冠心病患者外周血單個核細胞中microRNA-155及146a的表達水平

李凝詩，楊麗霞，郭瑞威，朱國富，齊 峰，葉金善

冠心病患者外周血單個核細胞中microRNA-155及146a的表達水平

李凝詩，楊麗霞，郭瑞威，朱國富，齊 峰，葉金善

目的 觀察microRNA-155及146a在冠心病患者外周血單個核細胞中的表達水平。方法 148例心內科住院患者分為兩組，對照組35例，冠心病組113例，冠心病組又分為3組，其中AMI組42例，UA組38例，SA組33例。采用實時定量PCR檢測外周血單個核細胞上microRNA-155及146a表達情況。結果 與對照組比較，microRNA-155在冠心病組的表達水平降低，microRNA-146a升高(P<0.05)；AMI組及UA組患者的microRNA-155表達水平顯著低于對照組和SA組(P<0.05)，microRNA-146a的表達水平則高于對照組和SA組(P<0.05)，而AMI組及UA組兩組間無明顯差異(P>0.05)。結論 隨著冠心病病情的進展，患者microRNA-155及146a的表達水平隨之改變，為冠心病患者的篩查及治療提供了一個新方向。

microRNA-155；microRNA-146a；冠心病；表達

microRNA(miRNA)是一類新近發現的內源性非編碼單鏈RNA分子，由20～23個核苷酸構成，在細胞的分化、增殖、凋亡以及多種生物組織的發育調節過程中起著重要的作用[1-2]。動脈粥樣硬化作為冠心病發生的基礎，已成為矚目的焦點。近年來，人們將其定義為一個慢性炎癥性疾病，而microRNA-155(miR-155)及microRNA-146a(miR-146a)為炎癥相關性miRNA。有研究[3]表明，miR-155可通過一些炎性因子誘導而產生，繼而使炎癥反應中的單核細胞增加。miR-146a則是通過上調核因子κB促進Th1細胞的增殖和分化來參與炎癥反應的形成[4]。本研究通過對冠心病患者外周血單個核細胞中miR-155及miR-146a水平的檢測，分析其與病變程度的關系，探索其在冠心病中的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2012年5月～2013年5月成都軍區昆明總醫院心內科住院患者148例，根據臨床表現和冠脈造影分為冠心病組113例和對照組35例(無器質性心臟病，心電圖檢查未見改變者)，冠心病組中又分為急性心肌梗死(AMI)組42例，不穩定型心絞痛(UA)組38例，穩定型心絞痛(SA)組33例。冠心病組經冠脈造影至少一支血管狹窄≥50%，對照組冠脈造影未見冠狀動脈狹窄或痙攣。排除標準：原有心力衰竭、擴張性心肌病、病毒性心肌炎、風濕性心肌炎以及外周血管病；合并肝腎功能不全、腫瘤、DIC、血液系統疾病和免疫疾病。

1.2 標本采集及檢測 所有患者于冠脈造影時抽取橈動脈血3 ml，全血置于1∶9枸櫞酸鈉抗凝管中，用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC)；用血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(Bioteke Corporation)按操作說明提取總RNA；采用反應體系共25 μl的All-in-OneTMmiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒(GeneCopoeia)進行逆轉錄反應；采用All-in-OneTMmiRNA qPCR Kit試劑盒(GeneCopoeia)進行qPCR，每一反應總體積20 μl；應用Bio-Rad CFX96實時定量PCR儀測定其相對表達量(相對表達量=2-ΔΔCt)，同時以U6作為內參。RT和PCR的特異性U6和miRNA引物由GeneCopoeia公司合成。

2 結果

2.1 兩組臨床資料比較 冠心病組除高脂血癥比例明顯高于對照組(P<0.05)外，年齡、性別、危險因素間差異均無統計學意義(P>0.05，表1)。

2.2 兩組miR-155及146a的表達結果 冠心病組外周血單個核細胞上miR-155的表達較對照組明顯降低，miR-146a的表達顯著增高(P<0.05，表2)。

表1 兩組臨床資料比較

注：與對照組比較，①P<0.05

表2 兩組miRNA表達量比較表

注：與對照組比較，①P<0.05；與SA組比較，②P<0.05

2.3 冠心病組各亞組miR-155及146a的表達結果 冠心病組中，不同臨床類型患者隨病情加重，miR-155的表達逐漸降低，即AMIUA>SA>對照組。AMI及UA組與對照組或SA組相比，miR-155的表達水平明顯下降，miR-146a的表達水平明顯上升(P<0.05)。而AMI組及UA組相比，兩指標無統計學差異(P>0.05)。見表2。

3 討論

動脈粥樣硬化是冠心病產生的基礎，其由局部的脂質和復合糖類的聚集、纖維組織的增生和鈣質沉著相互作用，繼而出現斑塊的破裂及局部血栓的形成，因而免疫炎癥反應正是動脈粥樣硬化發生和發展的基礎。近年來對新發現的由20～23個核苷酸構成的內源性非編碼單鏈RNA分子，即miRNA的研究不斷深入，發現其是通過對目標mRNA的翻譯進行抑制或促使其降解，而參與到人體的多種生理和病理過程，起到調控的作用。最近有研究[5-6]提示，miRNA對在心血管疾病和動脈粥樣硬化中起到調節作用的單核巨噬細胞、內皮細胞及血管平滑肌細胞的功能均有所影響，而miR-155及146a也包含其中。

miR-155及146a分別位于人類21號及5號染色體上，均是具有多種功能的miRNA。miR-155因在多種腫瘤疾病中表達，而一度被認為是致癌因子。Lee等[7]發現miR-155會因二氫茉莉酮酸甲酯的處理出現過表達的現象，從而使環氧化酶2的抗炎作用下降。隨著研究的不斷深入，發現miR-155是具有免疫炎性的一種保護性miRNA，其可通過對一系列炎性因子的負反饋調節作用控制炎癥，減少對組織的傷害。并且發現miR-155可直接作用在血管緊張素Ⅱ-1型受體上，從而抑制血管緊張素Ⅱ與之相結合，導致內皮細胞的遷移受阻，同時也抑制了血管緊張素Ⅱ-1型受體的轉錄水平，最終抑制動脈粥樣硬化的發生和發展[8]。miR-146a是miR-146家族中的一種，在急性冠脈綜合征患者的外周血單個核細胞中表達明顯上升。miR-146a通過Toll樣受體通路對免疫和炎癥反應進行調節，Yang等[9]研究發現，miR-146a通過Toll樣受體4抑制巨噬細胞對脂質的攝入及炎性因子的分泌，從而使巨噬細胞的炎性反應能力下降，使斑塊不穩定性增加，導致斑塊破裂的可能性上升。miR-146a表達上調也可通過炎性因子對NFκB途徑的誘導而產生，同時，miR-146a也可通過NFκB促進Th1的增殖和分化，即可加速炎癥的發生發展[10]。

本研究發現，冠心病組中miR-155的表達水平明顯低于對照組，而miR-146a的表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，同時，冠心病組中隨病情的不斷加重，miR-155及146a的表達水平也有所不同，即miR-155的表達水平隨病情加重而下降，miR-146a則上升。

綜上所述，miR-155和miR-146a的表達水平與患者病情相關，其對于動脈粥樣硬化的發生發展可能起到重要作用。進一步研究其作用機制，有望為預防和治療冠心病提供一個新靶點，為藥物的開發提供一個新思路。

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The expression of microRNA-155 and microRNA-146a in peripheral blood mononuclear cells in patients with coronary artery disease

Li Ningshi1,2,Yang Lixia1,Guo Ruiwei1,Zhu Guofu1,Qi Feng1,Ye Jinsan1

1.Department of Cardiology,Kunming General Hospital of Chengdu Military Command,Kunming,Yunnan,650032,China；2.Kunming Medical University,Kunming,Yunnan,650032,China

Objective To observe the expression levels of microRNA-155 and microRNA-146a in peripheral blood mononuclear cells in patients with coronary heart disease(CAD).Methods 148 cases were divided into 2 groups: control group(n=35)and CAD group(n=113)who was sub-divided into 3 subgroups: AMI group(n=42),UA group(n=38)and SA group(n=33).Real-time quantitative PCR was applied to detect the expression of microRNA-155 and microRNA-146a in peripheral blood mononuclear cells.Results Comparing with the level in control group,the expression level of microRNA-155 was lower and microRNA-146a was higher in CAD group(P<0.05);the expression level of microRNA-155 in AMI group and in UA group was significantly lower than that in control group and in SA group(P<0.05),while the expression level of microRNA-146a in AMI group and in UA group was higher than that in control group and in SA group(P<0.05).No obvious difference in the expression level of microRNA-146a was detected between control group and SA group(P>0.05).Conclusions The expression of microRNA-155 and microRNA-146a changes with the progress of CAD,which provides a new method of the screening and clinical treatment of CAD.

microRNA-155;microRNA-146a;coronary artery disease;expression

650032 昆明，成都軍區昆明總醫院心血管內科(李凝詩，楊麗霞，郭瑞威，朱國富，齊 峰，葉金善)；昆明醫科大學(李凝詩)

楊麗霞,電話:0871-64774571;E-mail:doctorylixia@163.com.cn

R 541.4

A

1004-0188(2014)04-0380-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.04.012

2014-01-04)