珠子參ISSR-PCR反應體系的建立及優化

宋小妹，許苗苗，劉銀環，王 薇，劉 超，楊新杰，崔九成(陜西中醫學院，咸陽 712046)

珠子參為五加科人參屬植物珠子參PanaxjaponicusC.A. Mey. var.major(Burk.) C.Y. Wu et K.M. Feng或羽葉三七PanaxjaponicusC.A. Mey. var.bipinnatifidus(Seem.) C.Y. Wu et K.M. Feng的干燥根莖，常用于治療氣陰兩虛、煩熱口渴、虛勞咳嗽、跌撲損傷、關節疼痛、咳血、外傷出血等癥[1]。珠子參也是民間習用特色中藥材太白七藥之一，分布于我國陜西、四川、云南、甘肅、貴州等地。目前對珠子參的研究主要集中在生藥、化學、藥效[2-7]等方面，而在植物分子生物學研究方面的報道甚少；而珠子參由于受其生長環境等因素及人為過度采挖而被列為瀕危藥用植物。因此，開展珠子參的分子生物學和遺傳學多樣性方面的研究，對珠子參種質資源保護及資源的開發利用都將產生重要影響。

簡單重復序列間區多態性標記(ISSR)是Zietkiewicz等[8]于1994年提出的一種基于微衛星(SSR)的十分有效的分子標記，具有多態性高、產率中等、重復性好、操作簡單、引物開發無需任何DNA序列信息等優點，在不同的物種間具有通用性，比較適合于基因組未測序已知DNA序列信息量小的物種使用。目前，ISSR標記已廣泛應用于植物種質資源鑒定評價、遺傳圖譜構建、重要性狀標記、進化及分子生態學等研究中[9]。本實驗旨在探索珠子參基因組DNA最優提取方法，建立和優化ISSR-PCR反應體系，為珠子參的分子鑒別提供理論基礎和技術支持。

1 儀器與試藥

1.1儀器 CT 9612型基因擴增儀(杭州柏恒科技有限公司)；DYY-10C型電泳儀(北京六一儀器廠)；UV-1800紫外檢測器(日本島津公司)；S.M-76S型凝膠成像系統(意大利BIO-RAD Lab公司)；……