RP-HPLC法測定貝那普利氫氯噻嗪片的含量

蘇 敏，章志強，鄧玉清，郝 程(.陜西方舟制藥有限公司，西安 70075；.陜西省體育科學研究所，西安 70065；.西安天一秦昆制藥有限責任公司，西安 70077)

貝那普利氫氯噻嗪片是一種治療高血壓的化學藥物復方制劑，適用于用貝那普利和氫氯噻嗪單一治療不能達到滿意療效的病人[1-2]。關于其含量測定方法，國外文獻報道有薄層色譜法和高效液相色譜法[3-4]，國內到目前為止還沒有高效液相色譜法的相關報道。為了更好地控制其質量，本文對鹽酸貝那普利和氫氯噻嗪的HPLC含量測定方法進行了提升，對其線性、重復性、穩定性等進行了可行性研究。

1 儀器與材料

1.1儀器 高效液相色譜儀(戴安U3000)。

1.2試藥 四氫呋喃(色譜純)；冰醋酸(分析純)；四丁基溴化銨(分析純)；鹽酸貝那普利對照品(按C24H28N2O5·HCl計，供HPLC法測定，含量為99.5%)；氫氯噻嗪對照品(按C7H8ClN3O4S2計，含量為99.8%)；貝那普利氫氯噻嗪片樣品(自制)。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Ultimate AQ-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：四氫呋喃-水-冰醋酸(250 mL+750 mL+4 mL，加入四丁基溴化銨1.0 g)；檢測波長：240 nm；流速：1.5 mL·min-1；進樣量：20 μL。

2.2系統適用性實驗 取有關物質CGS 14831對照品20 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加溶劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質對照品儲備液Ⅰ；取有關物質SU5683對照品適量，精密稱定，加溶劑制成0.25 mg·mL-1的溶液，作為雜質對照品儲備液Ⅱ；另取氫氯噻嗪對照品約6 mg和鹽酸貝那普利對照品約5 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，精密加入雜質對照品儲備液Ⅰ、Ⅱ分別為1 mL和1 mL，加溶劑稀釋至刻度，作為系統適用性溶液[5]。

2.3方法學驗證

2.3.1線性實驗 取鹽酸貝那普利對照品20 mg和氫氯噻嗪對照品25 mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密量取1，2.5，4，5，7.5和10 mL儲備液，置于10 mL量瓶中，用溶劑(乙腈-水-冰醋酸(100∶150∶1)稀釋至刻度，搖勻，作為供試液。分別精密量取上述溶液各20 μL注入高效液相色譜儀。以峰面積為縱坐標、質量濃度為橫坐標作圖，進行線性回歸[6]。鹽酸貝那普利質量濃度在41.2～412.3 μg·mL-1范圍內呈線性，回歸方程為y=14 731x-88 403，r=0.999 5，氫氯噻嗪質量濃度在51.0～509.6 μg·mL-1范圍內呈線性，回歸方程為y=5 816.6x+9 053.9，r=0.999 8。

2.3.2精密度實驗 取鹽酸貝那普利對照品20 mg和氫氯噻嗪對照品25 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取20 μL上述溶液，注入高效液相色譜儀，在相同條件下，由同一分析人員對同一瓶樣品重復進樣6次，以峰面積的偏差為目標，考察進樣精密度，記錄色譜圖。同一溶液連續進樣6次，兩主藥氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利的峰面積的RSD均1.01%，0.71%和0.76%，0.69%，均小于2%，表明進樣精密度良好。

2.3.3穩定性實驗 將對照品和樣品均配制成質量濃度約為鹽酸貝那普利0.2 mg·mL-1、氫氯噻嗪0.25 mg·mL-1的溶液作為供試品溶液，分別于第0，2，4，6，8和12 h進樣測定[7]。結果對照品溶液、供試品溶液中兩成分峰面積在12 h內RSD值氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利分別為1.04%，0.66%，1.01%和0.84%，均小于2%，表明對照品溶液與供試品溶液均在12 h內穩定。

2.3.4重復性實驗 取鹽酸貝那普利對照品20 mg和氫氯噻嗪對照品25 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。取本品20片，精密稱定，研細，分別取6份等量的樣品，精密稱取(約相當于鹽酸貝那普利10 mg)，置于50 mL量瓶中，加溶劑40 mL，超聲處理10 min，振搖15 min，放冷至室溫，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜過濾，棄去初濾液6 mL，取續濾液，即得。平行操作配制6份，精密量取20 μL上述溶液，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以外標法按峰面積計算含量。兩主成分氫氯噻嗪和貝那普利含量的RSD分別為1.00%和0.90%，均小于2%，表明進樣重復性良好。

2.3.5準確度實驗 取氫氯噻嗪對照品25 mg和鹽酸貝那普利對照品20 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。以此為基礎分別配制80%～120%的對照品溶液，計算80%～120%范圍內回收率，考察該方法測定的結果與真實值接近的程度。實驗結果顯示，鹽酸貝那普利平均回收率在99.6%～101.6%之間，RSD小于2%，氫氯噻嗪平均回收率在99.3%～100.7%之間，RSD小于2%，符合平均回收率在98.0%～102.0%的要求，證明此方法準確度良好。

2.3.6回收率實驗 對照品溶液：分別取氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利對照品約25和20 mg，置于100 mL量瓶中，加5 mL甲醇使溶解，并用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度；再精密量取5 mL，置于200 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。50%供試品溶液：取氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利對照品約12.5和10 mg，精密稱定，置于同一含有約0.217 5 g空白輔料的100 mL量瓶中，加少量溶劑使其溶解，并用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，過濾；精密量取續濾液5 mL，置于200 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得，共制備3份。同理，再分別配制80%供試品溶液和100%供試品溶液[8]，精密量取對照品溶液和供試品溶液各50 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果見表1和表2及圖1。

表1 鹽酸貝那普利回收率實驗結果

表2 氫氯噻嗪回收率實驗結果

圖1 HPLC圖

實驗結果表明，3個不同質量濃度的供試品溶液中，氫氯噻嗪和鹽酸貝那普利的回收率RSD分別為0.35%和0.51%，均小于2%，回收率良好。

2.3.7樣品測定 取本品20片，精密稱定，研細，分別取6份等量的樣品，精密稱取(約相當于鹽酸貝那普利10 mg)，置于50 mL量瓶中，加溶劑40 mL，超聲處理10 min，振搖15 min，放冷至室溫，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜過濾，棄去初濾液6 mL，取續濾液，即得。分別取2份等量的對照品，氫氯噻嗪25 mg和鹽酸貝那普利20 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。實驗結果表明，本品3 批含氫氯噻嗪分別為98.8%，99.6%和98.9%，均在標示量的95.0%～105.0%范圍內，鹽酸貝那普利含量分別為99.7%，100.5%和100.3%，均在標示量的92.0%～105.0%范圍內，符合規定。

3 討論

3.1色譜條件的選擇 本品氫氯噻嗪、鹽酸貝那普利的最大吸收波長分別為238，242和317 nm，故確定含量的檢測波長為240 nm。四氫呋喃-水-冰醋酸(250 mL+750 mL+4 mL，加入四丁基溴化銨1.0 g)時主峰理論板數不低于2 000，與雜質峰分離度不小于1.5，未檢出不純物，故確定為該品種的流動相。色譜柱為Ultimate AQ-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)時主峰理論板數不低于2 000，與雜質峰的分離度不小于1.5，故確定為該品種的色譜柱。

3.2四氫呋喃用量 在本品檢測中四氫呋喃用量相對較大，可適當調節流動相中的四氫呋喃量，使CGS 14831， SU 5683與氫氯噻嗪的分離度符合要求。所用四氫呋喃應保證其純度，應臨用開瓶，否則會引起色譜峰的增加。

參考文獻：

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