BRMS1和Survivin在乳腺癌中的表達及臨床意義

王大勇

·論著·

BRMS1和Survivin在乳腺癌中的表達及臨床意義

王大勇

目的 觀察BRMS1和Survivin在人乳腺癌組織中的表達及二者的相互關系，探討其對乳腺癌發生、發展、轉移及預后的影響。方法采用免疫組織化學SP法檢測160例乳腺癌、70例乳腺良性增生和40例癌旁正常組織BRMS1、Survivin的表達水平，并結合臨床病理資料進行分析。結果BRMS1在乳腺癌、乳腺良性增生和癌旁正常組織中的陽性表達率分別為34.4%、81.4%、95.0%，與乳腺良性增生和癌旁正常組織比較，乳腺癌組織BRMS1表達明顯降低(P<0.05)。Survivin在乳腺癌、乳腺良性增生和癌旁正常組織的陽性表達率分別為78.8%、17.1%、0，與乳腺良性增生和癌旁正常組織比較，乳腺癌組織Survivin表達明顯增加(P<0.05)。BRMS1和Survivin在乳腺癌組織的異常表達與TNM臨床分期、淋巴結轉移狀況有關(P<0.05)，Survivin表達亦與組織學分級有關，二者表達均與患者年齡、腫瘤大小無關，且呈明顯負相關(P<0.05)。結論BRMS1和Survivin對于乳腺癌的發生、發展、轉移及預后具有重要意義，可作為乳腺癌診斷及判斷預后的標志物。

乳腺癌； BRMS1；Survivin

乳腺癌是嚴重危害女性健康的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率在我國呈逐年上升趨勢，患者死亡的主要原因為病變早期即有癌細胞的侵襲和遠處轉移。因此，對乳腺癌轉移機制的研究成為臨床提高乳腺癌治愈率的關鍵。乳腺癌轉移抑制因子(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)是近年來新發現的一種腫瘤轉移抑制基因[1]，在腫瘤遠處轉移過程中發揮明顯的抑制作用。有研究表明BRMS1過表達通過抑制NF-κB的活性，進而抑制腫瘤轉移促進基因或抗凋亡基因的表達，最終導致肝癌細胞凋亡和阻斷腫瘤轉移[2]。Survivin是凋亡抑制蛋白家族成員之一，在多種實體瘤組織中都有高表達，是目前認為作用最強的凋亡抑制因子[3]。本研究采用免疫組織化學法觀察乳腺癌組織BRMS1和 Survivin的表達水平及二者間的關系，并分析其臨床意義，為乳腺癌的診斷和判斷預后提供科學依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010年3月至2011年12月手術切除、且經病理確診的乳腺癌組織存檔蠟塊標本160例。患者均為女性，年齡28～78歲，中位年齡44.5歲。所有患者均無肝、腎及免疫系統疾病，術前均未接受放療、化療和內分泌治療，臨床病理資料完整。組織學分類參照2003年WTO乳腺癌分類標準：非特殊型浸潤性導管癌126例，導管原位癌16例，浸潤性小葉癌15例，髓樣癌3例。同時選取距腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁組織40例和乳腺良性增生組織70例為對照。TNM臨床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期89例，Ⅲ期43例。160例乳腺癌中有腋窩淋巴結轉移者89例，無腋窩淋巴結轉移者71例。

1.2 主要試劑 鼠抗人BRMS1單克隆抗體、兔抗人 Survivin多克隆抗體購自Santa Cruz公司。免疫組化SP試劑盒購自上海生工生物工程技術服務有限公司。

1.3 實驗方法 標本用10%甲醛固定，石蠟包埋，切成4 μm厚的石蠟切片，65℃烘烤，脫蠟，采用免疫組織化學染色 SP法測定BRMS1和Survivin的表達，嚴格按照試劑盒說明書操作，用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照：3%H2O237℃孵育10 min滅活內源性過氧化物酶，PBS洗滌；微波修復抗原，PBS洗滌；10%山羊血清封閉，室溫孵育10 min；用1∶50稀釋的BRMS1和Survivin多克隆抗體4℃過夜孵育，PBS沖洗；加生物素標記的抗人IgG抗體室溫孵育30 min，PBS沖洗；辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素室溫孵育30 min，PBS沖洗；DAB顯色；蘇木素染色，封片，光鏡觀察。

1.4 判定標準 BRMS1和Survivin陽性染色的判定標準為細胞質(核)內檢出棕黃色顆粒。隨機選取5個有代表性的視野計數200個細胞，若陽性細胞占同類細胞的百分比<10%即為陰性。

1.5 統計學分析 應用SPSS 10.0統計軟件，采用χ2檢驗比較各組間蛋白表達差異，相關性比較采用Spearman等級相關性分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BRMS1和Survivin在乳腺癌、乳腺良性增生及癌旁組織的表達 免疫組化結果顯示，BRMS1和Survivin主要定位于細胞核和細胞質中，呈線狀棕黃色顆粒。在乳腺癌組織、乳腺良性增生組織和癌旁組織，BRMS1的陽性表達率分別為34.4%(55/160)、81.4%(57/70)、95.0%(38/40)，BRMS1在乳腺癌組織的陽性表達率顯著低于乳腺良性增生組織和癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)；Survivin的陽性表達率分別為78.8%(126/160)、17.1%(12/70)、0(0/40)，Survivin在乳腺癌組織的陽性表達率顯著高于乳腺良性增生組織和癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)；BRMS1和Survivin在乳腺良性增生組織和癌旁組織的表達均差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同乳腺組織BRMS1和Survivin表達的比較

2.2 BRMS1和Survivin表達與乳腺癌臨床病理特征的關系 BRMS1表達與患者年齡、腫瘤大小、病理類型、組織分級無關(P>0.05)，而與TNM臨床分期和淋巴結轉移情況密切相關，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者BRMS1陽性表達率分別為69.6%、51.1%、22.5%，差異有統計學意義(P<0.05)；有淋巴結轉移者和無轉移者相比，BRMS1陽性表達率顯著降低，分別為29.1%和51.6%，差異有統計學意義(P<0.05)。Survivin表達亦與患者年齡、腫瘤大小、病理類型無關，但與組織分級、TNM臨床分期及淋巴結轉移情況密切相關(P<0.05)。見表2。

表2 BRMS1和Survivin表達與乳腺癌臨床病理特征的關系

2.3 BRMS1和Survivin在乳腺癌中表達的相關性 160例乳腺癌組織中，BRMS1和Survivin的表達呈明顯負相關(r=-0.493，P<0.01)。見表3。

表3 BRMS1和Survivin在乳腺癌中表達的相關性比較 例

注：r=-0.493,P<0.01

3 討論

惡性腫瘤致死的主要原因是早期即有癌細胞的侵襲和轉移，包括腫瘤轉移促進基因和腫瘤轉移抑制基因在內的多種基因參與這一調控過程。對這些基因的相關研究不僅有助于我們更深入理解腫瘤侵襲轉移的機制，而且也可作為腫瘤治療的新靶點和診斷、判斷預后的新指標。

BRMS1是2000年由Seraj等[4]發現的一種轉移抑制基因，現已明確證實BRMS1具有顯著地腫瘤轉移抑制作用，但不影響腫瘤本身的生長。Stark等[5]采用免疫組化和RT-PCR技術比較了乳腺癌原發灶和腦轉移灶中BRMS1的表達水平，結果顯示與原發灶相比，腦轉移灶BRMS1的表達降低了10倍。此外，近年來大量研究表明，BRMS1在胃癌、卵巢癌、子宮內膜癌、口腔鱗癌、喉癌、黑色素瘤等多種腫瘤中的表達水平均明顯降低[6]。我們采用免疫組化法檢測BRMS1的蛋白表達水平，結果顯示乳腺癌組織BRMS1陽性表達率顯著低于乳腺良性增生組織和癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)，乳腺良性增生組織和癌旁組織間比較差異無統計學意義(P>0.05)，且乳腺癌組織BRMS1的表達與TNM臨床分期和淋巴結轉移情況密切相關，提示BRMS1失表達與乳腺癌病變進程密切相關，可作為預后評估及判斷乳腺癌患者是否發生淋巴結轉移的可靠指標。

Survivin即生存素，是迄今發現最強的凋亡抑制因子，在乳腺癌、胃癌、食管癌、肺癌等多種惡性腫瘤組織中均異常高表達[3]。我們的實驗結果顯示，乳腺癌組織Survivin陽性表達率顯著高于乳腺良性增生組織和癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)，這與文獻報道的Survivin在乳腺癌中表達率為76.3%的研究結果[7]一致。另外，Survivin的表達與乳腺癌組織分級、TNM臨床分期和淋巴結轉移情況密切相關，提示Survivin在病變早期即被激活而過表達，進而抑制細胞凋亡過程，導致腫瘤細胞生存時間延長。

我們研究結果顯示，BRMS1和Survivin的異常表達呈現明顯的負相關(r=-0.493,P<0.01)，提示二者在乳腺癌的轉移過程中存在某種內在聯系，共同參與了乳腺癌的遠處轉移過程。有研究發現，BRMS1過表達通過抑制NF-kB的活性下調包括Survivin在內的依賴于NF-kB的轉移相關基因的表達，最終抑制腫瘤的轉移[8]，這與我們的研究結果一致：即乳腺癌的轉移過程存在BRMS1失表達和Survivin過表達。另外，BRMS1和Survivin的異常表達均與乳腺癌TNM臨床分期和淋巴結轉移狀況密切相關，提示二者均可作為患者預后的判斷指標。

綜上所述，BRMS1和Survivin共同參與了乳腺癌的發生、發展、轉移和預后，二者的表達水平有望成為診斷和治療乳腺癌的新靶點。

1 Welch DR,Steeg PS,Rinker-Schaeffer CW.Molecular biology of breast cancer metastasis.Genetic regulation of human breast carcinoma metastasis.Breast Cancer Res,2000,2:408.

2 方曉，王英明，喬守怡.BRMS1過表達促進肝癌SK-HEP1細胞凋亡.復旦學報，2009，48：633-638.

3 王大勇.乳腺癌患者手術治療前后Survivin的表達及臨床意義.河北醫藥，2013，35：2749-2750.

4 Seraj MJ,Samant RS,Verderame MF,et al.Functional evidence for a novel human breast carcinoma metastasis suppressor,BRMS1,encoded at chromosome 11q13.Cancer Res,2000,60:2764.

5 Stark AM,Tongers K,Maass N,et al.Reduced metastasis suppressor gene mRNA expression in breast cancer brain metastases.J Cancer Res Clin Oncol,2005,131:191.

6 Kelly LM,Buggy Y,Hill A,et al.Expression of the breast cancermetastasis suppressor gene,BRMS1,in human breast carcinoma: lack of correlation with metastasis to axillary lymph nodes.Tumour Biol,2005,26: 213.

7 王昌良，鄭春輝，王在國.Survivin在乳腺癌中的表達及意義.中國腫瘤外科雜志，2012，4：56-57.

8 Cicek M,Samant RS,Kinter M,et al.Identification of metastasis associated proteins through protein analysis of metastatic MDAMB 435 and metastasis suppressed BRMS 1 transfected MDAMB 435 cells.Clin Exp Metastasis,2004,21:149.

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本刊編輯部

ExpressionandclinicalsignificanceofBRMS1andSurvivininbreastcancer

WANGDayong.DepartmentofGeneralSurgery,BabaoshanCollieryWorker’sHospital,Hebei,Huailai075430,China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of BRMS1 and Survivin in breast cancer,and to explore the correlation between them and their effects on the pathogenesis,development,metastasis and prognosis of breast cancer.MethodsThe expression levels of BRMS1 and Survivin were detected by immunohistochemistry in 160 cases of breast cancer,70 cases of mammary glands benign proliferative lesions and 40 cases of normal tissues adjacent to breast cancer.The data was analyzed together with clinical pathological parameters.ResultsThe positive expression rates of BRMS1in breast cancer,mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer were 34.4%,81.4%,95.0%,respectively,the positive expression rates of BRMS1 in breast cancer were significantly decreased,as compared with those in mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer (P<0.05).However the positive expression rates of Survivin in breast cancer,mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer were 78.8%,17.1%,0,respectively,the positive expression rates of Survivin breast cancer were significantly increased,as compared with those in mammary glands benign proliferative lesions and normal tissues adjacent to breast cancer (P<0.05).The abnormal expression of BRMS1 and Survivin in breast cancer tissue was correlated to TNM clinical stage and lymph node metastasis.Survivin was also related to histological grade.The abnormal expression of BRMS1 and Survivin in breast cancer tissue was not related to patient's age and tumor's size,but the expression of BRMS1 was negatively correlated with that of Survivin.ConclusionBRMS1 and Survivin play an important role in the carcinogenesis,development,metastasis and prognosis of breast cancer,which can be used as the markers in diagnosis and prognosis evaluation of breast cancer.

breast cancer;BRMS1;Survivin

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.007

075430 河北省懷來縣，八寶山煤礦職工醫院普外科

R 737.9

A

1002-7386(2014)03-0342-03

2013-10-15)