血管生成素-2、血管內皮生長因子與微血管密度在子宮內膜異位癥中的表達及臨床意義

何勤徑

·論著·

血管生成素-2、血管內皮生長因子與微血管密度在子宮內膜異位癥中的表達及臨床意義

何勤徑

目的研究血管生成素-2，血管內皮生長因子與微血管密度指標檢測在子宮內膜異位癥中的表達及臨床意義。方法選擇確診的子宮內膜異位患者30例，術中取子宮內膜異位病灶和在位新鮮組織。同時選取同期正常子宮內膜30例做為對照組。術前所有患者空腹取靜脈血采用ELISA法進行測定Ang-2、VEGF；術中取新鮮內膜組織，采用免疫組化的方法對子宮內膜異位的標本進行Ang-2、VEGF和MVD指標測定。結果血清和組織中Ang-2、VEGF均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內膜異位組和子宮內膜在位組的Ang-2、VEGF含量升高，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)；與子宮內膜在位組比較，血清和組織中子宮內膜異位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，2組比較差異有統計學意義(P<0.05)。子宮內膜異位組和子宮內膜在位組中CD34標記的MVD表達與對照組比較均有不同成功的升高，其中以子宮內膜異位組升高最明顯，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論檢測子宮內膜異位癥患者血清和病灶組織中Ang-2、VEGF和MVD的表達，有利于判斷子宮內膜異位癥的病情發展，為其發生機制和臨床治療提供基礎。

血管生成素-2；血管內皮生長因子；微血管密度；子宮內膜異位癥

子宮內膜異位癥(endometriosis，EMT)是影響廣大女性的身心健康的常見病，本病雖然是良性病變卻有浸潤、轉移和復發等類似惡性病變的性質，可引起不孕不育、痛經、性交痛及慢性盆腔痛等[1]，已成為威脅女性生命健康的難治之癥。臨床治療本病多采取藥物治療和手術治療，副作用大，效果不明顯，另外本病的發病機制尚未完全明確[2]，因此針對本病的基礎研究和臨床研究受到臨床廣大醫護工作者的不斷重視。本研究主要通過對血管生成素-2(angiopoietin-2，Ang-2)、血管內皮生長因子(ascular endothelial growth factor，VEGF)和微血管密度(microvessel density，MVD)的觀察它們在子宮內膜異位癥中的表達及臨床意義，為臨床治療和診斷提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年8月至2012年8月于我院通過腹腔鏡手術或開腹手術后經病理檢查確診的子宮內膜異位患者30例，年齡30～46歲，平均(35.29±7.6)歲，術中取子宮內膜異位病灶和在位新鮮組織。同時選取同期與我院進行子宮肌瘤切除術、不孕和卵巢囊腫行手術治療的患者的正常子宮內膜30例做為對照組，年齡32～48歲，平均(38.34±7.3)歲。2組患者術前月經規律，3個月內無激素應用史，6個月內無妊娠及哺乳史，無生殖系統其他合并疾病，無心腦腎等嚴重內科疾病合并癥，2組患者一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 術前所有患者空腹取靜脈血5 ml，靜置2 h后3 500 r/min離心10min，取上清液于-20℃冷藏用于Ang-2、VEGF的指標檢測。采用ELISA法進行測定，所有試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，所有標本均在同一條件下進行檢測。

1.2.2 術中取新鮮內膜組織，用0.9%氯化鈉溶液沖洗雜志后，于10%甲醛溶液中進行固定，常規脫水、浸蠟和包埋，5連續切片，采用免疫組化的方法對子宮內膜異位的標本進行Ang-2、VEGF和MVD指標測定。所有試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，所有標本均在同一條件下進行檢測。

1.2.3 Ang-2、VEGF指標檢測[3]：采用OLYMPUS-BX41光學顯微鏡隨機選擇5個視野，經HMIAS-2000全自動彩色圖像分析系統采集圖像并進行存儲，計算每張切片中陽性目標的平均吸光度。

1.2.4 MVD指標檢測：CD34是管內皮細胞的特異性標記物[5]，對新生毛細血管的生長情況有較明確的反映。根據文獻中Weidner報道的方法[4]進行操作和結果判定。采用OLYMPUS-BX41光學顯微鏡隨機選擇5個視野，經HMIAS-2000全自動彩色圖像分析系統采集圖像并進行存儲，計數CD34標記的平均陽性微血管數目為MVD值。

2 結果

2.1 3組患者血清中Ang-2、VEGF含量的比較 研究發現，血清中Ang-2、VEGF均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內膜異位組和子宮內膜在位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)；與子宮內膜在位組比較，子宮內膜異位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，2組比較差異有統計學院意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組患者血清中Ang-2、VEGF含量的比較

表1 3組患者血清中Ang-2、VEGF含量的比較

組別Ang-2VEGF異位內膜組76±12*#214±21*#在位內膜組58±13*178±20*正常對照組35±12 126±19

注：與對照組比較，*P<0.05；與在位內膜組比較，#P<0.05

2.2 3種組織標本中Ang-2、VEGF吸光度值和MVD表達的比較 Ang-2、VEGF和CD34在3種組織中均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內膜異位組和子宮內膜在位組的Ang-2、VEGF吸光度值升高，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)；與子宮內膜在位組比較，子宮內膜異位組的Ang-2、VEGF吸光度值明顯升高，2組比較差異有統計學院意義(P<0.05)。另外，子宮內膜異位組和子宮內膜在位組中CD34標記的MVD表達與對照組比較均有不同成功的升高，其中以子宮內膜異位組升高最明顯，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同子宮內膜中Ang-2、VEGF的吸光度值及MVD表達的比較

表2 不同子宮內膜中Ang-2、VEGF的吸光度值及MVD表達的比較

組別Ang-2VEGFMVD異位內膜組0.29±0.18*#0.34±0.11*#42.68±13.85*#在位內膜組0.17±0.13*0.48±0.09*31.47±18.46*正常對照組0.12±0.090.37±0.1622.03±17.07

注：與對照組比較，*P<0.05；與在位內膜組比較，#P<0.05

3 討論

子宮內膜異位癥是指子宮內膜腺體及間質細胞生長在子宮腔以外的部位，是婦科常見的良性腫瘤，但是這種良性病變的內膜組織可像惡性腫瘤一樣侵襲血管產生增生、浸潤、擴散、種植與轉移，引起月經不調、痛經、盆腔疼痛、不孕不育等[6]，嚴重威脅廣大女性的健康，為生活和工作帶來巨大的影響。雖然目前對于子宮內膜異位的發生機制尚未完全闡明，但許多臨床文獻已經表明，國內外學者逐漸越來越重視這方面的相關研究[7]。

在大量醫學工作者的努力下，隨著醫學的不斷進步和對子宮內膜異位癥的研究不斷深入，有文獻報道，新生血管是子宮內膜異位病情發展的重要基礎，而且研究發現，多種細胞因子和生長因子參與了血管生成的調控，其中Ang-2、VEGF和MVD的表達在臨床研究范圍內得到了廣泛的重視[8]。子宮內膜異位癥發生時，血管內皮細胞增生活躍，Ang-2和VEGF是強效和特異的血管生成因子，在某些病理環境下刺激毛細血管增生，提高血管通透性[9]，為異位生長的腺上皮細胞提供賴以生存的物質基礎，因此病灶組織在大量新生血管的支持下不斷發展。Ang-2與腫瘤血管形成數目、臨床分期、預后關系密切[10]。在血管生成的調節過程中，Ang-2與血管內皮細胞特異性酪氨酸激酶受體Tie-2結合，競爭性抑制Ang-1引起的Tie-2受體的磷酸化，使血管穩定性遭到破壞，從而促進新生血管的重構。VEGF是特異性作用于血管內皮細胞的最重要的血管生成因子，尤其是在缺氧、貧血等誘導因素下，當其與受體結合后能夠刺激毛細血管增生，增強血管通透性，為異位生長的細胞提供生長環境和物質基礎，從而誘發新生血管的生成。研究證明，Ang-2與VEGF兩者對促進血管生成具有相輔相成、互相促進的作用[11]。當VEGF存在時能夠促進Ang-2的表達，使血管不穩定性增加，加劇誘發新生血管形成，反之，當VEGF不存在時，Ang-2的主要作用是使血管數目減少，血管退化。說明VEGF 與Ang-2關系密切，在促進血管生成的過程中有協同作用[12]，此觀點有助于為子宮內膜異位的發病機制和臨床研究提供重要的理論基礎。另外，MVD是評價血管生成的指標，特異性高，可反映子宮內膜毛細血管的生長情況，含量越高，新生血管越豐富，而CD34是血管內皮細胞的特異性標記物，其表達可反映MVD的定量分析。

本研究發現，血清和組織中Ang-2、VEGF均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內膜異位組和子宮內膜在位組的Ang-2、VEGF含量升高，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)；與子宮內膜在位組比較，血清和組織中子宮內膜異位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，2組比較差異有統計學院意義(P<0.05)。子宮內膜異位組和子宮內膜在位組中CD34標記的MVD表達與對照組比較均有不同成功的升高，其中以子宮內膜異位組升高最明顯，3組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。

子宮內膜異位癥是在多種因素共同作用下形成的，是一個復雜的過程。血管生成對本病的發生發展有著重要的意義。Ang-2、VEGF和MVD是誘導血管生成的重要生物學因子，對其深入研究有助于為臨床治療提供廣闊思路。本研究通過對Ang-2、VEGF和MVD進行檢測，探討他們在血清和不同組織中的含量水平，為抗血管治療的方法提供更多的理論依據，使針對血管生成的術前輔助治療方法能夠成為術后預防復發子宮內膜異位癥的重要方法[13-15]。

綜上所述，通過檢測子宮內膜異位癥患者血清和在位及異位病灶組織中Ang-2、VEGF和MVD的表達，能夠對判斷子宮內膜異位癥的發生和發展起到指導作用，可為日后對其發生機制和臨床治療提供廣闊的思路和理論基礎。

1 段瑞麗.Ang-2、VEGF、ENS在子宮內膜異位癥中的表達及意義.鄭州：鄭州大學，2007.1.

2 王爽，張曉玲.Ang-2、VEGF在卵巢子宮內膜異位癥中表達及相關性研究.實用婦產科雜志，2010，26：594-597.

3 趙潔，薛素萍，曲銀娥，等.HIF-1和VEGF在子宮內膜異位癥增生期內膜中的表達及意義.中國實驗診斷學，2012，16：429-431.

4 weidner N，Folkman J，Pozza F，et al.Tumor angiongenesis：a new significant and independen prognostic indicator in early-stage breast carcinoma.Natl Cancer Inst,1992,84：1875.

5 吳惠琰.TNF．n、VEGF和MVD在子宮內膜異位癥中的表達及意義.實用診斷與治療雜志，2006，20：244-245.

6 景和，陳映竹．子宮內膜異位癥．郎景和，陳映竹主編．女性生殖健康與疾病．鄭州：鄭州大學出版社，2002．106.

7 Mclaren J．Vascular endothelial growth factor and endometri-otic Angiogenesis．Hum Report Update，2000，6：44-45.

8 張曉玲，程玉芬，黃歐平，等.血清血管內皮生長因子對診治子宮內膜異位癥的臨床價值.江西醫學院學報，2009，49：35-37.

9 Lingberg AM，Stalhandske P，Petal U．Genome of coxsakievirius B3.Virology，2005，80：50，63．

10 Ahmad SA，Liu W,Jung YD，et al．The effects of angiopoictin-1 and-2 on tumor growth and angiogenesis in human colon eanccr．Ahmed SA，2001，61：1255-1259.

11 Holash J，Maisonpieire PC，Compton D，et al．Vesse cooption regression and growth in tumors mediated by angiopoietin and VEGF．Science，1999，284：1994-1998.

12 Macho A．Non-pungent Capsaicinoidsfrom Sweet Pepper Synthesis and Evaluation of the Chemopreventive and Anticaneer Potential．Eur J Nutr，2003，42：2-9．

13 王爽,張曉玲.Ang-2、VEGF在子宮內膜異位癥中的研究進展.實用臨床醫學，2008，9：132-136.

14 劉淑艷.子宮內膜異位癥患者外周血和腹腔液中血管生成素-2和血管內皮細胞生長因子水平的檢測及臨床意義.海南醫學，2012,21:86-87.

15 范俊,董文韜．欒少紅.子宮內膜異位癥患者血清、腹腔液中Ang-2和ENS的表達變化及意義.山東醫藥，2008，48：47-48.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.07.026

518100 廣東省深圳市龍崗區婦幼保健院

R 711.71

A

1002-7386(2014)07-1025-03

2013-10-15)