布地奈德對鼻息肉中核因子κB和堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響

朱華斌，張建華，劉仲娟，徐穎，丁俊杰，蔣燕飛，鄭逸品

（江蘇大學(xué)附屬上海第八醫(yī)院耳鼻咽喉科，上海200235）

布地奈德對鼻息肉中核因子κB和堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響

朱華斌，張建華*，劉仲娟，徐穎，丁俊杰，蔣燕飛，鄭逸品

（江蘇大學(xué)附屬上海第八醫(yī)院耳鼻咽喉科，上海200235）

目的：觀察布地奈德鼻腔霧化治療對鼻息肉中核因子κB（NF-κB）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）表達(dá)的影響。方法：對40例鼻息肉患者行布地奈德鼻腔霧化治療，并以10例正常中鼻甲組織作為對照，應(yīng)用免疫組化的方法檢測鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表達(dá)。結(jié)果：經(jīng)布地奈德治療后鼻息肉中NF-κB和b-FGF的表達(dá)較治療前明顯降低（P＜0.05），且二者呈顯著的正相關(guān)性（r＝0.53，P＜0.01）。結(jié)論：布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉可下調(diào)NF-κB和b-FGF的表達(dá)。

鼻息肉；布地奈德；核因子κB；堿性成纖維細(xì)胞生長因子

目前認(rèn)為鼻息肉是多環(huán)節(jié)多途徑引起的炎癥性病變，其形成與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一種核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，對多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)具有調(diào)節(jié)功能，是炎癥反應(yīng)途徑中的重要介質(zhì)。堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，b-FGF）具有促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化作用和促血管生成及參與細(xì)胞外基質(zhì)形成等作用，且作為較強(qiáng)的NF-κB激活劑，可促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展。本研究通過布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉，觀察鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)變化，來探討鼻息肉局部治療的可行性。

1 對象與方法

1.1 對象

選取40例鼻息肉患者為治療組，年齡27～59歲，平均（39±12）歲，按慢性鼻竇炎、鼻息肉的分型、分期標(biāo)準(zhǔn)［1］，均為Ⅱ型1－3期。治療組予布地奈德（阿斯利康公司）混懸液1 mg，2次／d鼻腔霧化治療，共7 d。治療組40例患者在治療前及治療后各取鼻息肉組織做標(biāo)本，對照組10例正常中鼻甲標(biāo)本在鼻中隔手術(shù)同期取得。要求入選病例均無變應(yīng)性鼻炎、哮喘等變應(yīng)性疾病史，且前1個月內(nèi)未使用過糖皮質(zhì)激素和抗組胺藥及無上呼吸道感染病史。

1.2 方法

所有標(biāo)本用4%低聚甲醛固定，石蠟包埋、切片，并常規(guī)行HE染色。采用Envision二步法（丹麥Dako公司）行免疫組化染色，兔抗人NF-κB抗體和b-FGF抗體（武漢博士德生物工程有限公司）工作濃度為1∶100，DAB顯色。同時，PBS取代一抗作陰性對照，以排除非特異性的染色。

在光學(xué)顯微鏡下觀察，若細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)清晰的顆粒狀棕黃色物質(zhì)即為NF-κB、b-FGF蛋白陽性細(xì)胞。對每一張免疫組化切片的陽性染色區(qū)域隨機(jī)選取5個視野（10×40倍），采用高分辨率圖像分析儀自動檢測陽性區(qū)域的光密度值，將5個值平均后，即為該片NF-κB、b-FGF的參考值。以上實驗操作，在不知切片分組的情況下均請一位病理科主治醫(yī)師重新操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

所測實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，布地奈德治療前后的NF-κB和b-FGF表達(dá)強(qiáng)度差異采用配對t檢驗，NF-κB和b-FGF的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)情況

治療組鼻息肉中NF-κB蛋白的免疫組化染色表達(dá)強(qiáng)度較對照組（1.09±1.07）明顯增強(qiáng)，b-FGF蛋白的表達(dá)也較對照組（0.51±0.43）明顯增強(qiáng)。且經(jīng)布地奈德治療后NF-κB、b-FGF的表達(dá)強(qiáng)度均較治療前明顯減少（P＜0.01）。見表1。

表1 治療組鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)

2.2 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的免疫組化結(jié)果

在鼻息肉黏膜上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)中散在的炎癥細(xì)胞的胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)有NF-κB蛋白的陽性表達(dá)，其中以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)為顯著。經(jīng)布地奈德鼻腔霧化治療后NF-κB蛋白的表達(dá)減少。見圖1。

在鼻息肉黏膜上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)中散在的炎癥細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有b-FGF蛋白的陽性表達(dá)。經(jīng)布地奈德霧化治療后b-FGF蛋白的表達(dá)減少。見圖2。

圖1 鼻息肉中NF-κB的表達(dá)（DAB染色10×20）

圖2 鼻息肉中b-FGF的表達(dá)（DAB染色10×20）

2.3 鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性

經(jīng)Pearson相關(guān)分析，鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r＝0.53，P＜0.01）。

3 討論

近年研究表明，鼻息肉的發(fā)生發(fā)展過程與炎癥密切相關(guān)，有多種重要的細(xì)胞因子參與。而NF-κB是介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號傳遞的重要核轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥和免疫反應(yīng)中起到中樞作用。NF-κB被激活時進(jìn)入核內(nèi)，與DNA上特異的啟動位點結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄，其活化可引起大量炎癥介質(zhì)分泌，參與和調(diào)節(jié)多種炎癥蛋白基因的表達(dá)［2］，形成炎癥級聯(lián)反應(yīng)，并持續(xù)增強(qiáng)。國內(nèi)外的研究表明，NF-κB在鼻息肉組織中呈陽性表達(dá)［3］，NF-κB通過調(diào)控IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、TNF-α、NO等細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄而作用于鼻息肉形成過程的級聯(lián)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)鼻息肉的發(fā)生發(fā)展［4－5］。目前認(rèn)為糖皮質(zhì)激素是治療鼻息肉的有效藥物［6－7］，其抗炎能力主要是抑制NF-κB和促炎基因DNA的結(jié)合，或增加合成IκB，使NF-κB激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被阻斷，最終減少鼻黏膜中多種炎性細(xì)胞的數(shù)量，并抑制炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)。而布地奈德是一種新型的非鹵化糖皮質(zhì)激素，具有高受體結(jié)合力和較強(qiáng)的抗炎作用。本實驗結(jié)果顯示，鼻息肉組織中NF-κB蛋白有較強(qiáng)的表達(dá)，主要位于鼻息肉上皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中，以胞質(zhì)中表達(dá)更強(qiáng)，明顯高于正常中鼻甲組織的表達(dá)，且經(jīng)布地奈德鼻腔霧化治療后可減輕其表達(dá)強(qiáng)度。這提示鼻息肉的炎癥反應(yīng)中，轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活可能是一個中心環(huán)節(jié)，其激活可介導(dǎo)炎癥介質(zhì)的釋放和活化，形成炎癥級聯(lián)反應(yīng)，使得炎癥的損傷持續(xù)放大，導(dǎo)致鼻息肉的發(fā)生發(fā)展。但可通過布地奈德來抑制NF-κB蛋白的活性，以減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，達(dá)到治療鼻息肉的目的。

b-FGF是一種多效能的細(xì)胞生長因子，具有促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化、黏附作用和促血管生成及參與細(xì)胞外基質(zhì)形成等作用。Powers等［8］在鼻息肉組織中檢測到b-FGF mRNA，并且發(fā)現(xiàn)在鼻息肉上皮細(xì)胞層基底膜存在b-FGF強(qiáng)免疫染色，提示b-FGF在鼻息肉組織中促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞的增殖分化。本實驗結(jié)果顯示，鼻息肉組織中的b-FGF蛋白較正常中鼻甲組織的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且布地奈德鼻腔霧化治療可減輕其表達(dá)強(qiáng)度。實驗結(jié)果同時發(fā)現(xiàn)，鼻息肉中b-FGF和NF-κB的表達(dá)具有明顯的正相關(guān)性（r＝0.53，P＜0.01）。這表明鼻息肉組織中的NF-κB對b-FGF活化具有一定的正作用。

本研究結(jié)果顯示，布地奈德鼻腔霧化治療鼻息肉，可抑制鼻息肉中NF-κB和b-FGF蛋白的表達(dá)，同時可起到清理鼻腔的作用，并可減輕糖皮質(zhì)激素全身使用所引起的不良反應(yīng)［9］，是一種可行的鼻息肉局部治療的措施。

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R765.25

B

1671－7783（2014）04－0366－03

10.13312／j.issn.1671-7783.y140069

*：通訊作者，E-mail：hndxzhjh＠sina.com

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2014－03－12 ［編輯］何承志