ACL100全自動凝血分析儀PT、APTT實驗室參考區間的確立

薛 萍 ，江韻琴，方 麗

ACL100全自動凝血分析儀PT、APTT實驗室參考區間的確立

薛 萍 ，江韻琴，方 麗

目的 確立ACL100全自動凝血分析儀凝血酶原時間(PT)和活化部分凝血活酶時間(APTT)本實驗室的正常參考區間。方法 篩選50例年齡在18～60歲、經問卷調查無相關疾病的正常人，空腹采集抗凝血，采用美國實驗儀器(IL)公司ACL100全自動血凝儀進行PT和APTT分析，確立本實驗室的PT、APTT正常參考區間。結果 PT參考區間與廠家提供的參考區間有一定差異，APTT的參考區間與廠家提供的正常參考區間一致。結論 對于新引進的檢測設備，各實驗室應確立自己的正常參考區間，不宜盲目采用廠家提供的正常參考區間。

ACL100全自動血凝儀；凝血酶原時間；活化部分凝血活酶時間；正常參考值

檢測系統是指完成一個檢驗項目所涉及的儀器、試劑、校準品、標準操作程序、質量控制程序、保養等的組合，是實現檢驗結果準確性和可比性的重要手段。臨床實驗室在建立了檢測系統的同時，需要驗證廠家的參考區間是否適合本實驗室患者的群體。ACL100全自動血凝儀是美國實驗儀器(IL)公司產品，試劑說明書提供的參考區間是建立在美國人群基礎上。鑒于各地區人群、種族的生理差別及各實驗室質量控制和規范管理的差異，本研究對該設備廠家建議PT和APTT參考值進行了驗證，并確立了在本實驗室的正常參考區間。

1 材料

1.1 儀器與試劑 美國IL公司ACL100型全自動凝血分析儀；美國IL公司配套試劑：PT超敏檢測試劑盒(PT-FIB HS PLUS，批號：N0415612，有效期2014-02)；部分凝血活酶時間試劑盒(APTT 測定試劑：批號：N0716816，有效期2014-04)；美國IL公司商業定值質控：正常水平質控物[Control(Normal)，批號：N0903582，有效期2014-03]，高水平異常質控物[Control(High)，批號：N0415683，有效期2014-02]。

1.2 標本來源 2013年11月12日，篩選合格的正常健康體檢者(年齡18～60歲，男性28人，女性22人，肝功能正常，無血液系統疾病及出凝血機能障礙)50人，早晨空腹靜坐0.5 h，使用109 mmol/L檸檬酸鈉1∶9抗凝的BD真空采血管規范采血3 ml，立即混勻，3000 r/min離心15 min，取上層乏血小板血漿進行檢測。

2 實驗方法及結果

按照《全國臨床檢驗操作規程(第3版)》對檢測系統性能的核實(驗證)要求，對ACL100全自動凝血分析儀進行性能驗證，包括不精密度和準確度實驗，合格后按照ACL100全自動凝血分析儀操作規程進行受檢血漿樣本分析。

2.1 不精密度分析 根據NCCLS EP15-A文件要求，取2個水平的商業定值質控品，重復檢測至少20次，計算CV%和SD值。判斷標準：將美國國會1988年通過的臨床實驗室修正案(CLIA'88)中規定的PT、APTT允許誤差(分別為靶值±15%、靶值±15%)的1/4作為臨床不精密度可接受標準，即2個水平的商業定值質控品PT、APTT不精密度CV≤3.75%(1/4 CLIA'88)為臨床可接受標準。檢測結果見表1，不精密度符合判斷標準。

表1 不精密度檢測結果(n=20)

2.2 正確度驗證 由于PT、APTT沒有國際參考方法或參考物質，本實驗通過參加四川省臨檢中心2013年第一次凝血實驗室間質量評比，如果實驗室的檢驗結果與其他實驗室，特別是與權威實驗室或參比實驗室的結果具有可比性，那么檢驗結果的可信度就可得到證實。結果本實驗室PT、APTT檢測結果在省臨檢中心凝血室間質量評比的可接受范圍，通過正確度驗證。

2.3 樣本檢測 采用該設備及配套試劑檢測上述采集的50份血漿樣本，PT結果分布為10.4～14.6(12.6±1.2)s；APTT結果分布為25.26～35.06(30.16±2.45)s。各數據符合正態分布，求95%參考區間的上下限。

PT下限值：平均值-1.96=12.6-1.96×1.2=10.24；上限值：平均值+1.96=12.6+1.96×1.2=14.95≈15；確定本實驗室PT正常參考區間為10.24～15.00 s。

APTT下限值：平均值-1.96 s=30.16-1.96×2.45=25.35,上限值：平均值+1.96 s=30.16+1.96×2.45=34.96≈35 s；確定本實驗室APTT正常參考區間為25.35～35.00 s。

2.4 本實驗室正常參考區間與廠家建議參考區間比較 從表2可見，本實驗室 PT參考區間下限10.24 s比廠家提供的11.80 s低1.56 s，APTT參考區間上限35.0 s比廠家提供的38.4 s低3.4 s，其他與廠家提供的一致。確立本實驗室正常參考區間為PT 10.24～15.00 s，APTT 25.35～35.00 s，并定期驗證。

表2 本實驗室正常參考區間與廠家建議參考區間比較

2.5 結果 通過本實驗室對50例正常健康體檢人群血漿標本的測試數據統計分析，PT本實驗室參考區間下限比廠家建議參考區間低1.56 s，上限基本一致，是否與人群、種族差異有關還待考證。由于PT縮短見于先天性因子Ⅴ增多癥、口服避孕藥、高凝狀態和血栓病等，建議本實驗室使用新確立的PT正常參考區間10.24～15.00 s，并定期驗證。

APTT實驗室正常參考區間上限比廠家建議參考區間低3.4 s，下限基本一致。由于APTT待測者的測定值較正常對照值(30.16 s)延長超過10 s(即40.16 s)以上才有臨床意義，廠家建議APTT上限為38.4 s，故可使用廠家建議正常參考區間25.4～38.4 s，并定期驗證。

3 討論

在臨床檢驗中，PT和APTT是指導臨床溶栓、抗凝治療及保證手術安全的必要檢查項目，對凝血機制相關疾病的診斷和治療有重要的臨床意義[1]。參考區間是臨床判別患者凝血功能是否正常的重要依據，《全國臨床檢驗操作規程(第3版)》以及美國臨床實驗室修正案(CLIA'88)均明確：“實驗室應驗證廠家的參考區間是否適合實驗室患者的群體。”

通過本實驗發現，本實驗室確立的正常參考區間與廠家建議參考區間略有差異，分析可能與受檢健康人群區域生理差別有關。同時，在查詢到的其他文獻中[2-5]，報道的PT、APTT參考區間均有差別，這源于不同地區受檢健康人群、不同的檢測系統。

由此可見，在引進國外先進的檢測系統同時，實驗室確立當地人群的參考區間，并驗證廠家的參考區間是否適合本實驗室患者的群體是必要，而且是重要的質量管理措施之一；是為臨床提供有診斷參考價值檢測報告的重要保證。

[1] 呂純莉，張天芬，潘娟,等.臨床實驗室凝血四項檢查正常參考區間的建立[J].國際檢驗醫學雜志，2013,34(15):1978-1979.

[2] 溫奕欣,洪曉鵬.252例健康人凝血參數參考區間調查分析[J].臨床醫藥實踐,2005,14(5)：379-380.

[3] 付廷芳.重慶市涪陵區625例健康成人PT、APTT、FIB參考區間調查[J].現代醫藥衛生,2006，22(20)：3166.

[4] 張德文,陳芳.自動血凝儀測定200例健康人PT、APTT、TT、FIB結果分析[J].四川省衛生管理干部學院學報,2001，20(3)：181-182.

[5] 紀宏文,馬麗.中國北京地區健康人群血栓彈力圖參考區間的建立[J].中華醫學雜志,2011，91(14)：980-983.

610083 成都，成都軍區總醫院健康體檢中心檢驗科(薛 萍)，胸外科(江韻琴)；成都軍區疾病預防控制中心(方 麗)

方 麗，電話：028-86598526

R 446.11

A

1004-0188(2014)04-0423-02

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.04.030

2014-02-14)