HPLC法測定金線草不同部位沒食子酸的含量

樊寶娟，劉雪峰，曾愛國，常 春，傅 強*(.西安交通大學藥學院，西安 7006；2.陜西省食品藥品檢驗所，西安 70065)

金線草為民間草藥，始載于《本草拾遺》。其為蓼科金線草屬植物金線草Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier，以根或全草入藥，其味辛、苦，性涼[1]。又名毛蓼、山蓼、一串紅、鐵拳頭、紅花鐵菱角、蓼子七、雞心七、豬蓼七、海根[1-6]。該藥性淡、平，具有涼血止血、清熱利濕、散瘀止痛之功效，主治風濕骨痛、胃痛、咳血、吐血、便血、血崩、經期腹痛、產后血瘀腹痛、跌打損傷等癥[7]。文獻記載，同屬短毛金線草根莖含有沒食子酸(gallic acid)、左旋兒茶精(catechin)、左旋表兒茶精(epicatechin)、左旋表兒茶精-3-O-沒食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate)、原矢車菊素B2(procyanidin B2)、原矢車菊素B2-3-O-沒食子酸酯(procyanidin B2-3-O-gallate)。趙友興等[8]從金線草的乙醇提取物中共分離鑒定了11個化合物：沒食子酸、腺苷、槲皮素等。其中沒食子酸是可水解鞣質的單體，具有抗病毒作用。本文采用高效液相色譜法測定了金線草不用部位中沒食子酸的含量，進一步為金線草的開發利用提供依據。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters1525高效液相色譜儀，Waters717檢測器，Empower2487色譜工作站(美國沃特斯公司)；Sartorius BS224S電子天平(德國賽多利斯公司)。

1.2試藥 金線草藥材，自采于陜西秦嶺和巴山地區，共8批，經鑒定；對照品及對照藥材，均由中國食品藥品檢定研究院提供；沒食子酸(批號：110831-200803)；甲醇為色譜純(美國天地公司)；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件 采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相[9]：甲醇-1 mL·L-1磷酸溶液(4∶96)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長272 nm。在上述條件下，供試品中沒食子酸色譜峰與其他雜質峰可達到基線分離，分離度大于1.5。見圖1。

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品8.20 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL，制成質量濃度為82.0 μg·mL-1對照品溶液。

圖1 HPLC圖

2.2.2供試品溶液的制備 取本品適量，粉碎，取樣品約0.2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分數為50%甲醇溶液50 mL，密塞， 加熱回流3 h，放冷，濾過，濾液蒸干，用體積分數50%甲醇溶液溶解并轉移至5 mL量瓶中，用體積分數50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3重復性實驗 取樣品(批號1主根)共6份，精密稱定，分別按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，沒食子酸含量的RSD為1.98%，結果表明樣品重復性良好。

2.4線性關系考察 分別精密吸取質量濃度為8.20，16.4，41.0，82.0，164.0，205.0和410.0 μg·mL-1沒食子酸對照品溶液10 μL，在上述2.1色譜條件下測定峰面積，以峰面積(Y)對對照品進樣量(X，μg)作標準曲線，計算回歸方程：Y=3 156.8X-5 364.1，r=1(n=7)，表明沒食子酸對照品的進樣量在0.082～4.1 μg范圍內，與峰面積呈良好的線性關系。

2.5精密度實驗 取對照品溶液，連續進樣6次，考察其峰面積，結果6 次沒食子酸峰面積的RSD為0.33%。

2.6穩定性實驗 取樣品1-B的供試品溶液分別在0，4，8，12，16，20和24 h測定，其RSD為0.58%。

2.7加樣回收率實驗 取已測得含量的樣品(批號1主根)6份各0.1 g，分別精密加入質量濃度為8.20 μg·mL-1的對照品溶液2 mL，揮干溶劑，再照供試品溶液同法制備，按2.1色譜條件進行測定，結果6份的平均回收率為101.3%，RSD為1.7%。見表1。

表1 沒食子酸加樣回收實驗結果

2.8樣品含量測定 按上述色譜條件，測定8批樣品，結果見表2。

表2 金線草藥材中沒食子酸含量測定結果

3 討論

含量測定提取方法的考察：分別以體積分數50%乙醇、乙醇、甲醇、水作為提取溶劑，結果體積分數50%甲醇效果最佳。分別采用加熱回流、索氏提取、超聲提取方法，結果加熱回流提取效果最佳。分別回流2，3和4 h，結果3和4 h測定結果相近，故提取時間定為回流3 h。

對金線草不同部位的沒食子酸含量做了初步研究，從測定結果看，其各部位沒食子酸含量：莖葉>主根>須根>果實，其中莖葉中沒食子酸含量最高，達到0.311 mg·g-1，而果實中則最低，只有0.021 mg·g-1。且不同批次金線草之間的沒食子酸含量也有差異，分析應該與其生長環境和采集時間等因素有關。由于金線草目前尚無栽培品，故對其不同部位的成分研究，有利于有效合理地利用其現有資源。

參考文獻：

[1] 湖北省衛生局.湖北中草藥志(二)[M].武漢:湖北人民出版社，1982: 633

[2] 全國中草藥匯編組.全國中草藥匯編：上冊[M].北京：人民衛生出版社，1975: 534.

[3] 江蘇新醫學院.中藥大辭典：上冊[M].2版.上海：上海科學技術出版社，2006: 1957，1981.

[4] 崔同寅.全國重名易混中藥鑒別手冊[M].北京：中國醫藥科技出版社，1992: 39.

[5] 李世全.秦嶺巴山天然藥物志[M].西安：陜西科學技術出版社，1987: 86.

[6] 陜西中藥普查辦公室.陜西中藥名錄[M].西安：陜西科學技術出版社，1988: 107.

[7] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志：第25卷[M].北京：科學出版社，1988: 121.

[8] 趙友興，李紅芳，馬青云，等.金線草化學成分研究[J].中藥材，2011，34(5): 704-707.

[9] 侯鴻軍，王莉.HPLC法測定余甘降脂片中沒食子酸的含量[J].西北藥學雜志，2014，29(1): 22-24.