優選維藥復方益心顆粒揮發油的提取及β-環糊精包合工藝

于 寧，何承輝，邢建國(新疆維吾爾自治區藥物研究所，烏魯木齊 830004)

維藥復方益心顆粒是由薰衣草、牛舌草、毛羅勒、香青蘭、小茴香等6味藥組成的復方制劑，該方具有養心補腦、增強心腦功能、補血、消食等功效，用于神經衰弱引起的頭疼、失眠、健忘、多夢及心功能不全、膽囊炎等。處方中薰衣草、毛羅勒、小茴香均為維吾爾醫常用藥材，都含有較多的揮發油成分，現代藥理研究已證實，揮發油是其重要的活性成分[1-2]，但由于這類成分不穩定。因此，為提高該制劑的藥效和穩定性，先提取揮發油并處理后再入藥。本實驗采用正交實驗設計，以提取揮發油提取量為指標，優選揮發油最佳提取工藝；采用分子包合技術包合揮發油[3]，使揮發油粉末化，降低損失，提高揮發油的穩定性和溶解性，從而提高該制劑的療效。

1 儀器與試藥

1.1儀器 BS110S型Sartorius電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；JM-B2003電子天平(余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司)；揮發油提取器(上海化科實驗器材有限公司)；KDM型調溫電熱套(山東省鄄城永興儀器廠)；ML-902定時恒溫電動磁力攪拌器(上海浦江分析儀器廠)；101A型數顯電熱鼓風干燥箱(上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司)。

1.2試藥 毛羅勒(批號20100410)、薰衣草(批號201005130)、小茴香(批號20100510)均購于新疆麥迪森維藥有限公司，產地均為新疆；β-環糊精(廣東郁南縣環狀糊精廠，質量分數>98%)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1揮發油的提取工藝研究 根據相關文獻[3-7]，在預實驗的基礎上，以加水量(A)、浸泡時間(B)、蒸餾時間(C)為考察因素，采用L9(34)正交表進行實驗，提取揮發油至揮發油體積不再增加為止，讀取揮發油體積，評價指標為揮發油的提取量(mL)，優選揮發油提取工藝。提取工藝因素水平見表1，正交實驗結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 揮發油提取工藝因素水平表

方差分析結果表明，蒸餾時間有顯著性差異，加水量和浸泡時間無顯著性差異，主次順序為C>A>B。在C因素中，C3>C2>C1，選擇C3；結合直觀分析，A和B無顯著性差異，選A1和B1。因此，結合大生產，最終確定提取工藝為A1B1C3，即加水10倍量，浸泡8 h后提取5 h。

2.2揮發油提取工藝驗證實驗 按處方量稱取藥材3份，照優選的提取工藝進行3次驗證實驗，測得揮發油的提取量分別為2.60，2.63和2.59 mL，平均提取量為2.61 mL，與正交實驗結果一致，表明該提取工藝合理、穩定、可行。

表2 揮發油提取正交實驗結果

表3 揮發油含量方差分析結果

2.3優選揮發油β-CD包合物制備工藝

2.3.1揮發油前處理 精密移取揮發油一定體積，加入乙醇等體積，溶解。得揮發油無水乙醇溶液(體積分數為50%)，待用。

2.3.2實驗方法 采用飽和水溶液法制備。操作步驟：稱取β-CD適量，置于1 000 mL具塞三角錐形瓶中，加入蒸餾水，水浴加熱使β-CD完全溶解，制成飽和溶液，并降至所需溫度；在恒溫下攪拌，精密移取揮發油-無水乙醇液，緩慢注入到β-CD溶液中，持續攪拌至一定時間后，放入4 ℃冰箱中，過夜；抽濾，包合物先用水洗滌，后用石油醚(30～60 ℃)多次洗滌，至無揮發油氣味；干燥4 h (50 ℃)，稱質量，計算揮發油包合率。

2.3.3揮發油包合率的測定 稱定揮發油包合物質量，將包合物置于1 000 mL圓底燒瓶中，加300 mL蒸餾水，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩD揮發油測定甲法，連接揮發油提取器，提取揮發油。按下列公式計算。

揮發油包合率=包合物中實際含油量/[揮發油加入量×空白回收率]×100%

2.3.4揮發油空白回收實驗 精密吸取揮發油1 mL，置于500 mL圓底燒瓶中，平行3份，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩD揮發油測定甲法，提取揮發油。分別加一定量水，提取揮發油5 h，至揮發油體積不再增加時停止加熱，讀取揮發油體積。按下式計算空白回收率，得空白回收率為95%。

空白回收率=提取出揮發油量/揮發油加入量×100%

2.3.5包合物收得率 收得率=[包合物質量/(β-CD加入質量+揮發油加入質量)]×100%

2.3.6包合工藝條件篩選 根據文獻報道[5,7-11]，在預實驗的基礎上，選定β-CD和揮發油用量比例(g∶mL)、包合溫度(℃)和包合時間(h)為考察因素。每個因素取3水平，以包合率、包合物收得率為評價指標，采用L9(34)正交表進行實驗。包合工藝的因素與水平見表4，正交實驗結果見表5，方差分析結果見表6。

表4 揮發油β-CD包合因素水平表

表5 揮發油包合工藝正交實驗結果

經方差分析可知，β-CD∶揮發油配比有顯著性差異，而包合溫度和包合時間無顯著性差異，主次順序為A>C>B。A因素中，A3>A2>A1，選擇A3；結合直觀分析，B和C無顯著性差異，選B1和C1。結合實際生產，因此確定最佳包合工藝為A3B1C1，即揮發油包合條件為：β-CD∶揮發油配比為10∶1，恒溫40 ℃，包合2 h。

表6 揮發油包合方差分析結果

2.3.7揮發油β-CD包合工藝驗證實驗 精密稱取β-環糊精和揮發油適量，按2.3.6項下優選的工藝和方法，進行3次驗證實驗，并計算揮發油包合物收得率和包合率。結果顯示，包合物的收得率為80.23%，78.90%和80.31%，包合率分別為83.23%，82.10%和83.31%。結果與正交實驗結果相接近，表明優選的包合工藝穩定、可行。

2.4包合物穩定性實驗 將揮發油進行包合的目的是防止其揮發及增強穩定性。因此對其包合物進行了穩定性研究[12-15]，比較各影響因素下包合物及混合物(與包合物同等比例的同批次β-CD、揮發油的混合物)中揮發油含量的變化，以考察β-CD包合后揮發油的穩定性，為后期的制劑生產提供實驗依據。

2.4.1強光照射實驗 分別稱取包合物和混合物各30 g，精密稱定，密裝于玻璃瓶中，置于日光燈(4 000 lx)處，照射10 d，分別在規定的時間取樣，照2.3.3項下方法提取揮發油，并計算揮發油相對含量，結果見表7。

結果表明，揮發油包合物的抗光解性比物理混合物高。

表7 強光照射實驗結果

2.4.2高溫實驗 揮發油包合物和混合物分別稱取9份，每份30 g(每水平樣品各3份)，精密稱定，密裝于玻璃瓶中，分別置于40，60和80 ℃恒溫干燥箱中，放置10 d，分別在一定時間取樣，并提取揮發油，計算揮發油相對含量，結果見表8。

該結果表明，揮發油β-環糊精包合物比混合物的熱穩定性好。

表8 高溫實驗結果

2.4.3高濕實驗 稱取揮發油包合物和混合物各30 g(每水平樣品各3份)，精密稱定，密裝于玻璃瓶中，各取6份，每3份為一組，在25 ℃條件下，將樣品分別置于2個密封的器皿中(相對濕度分別為75%(氯化鈉)和92.5%(硝酸鉀))，放置10 d，并分別在放置0，5和10 d時取樣，照揮發油測定法測定揮發油相對含量，結果見表9。

結果表明，揮發油包合物較物理混合物的濕穩定性更高。

表9 高濕實驗結果

3 討論

通過預實驗，分別考察了薰衣草、毛羅勒和小茴香3味藥材分開單獨提取揮發油和合并提取揮發油，發現3味藥材合并后提取揮發油與分別提取揮發油的出油時間和出油率基本一致，因此，為節約生產成本，將三味藥合并后提取揮發油。揮發油為該處方有效成分，本實驗采用β-環糊精包合技術，使揮發油由液態轉變成固態，防止揮發油在生產、儲存過程中的氧化和分解，提高制劑的穩定性，掩蓋揮發油的不良氣味。

包合物穩定性實驗結果表明，高溫、高濕、光照對包合前后揮發油的含量的影響有較大差異。包合物的熱穩定性、濕穩定性及抗光解性明顯高于混合物。可見揮發油經β-環糊精包合后，可提高其穩定性，從而提高該復方制劑的療效。

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