隔藥餅灸對急性胃黏膜損傷家兔腧穴局部能量代謝的影響

周志剛 羅薇絮 張學強 覃 肯 吳煥淦

(1 上海中醫(yī)藥大學研究生院，上海，201203; 2 江西中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，南昌，330004; 3 上海市針灸經(jīng)絡研究所，上海，200030)

實驗研究

隔藥餅灸對急性胃黏膜損傷家兔腧穴局部能量代謝的影響

周志剛1，2羅薇絮2張學強2覃 肯2吳煥淦3

(1 上海中醫(yī)藥大學研究生院，上海，201203; 2 江西中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，南昌，330004; 3 上海市針灸經(jīng)絡研究所，上海，200030)

目的：觀察隔藥餅灸對急性胃黏膜損傷家兔黏液層陽性層厚度和腧穴局部組織Na+/K+-ATP酶活性的影響，探討隔藥餅灸治療急性胃黏膜損傷的機制。方法：采用無水乙醇損傷造模法建立急性胃黏膜損傷模型，將40只家兔隨機分成正常組和造模組，待模型在確定后，造模組家兔再隨機分成模型組、隔藥餅灸組和西藥組，每組9只。隔藥餅灸組將制好的藥餅置于后三里穴上，灸6壯，1次/d，連續(xù)灸7 d。其他各組僅做與隔藥灸組相同的固定，不予任何治療，共7 d。干預后，收集胃黏膜組織和后三里穴組織，分別按照實驗處理要求做相應的處理。結果：隔藥餅灸組胃黏膜黏液層陽性厚度較模型組明顯增厚(P<0.05)，隔藥餅灸組后三里穴的Na+/K+-ATP酶活性較模型組顯著升高。結論：改善“后三里”腧穴能量代謝可能是保護和修復胃黏膜損傷的作用途徑之一。

隔藥餅灸;急性胃黏膜損傷;能量代謝

灸法是一種以溫熱刺激為主要特色的自然療法。施灸的主要材料是艾絨，艾絨燃燒時產(chǎn)生0.8～5.6 μm的紅外光譜，分別產(chǎn)生非熱效應和熱效應[1]。龐小峰[2]等發(fā)現(xiàn)由ATP分子水解釋放的生物能量傳遞的新理論的物理和生物學基礎，實驗證明蛋白質分子能吸收波長為1～3 μm和5～7 μm的紅外光，后者能導致蛋白質分子中的酰胺鍵的振動，從而促使生物能量沿蛋白質分子傳遞，使生物組織健康生長。研究發(fā)現(xiàn)人體穴位在2～2.5 μm光譜處存在一個明顯的紅外輻射峰，這與ATP轉化成ADP時釋放能量時發(fā)出的光子波長有一致性[3]。

現(xiàn)代實驗證明艾灸對急性胃黏膜損傷有良好的修復和保護作用[4-5]。研究表明艾灸可以通過干預線粒體信號通路cyt-c和Apaf-1發(fā)揮保護胃黏膜作用[7]。但目前艾灸腧穴局部產(chǎn)生的生物效應和胃黏膜損傷后修復關系還不明確。本實驗擬以急性胃黏膜損傷家兔為模型，在家兔“后三里”上施灸，觀察隔藥餅灸對胃黏膜的修復作用(黏膜損傷指數(shù)和胃黏膜黏液層陽性層厚度)和腧穴局部生物效應(線粒體形態(tài)和ATP酶活性)變化，探討隔藥餅灸治療急性胃黏膜損傷家兔的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康新西蘭兔40只，雌雄各半，體重約(2.2±0.5)kg，由上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，動物編號：SCXK2010。實驗動物購回后適應性飼養(yǎng)7 d，飲食、飲水，以及一般狀況正常者納入實驗。

1.2 主要制劑和試劑 艾柱，藥餅，硫糖鋁(四川錫成藥業(yè)有限公司提供)，0.250 g/片，Na+/K+-ATP酶試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)，愛先蘭-糖原(AB-PAS)染色試劑盒(珠海貝索生物技術有限公司提供)。

1.3 模型制備及分組 采用無水乙醇損傷造模法建立急性胃黏膜損傷模型[8]。造模前動物均禁食48 h，隨機分為正常組和造模組。正常組用生理鹽水按2.35 mL/kg體重灌胃，其余用無水乙醇按2.35 mL/kg體重灌胃。24 h后恢復普通飲食。造模結束后在造模組中隨機選取3只、正常組組1只處死，取胃黏膜，冰凍切片，HE染色，光鏡觀察判斷造模成功與否。利用隨機數(shù)字表將造模組27只大鼠隨機分成模型組、隔藥餅灸組、西藥對照組，每組9只。

1.4 穴位選擇 家兔后三里穴的定位：根據(jù)《實驗針灸學》[9]家兔針灸穴位定位：小腿背外側上1/5折點處，約當腓骨頭下1.2 cm，脛骨嵴后1 cm。

1.5 治療方法 將動物用皮毛理發(fā)器對其左、右后肢外側被毛剪剃干凈，置于屏蔽室中，將各組家兔固定于兔固定架內固定，使其雙后腿伸出。適應室溫10 min后進行不同的方法干預處理。A組(正常組)、B組(模型組)：僅做與隔藥灸組相同的固定，不予任何治療。C組(隔藥灸組)：將制好的藥餅置于后三里穴上，灸6壯，1次/d，連續(xù)灸7 d。D組(西藥組)：根據(jù)家兔體表面積換算每日硫糖鋁的用量。每日灌藥量為25 mg/kg，1次/d，連續(xù)灌藥7 d。

1.6 標本采集與制備

1.6.1 急性胃黏膜損傷家兔胃黏膜AB/PAS染色 從靠近幽門部剪取一塊約1.3 mm左右的胃黏膜，4%多聚甲醛固定，逐級酒精脫水，常規(guī)石蠟包埋，切片，AB/PAS染色，在光鏡下觀察。并用測微尺在光鏡×100倍下測量胃黏膜AB/PAS陽性層厚度，自竇、體交界500 μm處開始，每張切片取平均間隔測量10個部位后取平均值。

1.6.2 后三里穴組織Na+/K+-ATP酶活力 取“后三里”穴合適位置組織進行分析，所取組織重量為112 mg左右。冰水浴條件下機械勻漿，2 500 r/min，離心10 min，取上清用生理鹽水20倍稀釋，取樣0.05 mL。經(jīng)過酶促反應和定磷兩個步驟，在636 nm處，1 cm光徑，雙蒸水調零，測各管吸光度值。計算方式如下。

2 結果

2.1 艾灸對家兔胃黏膜AB/PAS陽性層厚度比較

與正常組比較，模型組家兔胃黏膜AB/PAS陽性層厚度明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較，隔藥餅灸組兔胃黏膜AB/PAS陽性層厚度明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);隔藥餅灸組家兔胃黏膜AB/PAS陽性層厚度高于西藥組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 各組家兔胃黏膜AB/PAS陽性層厚度的比較

注：與模型組比較，**P<0.01，與正常組比較，△△P<0.01。

2.2 艾灸對各組家兔”后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活力的影響 與正常組比較，西藥組和模型組的家免“后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(均P<0.01);經(jīng)隔藥灸及硫糖鋁干預后，隔藥餅灸組和西藥組家兔后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性均明顯高于模型組，差異具有統(tǒng)計學意義(均P<0.01);隔藥灸組“后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性低于正常組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);西藥組家兔后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性明顯低于正常組和隔藥餅灸組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01，P<0.05)。

表2 各組家兔后三里穴組織Na+/K+-ATP酶活性的比較±s)

注：與正常組比較，**P<0.01，與模型組比較，△△P<0.01。

3 討論

本實驗探討艾灸對急性胃黏膜損傷家兔腧穴局部能量代謝的影響，實驗結果顯示在“后三里”穴上施隔藥餅灸顯著降低急性胃黏膜損傷家兔胃黏膜損傷指數(shù)，明顯增加胃黏膜黏液層陽性層厚度，提高局部組織的Na+/K+-ATP酶活性。

艾灸能保護胃黏膜免于損傷和修復胃黏膜損傷。急性胃黏膜損傷的發(fā)生發(fā)展與胃黏膜的侵襲/防御-修復動態(tài)平衡密切相關。艾灸作用于腧穴產(chǎn)生生物效應，誘導機體產(chǎn)生內源性保護物質，達到保護和修復胃黏膜作用。通過抗炎(如抑制IL-1β、TNF-α等[11-12]、抗氧化[13]、抑制凋亡等抗損傷[14]和胃黏膜細胞增殖及胃黏膜重建[15]等保護效應。

ATP能量代謝和疾病的病理狀態(tài)密切相關。經(jīng)絡是運行氣血、聯(lián)系臟腑和體表及全身各部的通道[16]，腧穴是臟腑經(jīng)絡氣血輸注于軀體外部的特殊部位，也是疾病的反應點和針灸等治法的刺激點[17]。ATP是細胞能量獲得、轉換、儲存和利用等環(huán)節(jié)的聯(lián)系紐帶。ATP酶(ATPase)是這類介導主動轉運的膜蛋白，可將細胞內的ATP水解為ADP，并利用高能磷酸鍵貯存的能量完成離子的跨膜轉運[18]。有實驗發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注腦損傷大鼠海馬線粒體ATP酶活性較正常組顯著降低[19]。緩慢性心律失常大鼠的心肌Na+/K+-ATP酶活性顯著降低[20]。大運動量耐力訓練大鼠骨骼肌Na+/K+-ATP酶活性也明顯低于正常人[21]。這種病態(tài)時的低能量代謝也在人身上得到證實。有研究發(fā)現(xiàn)[22-24]，冠心病患者的某些腧穴(如勞宮、內關、神門等)一定范圍內紅外光譜明顯低于正常人。潰瘍性結腸炎患者的沖陽穴和正常人相比較，在某些波長范圍內，輻射強度明顯低于正常人[25]。所有這些研究提示在病理狀態(tài)下，ATP能量代謝低下。

艾灸的近外紅光譜、腧穴波譜相似可能引發(fā)共振，促進ATP代謝。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)：艾絨燃燒時產(chǎn)生0.8～5.6 μm紅外光譜，且峰譜多數(shù)集中在1.5～3.5 μm附近[1，26-27]。根據(jù)普朗克量子能量公式計算，一個ATP分子轉化成ADP時所釋放的能量如未被利用而以光子的形式輻射出來，其光子的波長在2.5 μm附近。據(jù)研究表明[28]：扣除黑體輻射后，腧穴的紅外光譜在2～2.5 μm和15 μm處出現(xiàn)了高輻射峰。根據(jù)物理學原理，如腧穴局部細胞ATP分子釋放的光子輻射波譜與艾灸紅外輻射波相似，兩者引發(fā)共振。高效艾灸的紅外輻射促使ATP轉化為ADP，并釋放能量。研究表明當單色紅光到近紅外光(600～1 000 nm)輻射細胞時，光輻射可改變線粒體呼吸鏈氧化還原狀態(tài)，促進機體的ATP能量代謝[29-31]。

綜上所述，本實驗結果隔藥灸可以改善急性胃黏膜損傷家兔的潰瘍指數(shù)，胃黏膜AB/PAS陽性層厚度，提高Na+/K+-ATP酶活性。實驗結果提示急性胃黏膜損傷愈合與隔藥灸提高腧穴局部組織Na+/K+-ATP酶活性有關，但其機制還有待于進一步探討。

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(2014-03-26收稿 責任編輯：王明)

Effects of Herbs-Partitioned moxibustion on energy metabolism of local acupoint in rabbits with acute gastric mucosal lesion

Zhou Zhigang1，2，Luo Weixu2，Zhang Xueqiang2，Qin Ken2，Wu Huangan3

(1PostgraduateinstituteofShanghaiUniversityofTCM，Shanghai201203，China; 2SchoolofPreclinicalmedicalSciencesofJiangxiUniversityofTCM，330004，China; 3ShanghaiResearchInstituteofAcupunctureandmeridian，Shanghai200030，China)

Objective：To observe the effects of Herbs-Partitioned moxibustion on the positive mucus layer thickness and Na+/K+-ATP enzymatic activity in rabbits with acute gastric mucosal lesion for exploring the mechanisms of moxibustion action on model of acute gastric mucosal lesion.Methods：Anhydrous ethanol damage is adopted to establish model of gastric mucosal lesion.30 of 40 rabbits were randomly selected as model group，the rest as control.After the successful models were confirmed，30 model rabbits were randomly allocated to model group，herbs-partition moxibustion group and western medicine group.Herbs partition moxibustion group were treated by moxibustion on Housanli points，6 columns once a day.Western medicine group were administrated by gavage at dosage of 25 mg/kg a day.The other groups just fixed the same as herbs-partition moxibustion group without any treatment.The treatments continued for 7 days.the gastric mucosa and tissues of Housanli points were collected on 8th day，corresponding procedures were done at request of experiment.Results：The positive mucus layer thickness of herbs-partition moxibustion group was more significantly increased than those of model group(P<0.05).The Na+/K+-ATP enzymatic activity of herbs-partition moxibustion group was significantly increased than those of model group.Conclusion：Improving the local energy metabolism of local acupoint in rabbits with acute gastric mucosal lesion may be one of the mechanisms of restoring and protecting the mucosal lession.

Herbs-partition moxibustion;Acute gastric mucosal lesions;Energy metabolism

國家自然科學基金資助項目(編號：81001549)

周志剛(1971.05—)，男，江西蓮花縣人，博士，副教授，研究方向：灸法作用的基本原理與應用規(guī)律研究，通信地址：江西省南昌市灣里區(qū)興灣大道818號，郵編：330004，電話：(0791)87118672

吳煥淦(1956.11—)，男，浙江仙居縣人，博士，教授，研究方向：灸法作用的基本原理與應用規(guī)律研究，通信地址：上海市針灸經(jīng)絡研究所，郵編：200030，電話：(021)64382190

R245.8

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.05.023