和放化療療效及預后評估的敏感指標[17]。

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