妊娠期高血壓疾病患者胎盤共刺激分子B7-1和B7-2的研究

劉影 張文真 張國華 李望

·論著·

妊娠期高血壓疾病患者胎盤共刺激分子B7-1和B7-2的研究

劉影 張文真 張國華 李望

目的 探討妊娠期高血壓疾病患者胎盤巨噬細胞共刺激分子B7-1、B7-2的表達水平，探討B7-1、B7-2和B7-1/B7-2在發病中的作用。方法采集28例子癇前期患者(包括12例輕度和16例重度)，12例妊娠期高血壓患者，12例正常妊娠婦女的胎盤巨噬細胞，用流式細胞技術分別測B7-1、B7-2的表達率。結果子癇前期患者B7-1/B7-2(0.75±0.13)均高于其余各組(P<0.05)，子癇前期組胎盤B7-1(19.50±4.05%)高于其它各組(P<0.05)，結論妊娠期高血壓疾病患者胎盤局部B7-1的過度表達及B7-2和B7-1/B7-2失衡可能是其發生的重要原因。

妊娠期高血壓疾病；子癇前期；抗原遞呈細胞；共刺激分子；B7-1；B7-2；胎盤

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，妊娠終止后多數病理變化可以逆轉，說明胎盤這一器官可能在妊娠期高血壓疾病發病中起到重要作用。胎盤是連接母體與胎兒的主要組織，產生免疫應答的場所，在母胎界面的免疫反應中發揮著重要作用。研究表明妊娠期高血壓疾病時母體免疫反應由T輔助細胞2型(Th2)占優勢的保護性反應轉向了以T輔助細胞1型(Th1)占優勢的排斥反應，即Th1/Th2失衡[1]。本研究使用流式細胞技術測定妊娠期高血壓疾病患者抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)外周血單核細胞共刺激分子B7-1和B7-2的表達水平，探討它們在Th1/Th2失衡及誘導妊娠免疫耐受和導致妊娠期高血壓疾病發病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 試驗組：選取2004年12月至2005年5月在河北醫科大學第二醫院產科住院分娩的妊娠期高血壓疾病患者40例,其中妊娠期高血壓患者12例(妊娠期高血壓組)，子癇前期患者28例(子癇前期組，包括輕度12例和重度16例)。診斷按樂杰主編的全國統編教材《婦產科學》第6版妊娠期高血壓疾病診斷標準。對照組：同期住院分娩的正常孕婦12例(正常妊娠組)孕婦均為初孕婦，無多胎妊娠，無慢性高血壓、血糖正常、無反復流產史、慢性腎病、未經生殖技術幫助、無免疫性疾病、未經免疫藥物治療。

1.2 實驗試劑 鼠抗人FITC-B7-1、PE-B7-2及陰性對照均購自美國Becton-Dickinson公司。RPMI-1640粉末：美國GIBCO公司產品。

1.3 方法

1.3.1 胎盤取材及巨噬細胞分離：3組孕婦胎盤娩出后，取胎盤母面中央1 cm×1 cm×1 cm,用帖壁法分離純化的單核細胞/巨噬細胞。將制成的單核細胞懸液在12 h內送流式檢驗B7-1、B7-2表達率。

1.3.2 流式法檢測B7-1、B7-2表達率流式法檢測B7-1和B7-2表達率：取單細胞懸液1×106/ml，加入鼠抗人單克隆抗體0.1 ml，室溫孵育30 min，加入PBS 10 ml 洗滌1次，棄上清，加入羊抗鼠二抗0.1 ml，避光室溫孵育30 min，加入PBS 10 ml離心，棄上清以除去未結合的熒光二抗，同時設本底對照和陰性對照。應用Expo32ADC進行免疫熒光數據分析。以熒光指數(FI)表示它們的相對含量。

2 結果

2.1 臨床特征 各組實驗對象在年齡上差異無統計學意義 (P>0.05)，子癇前期組在分娩孕周、MAP、新生兒體重與后2組差異有統計學意義(P<0.05)，后2組間差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

組別年齡(歲)分娩孕周(周)MAP(mmHg)新生兒體重子癇前期組(n=28)27．7±3．135．3±2．2?#△ 125±10?#△ 2307±512?# 輕度(n=12)28．0±2．936．6±2．6119±5 2596±563 重度(n=16)27．5±3．433．3±3．7128±10 1938±647妊娠期高血壓組(n=12)27．5±3．038．2±0．9#106±4?# 3521±324正常妊娠租(n=12)27．3±2．639．0±1．086±3△ 3539±327

注：與妊娠期高血壓組比較，*P<0.05；與正常妊娠組比較，#P<0.05；與正常未孕組比較，△P<0.05

2.2 各組孕婦胎盤組織巨噬細胞B7-1、B7-2表達率及B7-1/B7-2比率 PE組胎盤巨噬細胞B7-1表達率高于其它各組(P<0.05)， PE組間無統計學意義(P>0.05)。妊娠期高血壓患者B7-1表達率高于正常妊娠婦女，但無統計學差異(P>0.05)。子癇前期組胎盤組織巨噬細胞B7-2表達率高于其它各組(P<0.05)；PE組間無顯著性差異(P>0.05)。妊娠期高血壓組與正常妊娠組相似，差異無統計學意義(P>0.05)。子癇前期患者胎盤組織巨噬細胞B7-1/B7-2比率均高于其余各組(P<0.05)，重度PE組高于輕度PE組 (P<0.05)。妊娠期高血壓組也高于正常妊娠組(P<0.05)。見表2。

表2 各組胎盤B7-1、B7-2及B7-1/B7-2比率比較

注：與妊娠期高血壓組比較，*P<0.05；與正常妊娠組比較，#P<0.05；與子癇前期組比較，△P<0.05

2.3 不同分娩孕周的分組情況 根據分娩孕周不同，將子癇前期組分為<37周和≥37周2組，2組比較各數值均差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

周別孕周B7?1(%)B7?2(%)B7?1/B7?2<37周(n=17)34．0±1．410．8±2．818．9±3．20．58±0．09≥37周(n=11)38．1±1．310．0±1．119．2±2．10．55±0．08

3 討論

胚胎是一半同種異物，妊娠成功有賴于胎兒-母體間的免疫平衡，如這種平衡一旦失調，即可導致發生排斥反應，導致妊娠并發癥妊娠期高血壓疾病的發生[2]。胎盤作為一個免疫器官，一個母體與胎兒直接接觸面，是發生和影響免疫反應的重要部位。胎兒從未與母體組織直接接觸，母胎免疫調控機制可能僅發生于胎盤的母胎界面處[3]。 胎盤中免疫細胞及其分泌的細胞因子在維持正常妊娠中均起著重要的免疫調節作用。其中胎盤巨噬細胞表達MHC-II類抗原，執行抗原遞呈功能，其還可分泌多種細胞因子和某些生物活性物質，胎盤巨噬細胞被認為母胎界面局部影響免疫反應的最重要的免疫細胞。

本研究發現，正常晚期妊娠時B7-2表達水平升高，B7-1的表達處于低水平，妊娠期高血壓疾病患者胎盤巨噬細胞B7-1的表達顯著高于正常妊娠組，而B7-2的表達低于正常妊娠組。在子癇前期尤其如此。因此我們推斷這一變化使Th2免疫反應減弱，Th1免疫反應增強，使Th1/Th2比率失衡，血清中Th1型細胞因子如TNF-α等濃度升高，滋養細胞功能受損，胎盤床血管重鑄障礙，胎盤循環缺血、缺氧，血管內皮細胞受損，從而引起一系列的細胞因子的異常變化，導致全身小血管痙攣而致妊娠期高血壓疾病的發生。因為，已經證實， B7-1主要刺激CD4+T細胞向Th1細胞分化，而B7-2主要協同刺激CD4+T細胞向Th2細胞分化[4]。這一結果也正好用來解釋為何正常妊娠是Th2偏離現象[5]。這一結論為妊娠期高血壓疾病的臨床治療開辟新的途徑。

本研究還發現，妊娠期高血壓組和正常妊娠組患者胎盤表達B7-1/B7-2有統計學意義，這說明 B7-1/B7-2這一比率在妊娠期高血壓疾病的發生、發展過程中也具有重要的作用。妊娠期高血壓組和正常妊娠組患者胎盤表達B7-1和B7-2的含量的變化無統計學意義，其原因可能與樣本數量少有關，也可能是分娩孕周的差異影響了實驗結果，但在PE組中不同的分娩孕周其B7-1、B7-2及B7-1/B7-2比率在統計學上無明顯差異，其原因有待于進一步研究。

通過本研究我們認為：母胎界面局部免疫失調，尤其是B7-1的過度表達，B7-2受抑制以及B7-1/B7-2比率失衡可能是妊娠期高血壓疾病發生的始動因子。B7-1/B7-2比率更為嚴重的失衡在一定程度上反映了妊娠期高血壓疾病患者的局部細胞免疫功能的變化，可能是其發病的關鍵。

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2 chao G.Innately moving away from the Th1/Th2 paradigm in pregnancy.Clin Exp Immunol，2003,131:393-395.

3 Sylive F,Francoise L.Cutting edge:soluble HLA-G triggers CD95/CD95 ligand-mediated apoptosis in activated CD8+ cells by interacting with CD8.Immunol,2000,164:6100.

4 Boussiotis VA,Freeman GJ,Gribben JG,et al.The role of B7-1/B7-2:CD28/CTLA4 pathways in the prevention of anergy,induction of productive immunity and down- regulation of the immune response.Immunol Rev,1996,153:5-26.

5 Wegmann TG,Lin H,Guilbert L,et al.Bidirectionnal cytokine interactions in the matenal-fetal relationship:is successful pregnancy a TH2 phenomenon ? Immunol Today,1993,14:256-353.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.031

050031 河北省石家莊市第四醫院產9科(劉影、張國華、李望)；河北醫科大學第二醫院婦產科(張文真)

R 714.246

A

1002-7386(2014)03-0393-02

2013-06-20)