HPLC-ELSD法測定復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云，徐國兵

（1.安徽中醫藥大學，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗所，安徽 合肥 230051）

HPLC-ELSD法測定復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云1，2，徐國兵1，2

（1.安徽中醫藥大學，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗所，安徽 合肥 230051）

目的 采用高效液相色譜—蒸發光散射法建立復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定。色譜柱：TSK GEL G2000SWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流動相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92），流速：0.8 mL·min-1，柱溫：30℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度 103℃，載氣為氮氣，流量為 2.5 L·min-1。結果 聚山梨酯80進樣量在 2.515～100.6 μg范圍內線性關系良好，r＝0.999 6；平均加樣回收率為 100.87%（n＝6，RSD＝0.65%）。結論 試驗表明，該方法操作簡單、快速，重復性好，可以作為復方麝香注射液中聚山梨酯80的質量控制方法。

復方麝香注射液；聚山梨酯80；含量測定；HPLC；蒸發光散射

復方麝香注射液是由人工麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲、冰片和薄荷腦等六味中藥制成的復方制劑，標準收載于國家食品藥品監督管理局國家中成藥標準匯編經絡肢體腦系分冊［1］，具有豁痰開竅，醒腦安神的功效，用于痰熱內閉所致的中風昏迷。輔料聚山梨酯 80又稱吐溫80，其對脂溶性成分有較好的助溶作用，是復方麝香注射液中的助溶劑，本身有很強的細胞膜破碎作用而導致刺激性、溶血性和組胺釋放（過敏），如果用量不當可導致不良反應，為此，本次試驗參考部分文獻報道［2-11］，建立了復方麝香注射液中聚山梨酯 80的含量測定方法，該方法方便、快捷，方法學驗證符合要求，可用于復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量測定。

1 儀器與試藥

Agilent1200系 列 高 效液相 色 譜 儀，Alltech ELSD 2000ES檢測器；乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑為分析純；聚山梨酯80（BESTOWN-振翔公司提供，批號G0I359）；復方麝香注射液9批，分別由吉林省集安益盛藥業股份有限公司（標為廠家1）和安徽金太陽生化藥業有限公司（標為廠家2）提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：TSK GEL G2000SWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流動相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92），流速：0.8 mL· min-1，檢測器：蒸發光散射檢測器，柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論板數按聚山梨酯80峰計算不低于1 500，分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取聚山梨酯 80對照品0.251 5 g，置50 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含5.03 mg聚山梨酯80的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取復方麝香注射液1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方組成比例，將人工麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲加水蒸氣蒸餾得初餾液，再進行重蒸餾，收集重蒸液，將冰片、薄荷腦共研，用上述蒸餾液分次溶解；再按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.3 線性關系考察 分別精密量取上述對照品溶液0.5、1、2、4、8、16、20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，峰面積分別為：154.8、490.5、1 203.9、3 151.0、8 645.2、23 884.5、31 907.2。以峰面積的自然對數值（Y）為縱坐標，以聚山梨酯 80進樣量的自然對數值（X）為橫坐標，繪制標準曲線，經回歸處理，方程：Y＝1.430X+1.646，r＝0.999 6，結果表明，聚山梨酯80進樣量在2.515～100.6 μg范圍內線性關系良好。

圖1 色譜圖（1.聚山梨酯80）

2.4 精密度考察 精密吸取同一對照品溶液連續進樣6次，每次4 μL，測定峰面積分別為：3 199.1、3 137.9、3 146.0、3 144.5、3 139.6、3 138.6。峰面積平均為 3 151.0，RSD為0.76%，表明精密度良好。

2.5 重復性試驗 精密稱取同一批號（13020713）樣品6份按供試液制備方法制備，依法測定。結果聚山梨酯 80含量分別為（g·L-1）：14.55、14.68、14.62、14.54、14.37、14.41，平均含量是14.53 g· L-1，其 RSD為 0.84%，表明本品測定方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液分別在配制后 0、4、8、12、24 h進樣 10 μL，測定峰面積分別為：2 057.7、2 125.8、2 097.4、2 055.7、2 069.9。RSD 為1.44%，結果顯示，供試品溶液在 24 h內基本穩定。

2.7 專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按本文條件各進樣10 μL，色譜圖見圖1，在本文條件下，陰性對照無干擾。

2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的同一批（批號：13020713，含量：14.53 g·L-1）的樣品 6份，每份0.5 mL，分別精密加入聚山梨酯80對照品溶液（濃度為5.03 g·L-1）1.5 mL，置10 mL量瓶中，按上述含量測定方法測定，結果平均回收率為100.9%，RSD＝0.65%，具體結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.9 樣品含量測定 取不同廠家的 9批復方麝香注射液樣品，按供試品溶液的配制項下制備供試品溶液，每個批次的樣品平行制備 2份，測定復方麝香注射液中輔料聚山梨酯80的含量，結果見表2。

表2 復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量（n＝2）

3 討論

3.1 檢測器的選擇 聚山梨酯80本身沒有紫外吸收，故不能選擇紫外檢測器，而蒸發光散射檢測器為通用型檢測器，對所有化合物均有相應，故此次試驗采用蒸發光散射檢測器，進行復方麝香注射液中聚山梨酯80的含量檢測。

3.2 色譜柱的選擇 聚山梨酯 80為極性化合物，在常規的C18柱上幾乎無保留，無法測定。此次試驗采用的凝膠色譜柱TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm ×300 mm，5 μm）為排阻色譜柱，其鍵合相能與聚山梨酯80選擇性作用，達到分離檢測的結果。

3.3 流動相與流速的選擇 此次試驗分別比較了乙腈—水（8∶92）、乙腈—0.02 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92）和乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92）三種不同的流動相，結果顯示以乙腈—0.01 mol· L-1乙酸銨溶液（8∶92）為流動相時，聚山梨酯 80得到較好的分離及較高的理論塔板數。同時此次試驗還比較了0.6、0.8和1.0 mL·min-1三種不同流速，結果顯示 0.6 mL·min-1的流速出峰時間晚且峰較寬，1.0 mL·min-1的流速出峰時間較早且柱壓增大，采用 0.8 mL·min-1的流速時峰型較好，出峰時間適中，故選用 0.8 mL·min-1的流速。

4 小結

本研究首次建立復方麝香注射液中聚山梨酯80的HPLC-ELSD測定方法，方法可靠，重現性好，考慮到聚山梨酯80的特殊生理作用且易誘發臨床不良反應，建議在現行標準中增加聚山梨酯 80的含量測定檢查項目。

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Determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD

CHENG Shi-yun1，2，XU Guo-bing1，2
（1.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230031，China；2.Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，Hefei，Anhui 230051，China）

Objective To establish the method for determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD.Methods It was performed by HPLC-ELSD with TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm×300 mm，5 μm）column.Acetonitrile and 0.01 mol ·L-1ammonium acetate（8∶92）was used as mobile phase，the flow rate was 0.8ml·min-1，and the temperature was set at 30℃.The evaporated light scattering detector was adopted.The drift tube temperature was 103℃，and the gas flow rate was 2.5 L·min-1.Results The calibration cueve showed good linearity of polysorbate 80 in the test range from 2.515 to 100.6 μg（r＝0.999 9），and average recovety was 100.87% （n＝6，RSD＝0.65%）.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and reliable，and it can be applied to control the quality of polysorbate 80 in compound shexiang injection.

Compound shexiang injection；polysorbate 80；determination；HPLC；ELSD

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.016

2013-11-11，

2014-01-06）

國家藥典委員會中藥注射劑標準提高項目

程世云，女，碩士研究生

徐國兵，男，主任藥師，碩士生導師，研究方向：中藥質量控制，Email：xgb119＠163.com