實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)在年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者GSTM1、GSTT1基因拷貝數(shù)變異檢測中的應(yīng)用△

周婧 管懷進(jìn)

年齡相關(guān)性白內(nèi)障(age-related cataract，ARC)是最常見的致盲性眼病[1-2]，其病因和發(fā)病機(jī)制迄今仍不清楚。公認(rèn)的危險因素除了紫外線照射等外源性因素外，衰老、心血管疾病等內(nèi)源性代謝產(chǎn)生的自由基和活性氧也會引起氧化損傷，致使晶狀體的DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)產(chǎn)生過氧化作用，最終導(dǎo)致晶狀體混濁。而谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S transferase，GST)被認(rèn)為是保護(hù)晶狀體免受氧化損傷的重要酶。GST主要通過催化還原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)與毒性化合物結(jié)合而清除自由基，抑制晶狀體發(fā)生氧化損傷從而抑制白內(nèi)障。然而，不同個體的清除能力存在明顯差異，造成這種差異的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)很大程度上來源于基因多態(tài)性。本研究利用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測ARC患者GSTM1、GSTT1基因拷貝數(shù)多態(tài)性，以探討GSTM1、GSTT1基因拷貝數(shù)變異是否與ARC有關(guān)。

1 資料與方法

1.1研究對象2008年6月至8月間，從“江蘇眼病研究”南通流行病學(xué)調(diào)查基地[3]收集ARC組患者279例(558眼)，年齡(69.0±8.4)歲；對照組145例(290眼)，年齡(64.5±4.2)歲；男175例，女249例，均為漢族人(所有人四代內(nèi)均為中國漢族人)。ARC組包括131例皮質(zhì)性白內(nèi)障、70例核性白內(nèi)障、78例后囊下性白內(nèi)障患者。本研究遵循赫爾辛基宣言，獲得南通大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(批號為2010-05)，檢查前所有研究對象均簽署知情同意書。

1.1.1ARC組納入與排除標(biāo)準(zhǔn)晶狀體混濁標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[4]，包括空泡、水裂、板層分離、輪幅狀混濁、楔形混濁、核混濁及后囊膜下混濁等，不包括少數(shù)對視力無影響的點(diǎn)狀混濁；最佳矯正視力<0.7；年齡≥60歲。排除糖尿病、外傷、近視、青光眼、視網(wǎng)膜脫離及其他原因引起的并發(fā)性白內(nèi)障，排除雙眼中任一眼為人工晶狀體眼或無晶狀體眼，排除明顯全身性疾病，排除自由基相關(guān)疾病如糖尿病、心血管疾病、腎臟病和癌癥等。

1.1.2對照組納入與排除標(biāo)準(zhǔn)晶狀體透明，雙眼最佳矯正視力>0.8，年齡≥60歲，與ARC組無親屬關(guān)系，均無ARC家族史，與ARC組年齡、性別相匹配。排……