iNOS對兔角膜堿燒傷后新生血管形成的影響

修立恒 劉洪濤 曾小平

角膜的透明性是細胞結構和層次交錯排列平衡的直接結果[1]，也是促進和抑制新生血管形成因子之間調節平衡的間接作用結果。已有研究表明血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、一氧化氮(nitric oxide，NO)和缺氧誘導因子(hypoxia-inducible factor，HIF)等均在新生血管形成過程中有著重要作用[2-3]。而病理情況下NO主要是由誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)催化合成，并且還發現氨基胍為一種相對選擇性iNOS抑制劑，能夠特異性抑制iNOS的表達[4]。本實驗通過兔眼堿燒傷建立角膜新生血管模型，采用免疫組織化學法檢測iNOS、VEGF在兔角膜堿燒傷后不同時間段的表達，以探討iNOS對角膜堿燒傷后新生血管形成的影響。

1 材料與方法

1.1材料健康新西蘭大白兔30只，雌雄兼備，體質量2.0～2.5 kg，由重慶市騰鑫比爾動物有限公司提供，裂隙燈下檢查無眼表疾病。氨基胍(美國Sigma公司)，復方托吡卡胺眼液(參天制藥株式會社)，妥布霉素眼液(美國Alcon公司)，小鼠抗兔VEGF單克隆抗體、免疫組織化學兔鼠通用型二抗試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)，小鼠抗兔iNOS單克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司)。

1.2實驗方法

1.2.1角膜堿燒傷新生血管模型的制備30只大白兔均選取右眼為實驗眼，用30 g·L-1的戊巴比妥鈉按1 mL·kg-1的劑量從兔耳緣靜脈緩慢注射，待全身麻醉成功后，再用丙美卡因眼液滴右眼局部麻醉，開瞼器開瞼，棉簽吸干眼表多余的液體后，將直徑為8 mm的浸有1 mol·L-1NaOH的無菌圓形濾紙，放于角膜中央1 min，快速用生理鹽水充分沖洗結膜囊及眼表2 min，建立角膜堿燒傷模型。……