HPLC-ELSD法測定含三七中成藥的皂苷成分的含量

王 芮，郭 華(.解放軍307醫(yī)院藥學部，北京 0007；2.軍事醫(yī)學科學院門診部，北京 00850)

三七皂苷是中藥三七的主要成分，具有擴張血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延長凝血時間、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等藥理作用[1]。按照《中國藥典》(2010年版)含三七的中成藥共61個，劑型包含膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、合劑、搽劑、散劑、貼膏劑、滴丸劑、錠劑、氣霧劑、栓劑12種[2]。本文主要在文獻方法[3-7]的基礎(chǔ)上，進一步優(yōu)化并建立含三七中成藥中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和Rb1的含量測定方法，以期對中成藥中的三七成分進行更好地質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Aglient 1100高效液相色譜儀：配有自動脫氣機，四元泵，自動進樣器，DAD檢測器，Chemstation 3D工作站，35900E數(shù)模轉(zhuǎn)換連接盒；蒸發(fā)光檢測器ELSD2000 (Alltech，America)。

1.2試藥 乙腈為色譜純，由Fisher公司提供，水為純凈水。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1均購自中國食品藥品檢定研究院。待測含三七的中成藥樣品為市售。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱：Grace Previl C18(250 mm×4.6 mm， 5 μm)，以乙腈為流動相A，以水為流動相B，色譜條件為：0～15 min (A∶B 17∶83)→30～60 min (A∶B 30∶70)。ELSD檢測器：漂移管溫度107 ℃，噴霧管溫度107 ℃，氣流3.0 L·min-1，不分流。理論板數(shù)按人參皂苷R1計算應不低于5 000。

2.2供試品溶液的制備 取成藥適量，研細，過60目篩，取粉末約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取0.5 h后，用甲醇補足缺失質(zhì)量，搖勻濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3對照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R1 0.1 mg、人參皂苷Rg1 0.4 mg和人參皂苷Rb1 0.4 mg的混合對照品溶液，即得。

2.4專屬性實驗 結(jié)果表明，在此色譜條件下，其他成分不影響皂苷成分的測定。結(jié)果見圖1。

圖1 HPLC-ELSD圖

2.5線性關(guān)系考察 精密稱定對照品三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，用甲醇配制為每1 mL含三七皂苷R1 0.1 mg、人參皂苷Rg1 0.4 mg和人參皂苷Rb1 0.4 mg的混合對照品溶液。分別吸取2，4，6，8，10，15和20 μL注入液相色譜儀，測定色譜圖，記錄峰面積，分別對進樣量和峰面積取常用對數(shù)，得到回歸方程，見表1。

表1 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和Rb1的線性關(guān)系

2.6精密度 吸取三七皂苷R1 0.1 mg·mL-1、人參皂苷Rg1 0.4 mg·mL-1和人參皂苷Rb1 0.4 mg·mL-1的混合對照品溶液10 μL，重復進樣5次，計算各色譜峰的峰面積RSD分別為三七皂苷R1 1.91%、人參皂苷Rg1 2.23%和人參皂苷Rb1 1.36%，基本符合含量測定的要求。

2.7重復性 精密稱取成藥粉末1 g各6份，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇各10 mL，密塞，浸泡1 h，并時時振搖，濾過，取續(xù)濾液10 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的RSD分別為2.33%，2.71%和2.86%。基本符合含量測定的要求。

2.8回收率 精密稱取成藥粉末1 g各6份，置于具塞錐形瓶中，分別加入0.96 mg·mL-1三七皂苷R1溶液1.0 mL、1.12 mg·mL-1的人參皂苷Rg1溶液2.5 mL和1.01 mg·mL-1人參皂苷Rb1溶液2.0 mL，補足甲醇至10 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取0.5 h后，用甲醇補足缺失質(zhì)量，搖勻過濾，取續(xù)濾液5 μL，注入液相色譜儀，測定色譜圖，記錄3種皂苷的峰面積，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率實驗結(jié)果

2.9含量測定 取成藥(6個批號)按照2.1項下條件測定含量，結(jié)果見表3。

表3 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和Rb1的含量測定結(jié)果

3 討論

中國藥典中使用HPLC-UV法測定三七藥材中的3七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1含量，作者采用HPLC-ELSD法，在陰性對照中無雜質(zhì)峰干擾3種皂苷類成分的測定，可顯著消除其他成分對三七皂苷的含量測定的干擾，增強該方法的專屬性。

在提取溶劑的考察中，前期實驗考察了甲醇、75%甲醇和50%甲醇對3種皂苷成分的提取率，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1和Rb1在3種溶劑中的提取率差別不大，但三七皂苷R1在使用體積分數(shù)50%甲醇提取時，由于雜質(zhì)峰的干擾、峰面積明顯增加，體積分數(shù)75%甲醇和甲醇的提取率相差不大，因此本方法最終選用甲醇進行提取，測定的回收率結(jié)果較好。

參考文獻：

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