電針三陰交對自然更年期大鼠焦慮行為學的影響

徐 玲 李 由 秦 卓 程 凱

(北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京，100029)

電針三陰交對自然更年期大鼠焦慮行為學的影響

徐 玲 李 由 秦 卓 程 凱

(北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京，100029)

目的：觀察電針三陰交穴對自然更年期大鼠焦慮行為學的影響。方法：將大鼠分為正常組、模型組和治療組，治療組在三陰交穴處進行電針，隔日1次，共治療15次。正常組、模型組常規飼養，隔日抓取刺激。記錄在高架十字迷宮實驗中焦慮行為數據(進入開放臂次數、向下探究次數、封閉臂后腿直立次數和進入開放臂時間等)。結果：與正常對照組比較，模型組的OE%、OT%均顯著減少，差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)，HD值均顯著升高，差異有統計學意義(P<0.01)表現出明顯的焦慮癥狀，模型組、治療組的OE+CE差異均無統計學意義(P>0.05)；與模型組比較，治療組的OE%及OT%均顯著增高，差異有統計學意義(P<0.05)，治療組的HD值明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)；RE值無統計學意義。結論：電針三陰交有一定的抗焦慮作用。

電針；高架十字迷宮；自然更年期大鼠；三陰交

圍絕經期綜合征(Peri-menopausal Syndrome，PMS)是婦科的常見病，指婦女絕經前后因卵巢功能衰退，出現性激素波動或減少所致的以植物神經系統功能紊亂為主，伴有神經心理癥狀的一組癥候群[1]，調查顯示，2030年我國50歲以上婦女將達2.8億，當今社會的激烈競爭，生活作息的不規律等都影響著圍絕經期婦女的身心健康[2]。在圍絕經期這一過程中，由于卵巢功能逐漸退化，大部分PMS患者因不能適應圍絕經期的生理變化而表現出特有的身心癥狀，如因植物神經功能紊亂而出現的陣發性潮熱、眩暈、出汗、失眠耳鳴，焦慮不安等[3]。圍絕經期焦慮癥臨床表現為焦慮不安、心煩、失眠、敏感多疑等癥狀，常困擾更年期婦女。研究發現，大約75%左右的更年期婦女出現神經精神癥狀，10%～15%婦女因癥狀較嚴重需要接受治療[4]。本實驗以自然衰老更年期大鼠為模型，通過電針三陰交治療后，對大鼠進行高架十字迷宮實驗，采用動物行為活動分析系統來分析判定行為學指標，以初步評價電針三陰交穴對更年期大鼠焦慮行為學的改善作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組及模型制備 根據文獻方法，11～15月齡雌性SD大鼠機體病理生理與婦女更年期類似，表明已進入更年期。故我們選取11～15月齡雌性SD大鼠作為本實驗的動物模型。陰道組織涂片法是有效區分大鼠動情周期各個階段的一種簡便方法[5]，通過陰道涂片法即每日定時將大鼠的陰道涂片用堿性美藍溶液染色后在顯微鏡下觀察其組織學變化，連續觀察3個動情周期(15 d)，根據細胞形態、種類及數量篩選符合圍絕經期變化規律的大鼠16只，體重(320±20)g。根據隨機數字法分為：更年期對照組(模型組)8只和電針治療組(治療組)8只。另將3個月齡大鼠8只作為青年對照組(正常組)，體重(220±20)g，共3組。所有SD大鼠均為清潔級，由北京維通利華動物中心提供(許可證編號為SCXK(京)2012-0001)。動物置于清潔柜中，實驗室內溫度保持在(20±2)℃，濕度為65%，12 h光暗周期，自由攝食和飲水。

1.2 儀器 高架十字迷宮、高架十字迷宮視頻分析系統、韓氏穴位神經刺激儀(北京華衛公司)高架十字迷宮結構：由2條相對的開放臂(Open Arm，長×寬分別為45 cm×15 cm)、兩條相對的封閉臂(Enclosed Arm，長×寬×高分別為45 cm×15 cm×30 cm)及一個聯接4條臂的中央平臺(Central Platform，15 cm×15 cm)組成，即開放臂-中央平臺-開放臂或封閉臂-中央平臺-封閉臂，此二者互相垂直成為“╈”(plus)形狀。封閉臂頂部開放。迷宮四條臂合中央平臺均為深灰色，整體固定于鐵制支架上，使其距地面高度為50 cm。在中央平臺上方安置攝像頭。毫針：華佗牌不銹鋼針灸針(規格：長13 mm，直徑0.22 mm；蘇州華佗醫療器械有限公司制造)。

1.3 針刺治療 穴位定位和刺法參考林文注主編《實驗針灸學》選取雙側三陰交穴，直刺3 mm，進行電針刺激，采用疏密波，頻率2/100 Hz，強度以針柄輕微抖動為宜，每次留針20 min。隔日1次，共計15次。其他各組常規飼養，隔日抓取。

1.4 行為學觀測方法 操作間內保持較暗的光線(以1.5 m距離處能區分大鼠細微活動的最低亮度為準)、室溫24 ℃、安靜條件下進行。迷宮測試開始前將待測大鼠放入1個鼠籠內，任其自由探究5 min后迅速放于迷宮的中央平臺處，使其頭部正對其中任一開放臂，釋放后即開始觀察測試并同步錄像。每只大鼠測試5 min。取出大鼠后，用干抹布蘸75%乙醇及時清除每只動物的排泄物，待乙醇揮發擴散后，再進行下一只大鼠的測試。

1.5 行為學觀察指標 1)進入開放臂次數(Open Arm Entry，OE)：進入到任一開放臂的次數，以大鼠4個爪子均進入到臂內為準，中途一個爪子從該臂中完全退出則為該次進入活動完成；2)進入開放臂時間(Open Arm Time，OT)，單位：s；3)進入封閉臂次數(Close Arm Entry，CE)：進入到任一封閉臂的次數，以大鼠4個爪子均進入到臂內為準；4)進入封閉臂時間(Close Arm Time，CT)，單位：s；5)OE百分率=OE/(OE+CE)×100%；6)OT百分率=OT/(OT+CT)×100%；7)進入開放臂和封閉臂的總次數(OE+CE)：表示大鼠的運動活力；8)向下探究次數(Head Dipping，HD)：大鼠置身于中央平臺或開放臂時，一邊用前爪抓住迷宮邊緣，一邊把頭部和肩部伸出開放臂的邊緣向迷宮外面探究的行為次數；9)封閉臂內后腿直立次數(Rearing，RE)：大鼠在封閉臂內前腿抬起以后腿支持使身體豎立的次數。

1.6 分析及數據處理方法 運用國際公認的荷蘭Noldus公司開發的動物行為活動標記分析系統The Observer 5.0和Etho Vision 3.0兩套軟件對各組大鼠有關自主活動、學習與記憶、焦慮等行為進行分析評價。采用SPSS 17.0統計軟件進行統計，數據以均數±標準差表示，先進行正態分布檢驗，計量資料進行單因素方差分析，方差不齊者用秩和檢驗。

2 結果

2.1 電針三陰交對大鼠OE%、OT%、OE+CE的影響 與正常對照組比較，模型組的OE%、OT%均顯著減少(P<0.05，P<0.01)表現出明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，治療組的OE%及OT%均顯著增高(P<0.05)。(見表1)

表1 各組大鼠OE、OT和OE+CE比較

注：與模型組比較，*P<0.05，與正常組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

2.2 電針三陰交對大鼠HD和RE的影響 與正常組比較，模型組的HD值均顯著升高(P<0.01)，表現明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，治療組的HD值顯著降低(P<0.05)。(見表2)

表2 各組大鼠的HD和RE比較

注：與模型組比較，*P<0.05，與正常組比較，△△P<0.01。

3 討論

圍絕經期綜合征中醫稱為“絕經前后諸癥”范疇，歷代文獻關于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中[6]。其病機主要為腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，臟腑氣血功能失調。隨著我國人口結構不斷老齡化和社會競爭日益激烈，不良的工作環境、家庭關系緊張及精神等因素影響，婦女進入更年期逐漸增加、年齡提早，從而使圍絕經期焦慮癥的發病率亦明顯增加[7]。因此治療和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會意義。

三陰交在調節內分泌、鎮痛、調節神經遞質、增強免疫功能、調節血流變以及對子宮肌電收縮影響和大腦中樞參與方面已取得一定認識[8]。三陰交作為足太陰脾經經穴，又是足太陰、足厥陰、足少陰三條經脈的交會穴，本穴在千金方中言其別名為承命、太陰[9]，具有補脾胃，助運化，化濁利濕，通經活絡，調和氣血，滋補肝腎之功效，婦女的生理特點與肝脾腎三臟關系密切，因此三陰交穴在治療婦科病癥方面有著獨特的優勢，常作為婦科疾病的首選穴位。本實驗通過電針三陰交穴，來改善圍絕經期所出現的身心癥狀。

90%的圍絕經女性擁有完整的卵巢，且其激素水平呈現逐漸衰退過程[10]，去勢模型大鼠除影響雌激素外還使促性腺激素釋放激素、黃體生成素及促卵泡素等水平快速下降[11]。不僅如此，卵巢的摘除還會影響雄激素的水平[12]。采用X線照射破壞卵巢所致癥狀來反映圍絕經期綜合征主要表現，但經X線照射后可明顯出現放射線腸炎癥狀，嚴重可伴有大鼠死亡[13]?？傊捎萌菽Ｐ秃蚗線照射破壞卵巢模型雖然能達到激素水平的變化，但不能準確地模擬自然衰老過程出現的病理生理變化。本實驗以自然衰老更年期大鼠為模型，因圍絕經期出現的機體變化不是單純卵巢的生理改變和相關激素水平的變化，而是機體整體的改變，由于大鼠在自然衰老過程中未受到人為地干預，其機體生理病理的變化與人類圍絕經期的變化極為相似，可較客觀地反映人體的變化過程。這也符合中醫順應自然的理論。

實驗中所采用的高架十字迷宮是國際公認的動物焦慮行為測評的首選裝置。利用動物對新異環境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼形成動物的矛盾沖突來考察動物的焦慮狀態[14]。并且其作為焦慮大鼠模型的評價方法具有很好的復測信度[15]。觀察實驗指標以大鼠OE%與OT%反映大鼠焦慮狀態；以(OE+CE)反映大鼠的運動能力；以開放臂和中央臺區HD次數反映在非保護區的探索行為[16]，與焦慮程度具有相關性；封閉臂RE值也可用來觀察電針三陰交有無鎮靜作用及鎮靜強度。本實驗結果中，模型組的OE%、OT%分別為(14.44±3.85)、(3.10±0.64)表明自然衰老更年期大鼠較少進入或者停留于開放臂，而趨向探究封閉臂，而電針治療組的OE%、OT%值分別為(26.85±5.99)、(12.70±4.01)較模型對照組顯著增加(P<0.05)，說明該組大鼠對開放臂和非保護區的探究增加，提示電針三陰交具有抗焦慮作用。與模型組比較，治療組的HD值顯著降低，HD具有統計學意義(P<0.01)，因此，我們可以認為電針三陰交具有一定的抗焦慮作用。

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(2013-12-26收稿 責任編輯：曹柏)

Effect of Electrical Acupuncture (EA) in Sanyinjiao Acupoint on Anxiety Behavior of Natural Climacterium

Xu Ling， Li You，Qin Zhuo， Cheng Kai

(SchoolofAcupuncture-moxibustionandTuina，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029，China)

Objective： To observe the effect of electrical acupuncture in Sanyinjiao acupoint on anxiety-like behavior of natural climacterium rats. Methods：The rats were divided into normal control group， model group and treatment group. Rats in the treatment group were given electro-acupuncture at Sanyinjiao acu-point once every other day for15 sessions. Rats in the other two groups were fed with conventional methods， and

stimulation every other day. The data of anxiety behavior were recorded， including times of entering the open arm， times of rear leg upright standing in the closed arm， time entering the open arm， etc. Results： Compared with normal control group， the percentages of close-area time (OE%) and open-area time (OT%) showed an decreasing trend in model group， and the difference was significant (P<0.05，P<0.01) which showed significant symptoms of anxiety; but the difference of OE and CE between the model group and treatment group was not statistically significant (P>0.05); compared with model group， the percentages of OE and OT increased greatly， and the difference was statistically significant (P<0.05); the value of HD in model group increased greatly， and the difference was statistically significant (P<0.01)， the HD value in treatment group showed a downward trend， and the difference was significant (P<0.05)， but the RE value was not statistically significant. Conclusion： Electrical acupuncture in Sanyinjiao acupoint shows certain anti-anxiety effect.

EA; Elevated plus maze; Natural Menopause rat; Sanyinjiao

徐玲(1985.3—)，女，碩士，研究方向：腧穴特異性，E-mail：xulingshuai@126.com

程凱(1971.7—)，男，博士，副主任醫師，研究生導師，研究方向：腧穴特異性，E-mail：Kevin@chengs.cn

R-332；R246.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.05.027