小花棘豆對家兔血清蛋白的影響

王帥　胡建軍　陳根元　張玲　馬春暉

摘要：探討了小花棘豆對家兔血清蛋白含量的影響，進一步揭示了小花棘豆對家兔的毒性作用機理。結果表明，各試驗組家兔的血清總蛋白、α球蛋白含量無明顯變化（P>0.05）；血清球蛋白、β球蛋白含量均顯著高于對照（P<005）；血清γ球蛋白含量呈先升高后降低趨勢；血清白蛋白含量低于對照（P<0.05），試驗組家兔血清白蛋白與球蛋白含量的比值（A/G）在試驗期間均呈降低的趨勢；小花棘豆對試驗家兔的肝臟具有損害作用。

關鍵詞：小花棘豆；血清蛋白；家兔

中圖分類號：S859.87文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0164-02

收稿日期：2013-05-08

基金項目：國家自然科學基金（編號：31160049）；新疆生產建設兵團博士基金專項（編號：2008JC07）；新疆生產建設兵團塔里木畜牧科技重點實驗室開放課題（編號：HS201207）。

作者簡介：王帥（1985—），男，山西長治人，碩士，實驗師，主要從事牧草資源開發利用研究。E-mail：wangshuaidky@126.com。

通信作者：馬春暉，教授，主要從事牧草生產與加工研究。Tel：（0993）2055868；E-mail：chunhuima@126.com。小花棘豆為豆科棘豆屬植物，屬于瘋草類有毒植物，廣泛分布于新疆和田、阿克蘇等地區，苦馬豆素是其主要毒性成分。在牧草缺乏的冬季和初春，當家畜大量采食小花棘豆，就會中毒甚至死亡，這對畜牧業生產造成了嚴重危害[1]。國內外學者在對甘肅棘豆[2-3]、黃花棘豆[4]、冰川棘豆[5]等瘋草的毒性試驗研究中，通過非特異性酯酶染色、E-玫瑰花環試驗以及血清蛋白電泳試驗證實，中毒動物的細胞免疫功能降低；但也有研究表明，在低于中毒劑量的情況下，苦馬豆素不僅有抗腫瘤效果，而且能增強機體的免疫功能[6-7]。小花棘豆在新疆南疆地區分布較廣，在塔里木河中下游天然草地有分布，蓋度最高達95%[1]。目前對家畜小花棘豆中毒方面的研究較多，但未見小花棘豆對動物血清蛋白影響的報道。本研究探討小花棘豆中毒對家兔細胞免疫功能的影響，以期為全面認識小花棘豆的毒性作用，合理利用小花棘豆資源提供依據。

1材料與方法

1.1材料

小花棘豆于2012年8月采集于和田地區策勒縣，由塔里木大學動物科學學院草業科學學科組鑒定。取植株地上部分陰干、粉碎，過20目篩后備用。

總蛋白和白蛋白試劑盒購自長春匯力生物技術公司；醋酸纖維素薄膜購自浙江黃巖曙光化工廠；其他試劑均為國產分析純。

Carry 100型紫外-可見分光光度計，澳大利亞；BS124型精密電子天平，德國賽多力斯；Direct-Q3型超純水系統，美國Millipore；DYY-6型電泳儀，北京六一儀器廠；DK-8D型電熱恒溫水槽，上海精宏實驗設備有限公司。

1.2試驗動物

4～5月齡家兔24只，雌雄各半，體重（2.0±0.1） kg，購自塔里木大學動物科學學院實驗站。家兔購回后內服左旋咪唑 3 mg/kg 體重驅蟲，臨床觀察2周，確認臨床健康后將其隨機分為對照組、試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組，每組6只，分籠飼養。對照組飼喂青干草和少量精料，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組分別按照5、10、20 g/kg體重的劑量飼喂小花棘豆，待采食完畢后再添加青干草和精料，自由飲水。

1.3測定指標

試驗前后每隔7 d空腹耳緣靜脈采血1次，共采血 11次，迅速分離血清，檢測血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量，并利用醋酸纖維薄膜電泳法進行血清蛋白電泳分析，計算總蛋白中白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白所占百分率及各自含量，計算白蛋白（A）與球蛋白（G）含量的比值（A/G）。

1.4數據分析

使用SPSS 11.5軟件的One-Way ANOVA進行單因素方差分析及Duncans多重比較，檢驗誤差為5%、1%。

2結果與分析

2.1家兔血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量的變化

所有攻毒家兔在試驗期內血清總蛋白含量均與對照組差異不顯著（P>0.05），但攻毒家兔血清白蛋白含量呈下降趨勢，球蛋白含量呈上升趨勢（圖1、圖2、圖3）。其中試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組在試驗21 d時血清白蛋白含量顯著低于對照組（P<0.05），試驗Ⅰ組在28 d時血清白蛋白含量顯著低于對照組（P<0.05）。從試驗49 d起攻毒家兔血清白蛋白含量趨于穩定。試驗Ⅱ組、試驗Ⅲ組血清球蛋白含量在 28 d 時顯著高于對照組（P<0.05），試驗Ⅰ組血清白蛋白含量在42 d時顯著高于對照組（P<0.05）。

2.2家兔血清α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白含量的變化

試驗期內攻毒家兔血清α球蛋白含量與對照組差異不顯著（P>0.05）， 而β球蛋白含量呈升高趨勢，γ球蛋白含量呈先上升后降低的趨勢（圖4、圖5、圖6）。試驗 21 d 試驗Ⅲ組血清β球蛋白含量顯著高于對照組（P<005），35d時試

驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組血清β球蛋白含量均顯著高于對照組（P<0.05）。所有攻毒家兔血清γ球蛋白含量在14 d時均顯著高于對照組（P<0.05），其中試驗Ⅲ組、試驗Ⅱ組血清γ球蛋白含量在35 d時開始下降，試驗Ⅲ組血清γ球蛋白含量在70 d時顯著低于對照組（P<0.05）；試驗Ⅰ組血清γ球蛋白含量從49 d起開始降低，并在第63天時低于對照組。

2.3家兔血清白蛋白與球蛋白比值的變化

由圖7可見，3個試驗組血清白蛋白與球蛋白比值（A/G）均呈下降趨勢。其中35 d時試驗Ⅲ組A/G值顯著低于對照組（P<0.05），49d時試驗Ⅱ組A/G值顯著低于對照

3結論與討論

本研究通過小花棘豆對家兔的攻毒試驗，發現小花棘豆可導致家兔血清白蛋白含量顯著下降，β球蛋白含量顯著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趨勢，說明小花棘豆中的有毒成分可導致家兔肝損傷。

肝臟是合成蛋白質的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝臟合成。如果發生肝臟損傷，蛋白質合成就有可能出現障礙，從而導致血液中蛋白含量的變化。目前血液中蛋白含量的變化是臨床判斷肝臟是否病變的重要指標[8]。 其中β球蛋白含量的升高與自身免疫性疾病、膽汁郁積性肝病和慢性肝病有關；γ球蛋白幾乎都是免疫性抗體，與動物機體的免疫能力密切相關；白蛋白含量降低多見于營養不良、蛋白吸收合成障礙、肝功能疾病、腎病綜合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清總蛋白含量在試驗期內無明顯變化，而白蛋白含量明顯下降；攻毒家兔的α球蛋白與對照組

差異不顯著（P>0.05），β球蛋白和試驗前期γ球蛋白均出現升高趨勢，與莫重輝等關于家兔甘肅棘豆中毒的報道[3]一致，可能是因為家兔小花棘豆中毒導致肝臟受到損傷，從而引起白蛋白合成功能的障礙。試驗后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量開始下降，說明動物體液免疫功能降低，淋巴結、脾臟及骨髓的網狀內皮系統開始受到損害。本研究中試驗家兔球蛋白含量的變化與耿果霞等[5]、顧百群等[9]的報道有明顯差異，可能與攻毒草類差異、受試動物種類不同及肝臟受損程度有關，有待于進一步研究。

正常情況下，白蛋白與球蛋白的比值應在一定范圍內波動。白蛋白由肝細胞合成，當肝臟嚴重受損時白蛋白合成量減少，其降低程度與肝臟損傷程度呈正相關[10]。球蛋白由機體免疫器官合成，當外來毒素侵入體內時，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明顯，且與小花棘豆的飼喂量呈明顯的時間-劑量效應關系，說明小花棘豆的毒性成分可導致家兔的肝、腎損傷，這與莫重輝等[3]、耿果霞等[5]的報道一致。

參考文獻：

[1]王帥，陳根元，胡建軍，等. 南疆地區小花棘豆化學成分的初步研究[J]. 江蘇農業科學，2011，39（2）：453-454.

[2]Van Kampen K P，James L F. Pathology of locoweed （Astragalus lentiginosus） poisoning in sheep；sequential development of cytoplasmic vacuolation in tissues[J]. Veterinary Pathology，1970，7（6）：503-508.

[3]莫重輝，沈明華，趙寶玉. 甘肅棘豆對家兔血清蛋白含量動態變化的影響[J]. 中國獸醫科學，2010，40（12）：1280-1284.

[4]張生福，何寶祥，李新民. 黃花棘豆對小白鼠某些免疫功能的影響[J]. 青海畜牧獸醫雜志，1991（1）：15-16.

[5]耿果霞，李勤凡，王建華. 山羊冰川棘豆中毒的血清蛋白分析[J]. 西北農業大學學報，1999，27（5）：71-74.

[6]張志敏，王建華，趙興華，等. 苦馬豆素對小鼠腹腔巨噬細胞免疫功能的影響[J]. 中國農業科學，2008，41（10）：3422-3428.

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[8]劉立昌，張磊，鄧毅峰，等. 愈肝片對D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷的保護作用[J]. 廣州中醫藥大學學報，2003，20（1）：57-58.

[9]顧百群，段得賢，崔中林，等. 山羊甘肅棘豆中毒臨床病理學研究[J]. 西北農林科技大學學報：自然科學版，1990，18（3）：62-67.

[10]劉宗平.獸醫臨床癥狀鑒別診斷學[M]. 北京：中國農業出版社，2008.焦鳳超，李迎曉，陳宏智，等. 河南省信陽市鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定和血清型分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（1）：166-167.

本研究通過小花棘豆對家兔的攻毒試驗，發現小花棘豆可導致家兔血清白蛋白含量顯著下降，β球蛋白含量顯著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趨勢，說明小花棘豆中的有毒成分可導致家兔肝損傷。

肝臟是合成蛋白質的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝臟合成。如果發生肝臟損傷，蛋白質合成就有可能出現障礙，從而導致血液中蛋白含量的變化。目前血液中蛋白含量的變化是臨床判斷肝臟是否病變的重要指標[8]。 其中β球蛋白含量的升高與自身免疫性疾病、膽汁郁積性肝病和慢性肝病有關；γ球蛋白幾乎都是免疫性抗體，與動物機體的免疫能力密切相關；白蛋白含量降低多見于營養不良、蛋白吸收合成障礙、肝功能疾病、腎病綜合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清總蛋白含量在試驗期內無明顯變化，而白蛋白含量明顯下降；攻毒家兔的α球蛋白與對照組

差異不顯著（P>0.05），β球蛋白和試驗前期γ球蛋白均出現升高趨勢，與莫重輝等關于家兔甘肅棘豆中毒的報道[3]一致，可能是因為家兔小花棘豆中毒導致肝臟受到損傷，從而引起白蛋白合成功能的障礙。試驗后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量開始下降，說明動物體液免疫功能降低，淋巴結、脾臟及骨髓的網狀內皮系統開始受到損害。本研究中試驗家兔球蛋白含量的變化與耿果霞等[5]、顧百群等[9]的報道有明顯差異，可能與攻毒草類差異、受試動物種類不同及肝臟受損程度有關，有待于進一步研究。

正常情況下，白蛋白與球蛋白的比值應在一定范圍內波動。白蛋白由肝細胞合成，當肝臟嚴重受損時白蛋白合成量減少，其降低程度與肝臟損傷程度呈正相關[10]。球蛋白由機體免疫器官合成，當外來毒素侵入體內時，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明顯，且與小花棘豆的飼喂量呈明顯的時間-劑量效應關系，說明小花棘豆的毒性成分可導致家兔的肝、腎損傷，這與莫重輝等[3]、耿果霞等[5]的報道一致。

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本研究通過小花棘豆對家兔的攻毒試驗，發現小花棘豆可導致家兔血清白蛋白含量顯著下降，β球蛋白含量顯著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趨勢，說明小花棘豆中的有毒成分可導致家兔肝損傷。

肝臟是合成蛋白質的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝臟合成。如果發生肝臟損傷，蛋白質合成就有可能出現障礙，從而導致血液中蛋白含量的變化。目前血液中蛋白含量的變化是臨床判斷肝臟是否病變的重要指標[8]。 其中β球蛋白含量的升高與自身免疫性疾病、膽汁郁積性肝病和慢性肝病有關；γ球蛋白幾乎都是免疫性抗體，與動物機體的免疫能力密切相關；白蛋白含量降低多見于營養不良、蛋白吸收合成障礙、肝功能疾病、腎病綜合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清總蛋白含量在試驗期內無明顯變化，而白蛋白含量明顯下降；攻毒家兔的α球蛋白與對照組

差異不顯著（P>0.05），β球蛋白和試驗前期γ球蛋白均出現升高趨勢，與莫重輝等關于家兔甘肅棘豆中毒的報道[3]一致，可能是因為家兔小花棘豆中毒導致肝臟受到損傷，從而引起白蛋白合成功能的障礙。試驗后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量開始下降，說明動物體液免疫功能降低，淋巴結、脾臟及骨髓的網狀內皮系統開始受到損害。本研究中試驗家兔球蛋白含量的變化與耿果霞等[5]、顧百群等[9]的報道有明顯差異，可能與攻毒草類差異、受試動物種類不同及肝臟受損程度有關，有待于進一步研究。

正常情況下，白蛋白與球蛋白的比值應在一定范圍內波動。白蛋白由肝細胞合成，當肝臟嚴重受損時白蛋白合成量減少，其降低程度與肝臟損傷程度呈正相關[10]。球蛋白由機體免疫器官合成，當外來毒素侵入體內時，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明顯，且與小花棘豆的飼喂量呈明顯的時間-劑量效應關系，說明小花棘豆的毒性成分可導致家兔的肝、腎損傷，這與莫重輝等[3]、耿果霞等[5]的報道一致。

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[9]顧百群，段得賢，崔中林，等. 山羊甘肅棘豆中毒臨床病理學研究[J]. 西北農林科技大學學報：自然科學版，1990，18（3）：62-67.

[10]劉宗平.獸醫臨床癥狀鑒別診斷學[M]. 北京：中國農業出版社，2008.焦鳳超，李迎曉，陳宏智，等. 河南省信陽市鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定和血清型分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（1）：166-167.