如意金黃乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

朱倩云，李成網(wǎng)，張 潔，彭 玲，韓 露，嚴(yán) 群

（安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，安徽 合肥 230061）

◇藥物分析◇

如意金黃乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

朱倩云，李成網(wǎng)，張 潔，彭 玲，韓 露，嚴(yán) 群

（安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，安徽 合肥 230061）

目的 建立如意金黃乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)如意金黃乳膏進(jìn)行定性鑒別，高效液相色譜法對(duì)如意金黃乳膏進(jìn)行定量鑒別。結(jié)果 薄層色譜法能明顯檢出大黃、黃柏、姜黃、蒼術(shù)、甘草，同時(shí)對(duì)不同批號(hào)的乳膏樣品進(jìn)行含量測(cè)定，得大黃酚含量為：0.272 1、0.270 1、0.278 4 mg·g-1。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為如意金黃乳膏的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

如意金黃乳膏；薄層色譜法；高效液相色譜法；大黃酚

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10AT液相色譜儀（日本島津）；SDD10AVP紫外檢測(cè)器（日本島津）；百萬(wàn)分之一電子天平（美國(guó) PE公司）；AS-3120型超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯）；800型離心沉淀器（上海手術(shù)器械廠(chǎng)）；硅膠G高效薄層板和硅膠 GF254高效薄層板（煙臺(tái)化工研究所）。

1.2 試藥 如意金黃乳膏樣品（批號(hào)：111121、111123、111125）；缺大黃 、甘草、蒼術(shù)、黃柏、姜黃陰性樣品；大黃素對(duì)照品（批號(hào)：0756-200110）、大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：0796-200006）、甘草次酸對(duì)照品（批號(hào)：723-9203）、鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：0713-200107）、姜黃素對(duì)照品（批號(hào)：0823-9802），均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；硅膠、中性氧化鋁（層析用，100～200目）；甲醇（色譜純）；水（重蒸水）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 大黃的薄層鑒別 取三批次樣品各 5 g，加硅膠20 g，研勻，裝柱，加甲醇150 mL洗脫，洗脫液蒸干，加水50 mL離心10 min（4 000 rpm），取上清液濾過(guò)后加鹽酸5 mL回流30 min，再用乙醚提取2次，每次50 mL，合并乙醚液，蒸干，加乙醇1 mL使溶解，作為大黃供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.1 g，加甲醇20 mL，超聲20 min，濾過(guò)，蒸干，加鹽酸2 mL，再加氯仿30 mL回流30 mim，分取氯仿液，蒸干后加乙醇1 mL使溶解，作為大黃對(duì)照藥材溶液。分別取大黃素、大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為大黃對(duì)照品溶液。取缺大黃陰性樣品，同大黃供試品溶液制備法制備大黃陰性對(duì)照溶液。分別吸取上述溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯—醋酸乙酯—冰醋酸（15∶5 ∶0.3）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。見(jiàn)圖1。

圖1 大黃鑒別薄層色譜圖注：1.大黃酚對(duì)照品；2.大黃素對(duì)照品；3.大黃對(duì)照藥材；4～6.三批供試品；7.缺大黃陰性樣品。

2.1.2 甘草的薄層鑒別［2］取2.1.1項(xiàng)下大黃供試品溶液，作為甘草供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為甘草對(duì)照品溶液。取缺甘草陰性樣品，同甘草供試品溶液制備法制備甘草陰性對(duì)照溶液。分別吸取甘草

供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液10 μL，甘草對(duì)照品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）—三氯甲烷—冰醋酸（10∶5∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

2.1.3 蒼術(shù)的薄層鑒別［3］取三批次樣品各5 g，加硅膠 20 g，研勻，加中性氧化鋁柱上，用石油醚（30～60℃）100 mL洗脫，洗脫液低溫?fù)]干后加醋酸乙酯1 mL使溶解，作為蒼術(shù)供試品溶液。另取蒼術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，加石油醚（30～60℃）15 mL超聲15 min，濾過(guò)，濾液低溫?fù)]干后加醋酸乙酯 1 mL使溶解，作為蒼術(shù)對(duì)照藥材溶液。取缺蒼術(shù)陰性樣品，同蒼術(shù)供試品溶液制備法制備蒼術(shù)陰性對(duì)照溶液。分別吸取上述溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同綠色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

圖2 甘草鑒別薄層色譜圖注：1.甘草次酸對(duì)照品；2～4三批供試品；5.缺甘草陰性樣品。

圖3 蒼術(shù)鑒別薄層色譜圖注：1.蒼術(shù)對(duì)照藥材；2～4三批供試品；5.缺蒼術(shù)陰性樣品。

2.1.4 黃柏的薄層鑒別［4］取2.1.3項(xiàng)下蒼術(shù)供試品溶液的制備中石油醚洗脫后的柱，再加無(wú)水乙醇100 mL洗脫，洗脫液蒸干后加 1%鹽酸溶液20 mL離心10 mim（4 000 rpm），取上清液濾過(guò)后加醋酸乙酯提取2次，每次20 mL，取水液加1%氫氧化鈉溶液25 mL，再加醋酸乙酯提取2次，每次30 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，加 1%鹽酸甲醇溶液1 mL使溶解，作為黃柏供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材0.2 g，加1%鹽酸甲醇溶液40 mL超聲 30 min，濾過(guò)、濃縮至2 mL，作為黃柏對(duì)照藥材溶液。取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加 1%鹽酸甲醇溶液制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作為鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液。取缺黃柏陰性樣品，同黃柏供試品溶液制備法制備黃柏陰性對(duì)照溶液。分別吸取上述溶液各 3 μL，點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以苯—醋酸乙酯—甲醇—異丙醇—濃氨試液（12∶6∶3∶3∶1）為展開(kāi)劑，飽和15 min后展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖4。

圖4 黃柏鑒別薄層色譜圖注：1.鹽酸小檗堿對(duì)照品；2.黃柏對(duì)照藥材；3～5三批供試品；6.缺黃柏陰性樣品。

2.1.5 姜黃的薄層鑒別 取三批次樣品各5 g，加硅膠20 g，研勻，裝柱，加甲醇100 mL洗脫，洗脫液蒸干后加水50 mL離心10 min（4 000 rpm），取上清液濾過(guò)后加醋酸乙酯提取2次，每次50 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干后加無(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為姜黃供試品溶液。另取姜黃素對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為姜黃素對(duì)照品溶液。取缺姜黃陰性樣品，同黃柏供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。分別吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液10 μL，對(duì)照品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—甲酸（96∶4∶0.7）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖5。

圖5 姜黃鑒別薄層色譜圖注：1.姜黃素對(duì)照品；2～4.三批供試品；5.缺姜黃陰性樣品。

2.2 大黃酚的含量測(cè)定［5-7］

2.2.1 色譜條件 色譜柱：shim-pack ODS（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇—0.1%磷酸溶液（83∶17）；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫：40℃；流量：1 mL ·min-1。在此條件下，大黃酚與其它組分能達(dá)到基線(xiàn)分離，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)理論板數(shù)按大黃酚峰計(jì)算：n＝9 884，不低于1 500。分離度：R＝2.39（R＞1.5），符合藥典規(guī)定。拖尾因子：T＝1.03（0.95≤T≤1.05），符合藥典規(guī)定。供試品中大黃酚所對(duì)應(yīng)的峰保留時(shí)間與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致，而陰性空白無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖6。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取三批 1.0 g如意金黃乳膏樣品，精密加甲醇50 mL超聲處理30 min，搖勻，濾過(guò)。再參照2010版藥典大黃含量測(cè)定供試品制備方法制備供試品溶液［8］。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取大黃酚對(duì)照品2.481 3 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解，再精密吸取10 mL置50 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得大黃酚對(duì)照品溶液。

2.2.4 陰性空白溶液的制備 取缺大黃的陰性樣品，按“2.2.2供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備缺大黃陰性空白溶液。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 精密吸取大黃酚對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取10 μL，依次注入液相色譜儀中，依法測(cè)定，并以大黃酚濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，得線(xiàn)性回歸方程為：A＝23 668C-185.08，r2＝0.999 9（n＝7）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：大黃酚濃度在 1.985～13.895 mg·L-1范圍內(nèi)與吸收度峰面積值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取的供試品溶液于制備后0、2、4、6、8、10 h分別依法進(jìn)樣10 μL，得 RSD 為1.39%，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密量取的供試品溶液依法進(jìn)樣10 μL，連續(xù)測(cè)定5次，得RSD為0.61%。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品 （批號(hào)：111123）5份，按“2.2.2供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法制備溶液，并按“2.2.1色譜條件”項(xiàng)下色譜條件依法進(jìn)樣10 μL，測(cè)定大黃酚含量。結(jié)果測(cè)得大黃酚平均含量為0.270 0 mg·g-1，RSD為1.64%。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品5份，精密稱(chēng)定0.5 g，分別置50 mL量瓶中，精密加入一定濃度大黃酚對(duì)照品溶液 1 mL，加甲醇超聲30 min后放冷，再加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)。按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法依法測(cè)定，得平均回收率為 99.25%，RSD為1.83%，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

圖6 色譜圖

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品的測(cè)定 三批樣品中大黃酚的含量分別為0.272 1、0.270 1、0.278 4 mg·g-1。

3 討論

3.1 如意金黃乳膏中原料藥的薄層分析 由于本制劑為乳膏制劑，在 TLC鑒別過(guò)程中供試品的處理尤為重要，為達(dá)到干擾小、易檢出的目的，我們首先取部分乳膏以 1∶4的比例與層析用硅膠研和并干燥，使乳膏均勻吸附在硅膠上，為進(jìn)一步的供試品制備提供前提物質(zhì)。

3.2 如意金黃乳膏含量測(cè)定指標(biāo)的選擇 在處方制劑的含量測(cè)定中以檢測(cè)方中君臣藥、貴重藥和毒劇藥的含量為原則，故本研究對(duì)如意金黃方中主藥大黃的活性成分大黃酚［9］進(jìn)行含量檢測(cè)。之所以選擇大黃酚是因?yàn)榇簏S酚性質(zhì)比較穩(wěn)定，檢出限較低，專(zhuān)屬性強(qiáng)，干擾性少。

同時(shí)，試驗(yàn)也考察了大黃素的含量測(cè)定，但干擾較大，故舍棄［10］。原制劑如意金黃散在 2010版藥典中采用的是以姜黃素為指標(biāo)，但考慮到姜黃素受光、熱不穩(wěn)定，經(jīng)過(guò)溶劑提取制備制成軟膏劑之后，很難作為穩(wěn)定的檢測(cè)指標(biāo)故本研究選用大黃酚為含量測(cè)定指標(biāo)。

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Quality standard study of Ruyijinhuang Cream

ZHU Qian-yun，LI Cheng-wang，ZHANG Jie，et al
（Anhui Academy of Medical Science，Hefei 230061，China）

Objective To establish quality standards of Ruyijinhuang Cream.Methods We used TLC method for qualitative identification of Ruyijinhuang Cream，and HPLC method for quantitative identification.Results The TLC method was established to identify rhubarb，licorice，arisaema，treats，turmeric in Ruyijinhuang Cream，and the HPLC method was established to determine the content of chrysophanol in three batches of Ruyijinhuang Cream：0.272 1，0.270 1，0.278 4 mg·g-1.Conclusions This quality standard of Ruyijinhuang Cream is scientific，rational，simple and controllable which can be used for quality control.

ruyijinhuang cream；TLC；HPLC；chrysophanol如意金黃乳膏是根據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)方提取精制而成的乳膏劑型，原方如意金黃散由大黃、黃柏、姜黃、白芷、天南星、蒼術(shù)、厚樸、陳皮、天花粉、甘草十味中藥材組成，百余年來(lái)一直為中醫(yī)外治箍圍消法的基本代表方［1］。但由于其散劑在臨床運(yùn)用有諸多不便，故進(jìn)行劑型改革制成如意金黃乳膏，以符合臨床需求。現(xiàn)對(duì)三批次自制的如意金黃乳膏進(jìn)行質(zhì)量控制分析以建立如意金黃乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.012

2013-08-27，

2013-10-13）