乳腺癌組織中VEGF、bFGF表達變化及其與微血管密度的關系

沈 葉，盛友華，馮一中

(1上海市第六人民醫院南院奉賢區中心醫院，上海201499;2蘇州大學附屬第二醫院)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，且發病年齡不斷趨于年輕化［1］。大量研究已證實，腫瘤組織內新血管的生成是腫瘤生長、轉移及預后的重要影響因素［2］，而血管內皮細胞生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是最重要的血管生成正性調控因子［3，4］，在多種實體腫瘤中有高表達，且表達水平與腫瘤的惡性程度、預后密切相關［5］。腫瘤微血管密度(MVD)是特定腫瘤區域微血管計數，現已被視為生物學侵襲性、轉移潛能的判定指標，其中以血管內皮細胞標記物CD34的抗原敏感性最高，但關于乳腺癌血管生成活性與MVD關系的報道較少。本研究通過檢測乳腺癌組織中VEGF、bFGF、CD34的表達，探討其與MVD的關系，為乳腺癌的基因靶向治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 上海市交通大學附屬第六人民醫院南院奉賢區中心醫院2009年1月～2012年12月手術切除且臨床資料齊全的乳腺癌組織標本75例(觀察組)，均經手術及組織病理學確診，術前均未行放、化療。患者均為女性，年齡39～76(54.7±6.1)歲;AJCC分期:Ⅰ期26例，Ⅱ期20例，Ⅲ期24例，Ⅳ期5例;病理分型:浸潤性導管癌42例，導管內癌21例，浸潤性小葉癌12例。另取我院同期收治的20例女性乳腺腺瘤患者的乳腺組織作為對照組，兩組年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組化SP法。標本經10%甲醛固定、石蠟包埋，制成厚4 μm的切片;常規脫蠟、水化、0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復。抗人bFGF單克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術公司，抗人 VEGF、CD34、bFGF單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒均購自上海森雄科技實業有限公司;均采用試劑盒已知陽性組織作為陽性對照，以PBS代替一抗體作為陰性對照。bFGF、VEGF的判定標準:隨機選擇10個高倍鏡視野(×400)計數1 000個腫瘤細胞，腫瘤細胞胞質內呈棕黃色顆粒為陽性細胞。采用許良中等［6］的計分方法對陽性細胞百分數及染色程度進行計分，兩項積分乘積≥3為陽性。MVD計數:CD34定位于血管內皮細胞核，呈棕黃色，胞質可見棕黃色顆粒，參照Weidner［7］的方法，計算 MVD 值。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件。計量資料以±s表示，比較采用t檢驗或方差分析;計數資料以率或百分比表示，比較采用χ2檢驗;相關性用配對資料的關聯分析，用Spearman秩相關系數表示。P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組VEGF、bFGF蛋白表達及MVD比較 觀察組VEGF、bFGF蛋白陽性表達率分別為72.0%、69.3%，MVD 為(33.81±10.95)條/HP;對照組分別為 20.0%、25.0%、(17.41±6.04)條/HP，P 均 ＜0.05。

2.2 觀察組VEGF、bFGF表達及MVD與臨床病理參數的關系 VEGF、bFGF表達及MVD均與TNM分期、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)，且VEGF與腫瘤直徑有關(P ＜0.05)。

表1 VEGF、bFGF及MVD與乳腺癌臨床病理參數的關系

2.4 觀察組VEGF、bFGF表達與MVD的關系 乳腺癌患者組織中VEGF、bFGF表達與MVD均呈正相關(r分別為 0.687、0.573，P 均 ＜0.05)。

3 討論

乳腺癌的生長、轉移是一個復雜的過程，其中腫瘤組織內新生血管的生成是較為重要的影響因素。研究認為，當腫瘤直徑＞2 mm時，逐步進入血管化期，腫瘤病灶將局部迅速擴散，其遠處轉移能力也大大增強［8，9］。腫瘤細胞誘導血管生成的潛能，需經生長因子的刺激才能轉變為發揮作用的表型，其中以VEGF、bFGF對腫瘤血管生成的調控占據主導地位［10］。

本研究結果顯示，乳腺癌組織中VEGF、bFGF陽性表達率及MVD計數顯著高于乳腺腺瘤組織。其機制可能是VEGF、bFGF促進腫瘤血管生成，導致腫瘤組織血管數量及血管通透性增加，促進血管內物質外滲，腫瘤細胞所需氧和營養物質更加充分［11］。進一步分析發現，乳腺癌腫瘤組織中VEGF、bFGF陽性表達率及MVD計數隨腫瘤直徑的增大、TNM臨床分期增高、淋巴結轉移而增高，說明其對判斷乳腺癌的惡性程度、浸潤及轉移具有重要價值。

目前，關于惡性腫瘤VEGF、bFGF表達與MVD的相關性仍存在爭議。研究認為，VEGF表達越高的結腸癌MVD也越高，且伴轉移的結腸癌VEGF及其受體的表達水平高于未轉移者;但亦有學者指出，卵巢癌、子宮內膜癌等的MVD計數與其組織學分型、分化程度無關。本組資料中，乳腺癌組織中VEGF、bFGF表達均與MVD計數呈正相關。VEGF、bFGF過度表達促進血管再生，進而產生大量結構與功能異常的腫瘤血管，最終導致MVD增加。這表明腫瘤血管新生是一個多因素共同參與的復雜過程，各個因素相互協同作用，為乳腺癌腫瘤細胞的侵襲性生長提供了條件。

綜上所述，乳腺癌患者癌組織中VEGF、bFGF呈過度表達，且與MVD計數呈正相關，共同參與了乳腺癌發生、發展及轉移的過程，有望成為乳腺癌抗血管生成治療的重要生物靶點。

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