三七保健酒中三七皂苷含量測定與加速穩定性研究

李啟照，尹 偉，戴一

（安徽新華學院 藥學院，安徽 合肥 230088）

三七保健酒中三七皂苷含量測定與加速穩定性研究

李啟照，尹 偉，戴一

（安徽新華學院 藥學院，安徽 合肥 230088）

目的：通過對三七保健酒中功效成分的測定和穩定性研究,建立具有明確功能的重要成分的質量指標,有效保證保健酒的產品品質.方法：選擇保健酒中皂苷建立符合相關要求規定的檢測方法,采用高效液相色譜法檢測，同時進行加速穩定性試驗.結論:該方法穩定、快速準確、精密度高、重現性好,可用于三七保健酒的質量控制.為三七保健酒的開發利用提供參考.

三七保健酒；三七皂苷；高效液相色譜法；穩定性

三七保健酒是根據經典秘方選用三七、枸杞、桂圓、米酒等多味中藥，采取現代中藥超微粉碎技術及濃縮提取工藝研制生產而成的純中藥制劑.具有止血生肌，消腫止痛，舒筋活血，活血祛瘀.君藥三七主要有效成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1，為保證三七保健酒質量，本文采用HPLC測定了三七藥材中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量.同時進行加速穩定性試驗.

1 儀器與試劑

高效色譜儀Aglient1260，G1315D檢測器；三七皂苷對照品：三七R1(批號120704-200923)，人參Rg1(批號1207-200917)，人參Rb1(批號120745-200815)均購自中國藥品生物制品檢定所；三七藥材，由安徽新華學院藥學院生藥教研室鑒定；乙腈、甲醇均為色譜純.

2 方法與結果

2.1 測定方法選擇

本品處方由三七、枸杞、桂圓、紅花等十幾味中藥組成，三七為君藥選擇作為該制劑含量測定藥材.三七中主要含三七素、三七皂苷等成分，研究表明[1]，三七中的有效活性部位為三七皂苷，三七皂苷的含量測定方法文獻報道有比色法、薄層掃描法、HPLC法等，其中HPLC法報道較多，該法被藥典收載較為靈敏準確，因此本實驗采用HPLC法測定三七保健酒中三七皂苷R1+人參皂苷Rb1+Rg1的含量，作為考察其制劑的質量控制指標[2].據藥典的方法及參照文獻人參皂苷Rg1和Rb1及三七皂苷R1提取條件，乙醚脫脂處理后，使用甲醇索氏提取，萃取總皂苷用水飽和正丁醇反復萃取，用水洗除雜，除去干擾的其它成分，從而使定量分析的結果更加準確[3].

2.2 色譜條件及系統適應性試驗

色譜柱：Vp-ODS150×4.6mm；流動相：乙腈為流動相A，水為流動相B，進行梯度洗脫；流速為1mL/min，檢測波長203nm，柱溫30℃.理論板數按三七皂苷R1峰計算應不低于4000.參照藥典三七項下高效液相色譜法中的液相條件，優化出本試驗的流動相梯度，乙腈∶水(15∶85 12 min 30∶70 45min15∶85v/v).

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱定人參皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1對照品適量加甲醇，分別制成每1mL含人參皂苷Rb10.4mg、Rg10.4mg和三七皂苷R10.1mg的混合溶液，作為對照品溶液.

2.3.2 供試品溶液的制備

精密吸取三七保健酒10mL，置索氏提取器中，加適量乙醚，加熱回流1小時，棄去乙醚液，藥渣揮去乙醚；置索氏提取器中，加適量甲醇，加熱提取至甲醇無色，揮干甲醇提取液，殘渣加水20mL溶解，用水飽和的正丁醇提取3次（20mL，20mL，15mL），合并提取液，再用30mL正丁醇飽和的水洗滌，水洗液棄，蒸干正丁醇液，殘渣加甲醇溶解，定量轉移至25mL量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液[4].

2.4 標準曲線與線性范圍

精密稱取適量對照品人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1，加甲醇分別制成每1mL含人參皂苷Rg10.4mg、人參皂苷Rb10.4mg和三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得.吸取4μl、8μl、12μl、16μl、20μl進樣測定，以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及 Rb1對照品溶液進樣量（μl）為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標，進行線性回歸,回歸方程和相關系數為:Y=84396X+75747,r=0.9990(n=5)；Y=57175X -187.2,r=0.9992(n=5)；Y=12266X-1475.8,r=0.9996 (n=5).結果表明:人參皂苷Rg1在1.65～8.32μg、人參皂苷Rb1在1.58～7.85μg、三七皂苷R1在0.425～2.16μg范圍內進樣量與峰面積線性關系良好[5]. 2.5穩定性試驗

依藥典含量測定項下方法，精密吸取供試品溶液于0、2、4、6、8小時分別進樣一針，記錄色譜圖，對本品溶液穩定性情況進行分析，實驗結果測得人參皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的RSD分別為1.42%，1.26%和1.22%.表明本品溶液的穩定性較好，結果見表1.

表1 穩定性性試驗考察表

2.6 精密度試驗

按照藥典含量測定項下方法，分別精密吸取供試品溶液10μl，連續進樣6針，記錄色譜圖，對本法的精密度情況考察分析，結果測得人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的RSD分別為1.29%，1.36%，1.49%.表明本法精密度較好.結果見表2.

表2 精密度試驗考察表

2.7 重現性試驗

按含量測定項下方法制備供試品溶液，取同一批號的本品試樣，精密稱取5份制備供試品溶液.各吸取10μl分別注入液相色譜儀，測定其峰面積，統計學處理，人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的RSD分別為1.47%，1.42%，1.39%，實驗結果表明本法重現性較好，結果見表3.

表3 重現性試驗考察表

2.8 加樣回收率試驗

制取供試品溶液:精密量取試樣10mL與索氏提取器中，同時精密稱取人參皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1適量,分別加入上述索氏提取器中，按照上述方法制取供試品溶液.精密吸取10μL供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，分別計算其回收率.人參皂苷Rb1、Rg1、和三七皂苷R1的平均回收率分別為98.29%，98.22%，98.31%.RSD%分別為1.13%，1.22%，1.34%.實驗結果符合相關要求.結果見表4，表5，表6.

樣品中含量(mg) 加入對照品量(mg) 實測含量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1.66 1.80 3.426 97.87 1.71 1.80 3.435 96.95 1.77 1.80 3.592 98.91 98.29 1.13 1.81 1.80 3.654 99.45 1.67 1.80 3.464 98.31

表6 三七皂苷R1加樣回收試驗結果

表5 人參皂苷Rg1加樣回收試驗結果

2.9 樣品的含量測定

根據藥典規定：三七藥材中三七皂苷R1+人參皂苷Rb1+Rg1的含量應不得低于5.0%；據此折算三七保健酒中三七皂甙R1+人參皂苷Rb1+Rg1的理論含量應不得低于8mg/mL，經對三批三七保健酒進行含量測定，三七皂甙R1+人參皂苷Rb1+Rg1的總含量為8.27-11.35mg/mL.根據保健食品有關標準規定考慮實際生產的特點，將其下限定為合量限度，即本品每mL含三七皂甙R1+人參皂苷Rb1+ Rg1應不低于8.0mg/mL. 2.10加速穩定性試驗

圖5 對照品的HPLC圖譜

圖6 藥材的HPLC圖譜

圖7 人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1混合對照品HPLC圖譜

圖8 三七藥材HPLC圖譜

將三批樣品在溫度20℃±5℃，相對濕度70% ±5%的條件下放置3個月，在0個月、1個月、2個月、3個月定期進行各項測定.按照GB2757—81《蒸餾酒及配制酒衛生標準》、GB2758—81《發酵酒衛生標準》、QB/T1981—94《露酒》標準等相關標準要求研究三七保健酒的穩定性.實驗結果顯示：三批樣品在感官指標棕紅色藥香、酒香協調，口感醇厚、色澤透明、有光澤、無異味、無沉淀物；生物穩定性在120、126、128、132德勒度；藥汁量（w/w）在12%、12.6%、12.9%、13.4%；總糖（以葡萄糖計）g/L為97、113、118、121；總酸（以乙酸計）g/L在5.6、6.1、6.4、6.7；衛生學指標均符合GB/T5009.48規定控制菌數未檢出.通過三批試樣的加速穩定實驗，三七保健酒各項指標沒有明顯的變化，質量穩定.

3 討論

藥典中未見三七保健酒的含量測定項，無法實現對三七保健酒的有效質量控制；參照《中國藥典》2010年版一部中三七含量測定方法，并結合本制劑特點采用高效液相色譜法，測定三七藥材中人參皂苷Rb1+Rg1+三七皂甙R1的含量.作為控制三七保健酒的質量的方法.方法穩定，精密度高，重現性好，快速準確，能較好地對生產過程中的原藥材及成品進行質量監控，提高了制劑標準的可行性及可靠性.可作為該制劑質量控制方法.穩定性檢查研究，按照相關標準對三批樣品的感官指標、生物穩定度、藥汁量、總糖、總酸及衛生學指標進行檢查，結果樣品各項指標均符合要求.三七保健酒穩定性較好.

〔1〕國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部). [M]北京:化學工業出版社，2010.7，10.

〔2〕陳玉勇,秦楓,朱海燕.三七總皂苷的乙醇超聲法提取工藝及急性毒性研究 [J].安徽農業科學, 2008(7)：40-41.

〔3〕葛竹興,秦楓.高效液相色譜—質譜聯用法檢測三七總皂苷中Rg_1和Re的含量[J].中國醫藥導刊,2008(9)：121-123.

〔4〕孔繁晟,賁永光,曾昭智.三七總皂苷超聲提取工藝研究[J].廣東藥學院學報,2011(4)：36-37.

〔5〕侯茂奇,王長虹,楊莉.正交實驗優選三七總皂苷的提取工藝研究[J].上海中醫藥大學學報,2009 (4)：47-48.

〔6〕周家明，高明菊，趙愛.從鮮三七根莖中提取三七總皂苷的工藝研究[J].中國產業,2011(5)：111-113.

R284

A

1673-260X（2014）04-0128-04

安徽教育廳自然科學研究項目（KJ2012B071）；校級質量工程（2011Rcpyx01;2012xwsjx07)