Notch1和c-myc在三陰乳腺癌中的表達及意義

秦景云

·論著·

Notch1和c-myc在三陰乳腺癌中的表達及意義

秦景云

目的檢測三陰乳腺癌組織(TNBC)中Notch1、c-myc表達并探討其意義。方法采用免疫組織化學S-P法檢測63例TNBC組織和30例癌旁正常乳腺組織Notch1、c-myc的表達情況。結果TNBC組織中Notch1、c-myc陽性表達定位于細胞質和細胞核，其表達率分別為71.43%(45/63)、69.84%(44/63)，明顯高于癌旁正常組織(P<0.01)；63例TNBC組織中，Notch1、c-myc蛋白在組織學分級Ⅲ級陽性表達率高于Ⅰ～Ⅱ級(P<0.05)，Notch1、c-myc的病理分期Ⅲ-Ⅳ期的表達率高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，Notch1、c-myc陽性表達與淋巴結轉移有關(P<0.05)；相關性分析顯示，二者之間呈正相關(P<0.05)。結論Notch1、c-myc在TNBC中呈明顯高表達，與TNBC的發生、發展和轉移密切相關。

三陰乳腺癌；Notch1；c-myc；免疫組化

三陰乳腺癌(Triple negative breast cancer,INBC)是指雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone reeeptor,PR)和人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor2,HER-2)都為陰性的乳腺癌亞型,是乳腺癌中的一種特殊類型，占乳腺癌總數的10%～15%。由于此類乳腺癌內分泌治療和曲妥珠單抗靶向治療無效，預后很差，較早發生局部復發和遠處轉移，易發生 脊髓、腦膜、腦、肝和肺轉移[1]。Notch是一個跨膜受體家族，其異常表達與某些惡性腫瘤的發生、發展關系密切。本研究擬用免疫組織化學SP法檢測Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織中的表達情況，進一步了解癌基因蛋白與三陰乳腺癌預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有病例均來自2009年1月至2012年12月在我院手術治療，并且病理診斷和免疫組織化學檢測ER、PR和Her-2均陰性的三陰乳腺癌，共63例，均為女性，年齡26～79歲，中位年齡(41.8±2.5)歲。所有患者術前均未進行放化療和內分泌治療。所有手術標本臨床病理資料齊全，均統一重新切片，HE染色再次確定診斷。病例中42例伴淋巴結轉移轉移；病理類型為浸潤性導管癌38 例、浸潤性小葉癌25例。病理分級為：Ⅰ級15例，Ⅱ級26例，Ⅲ級22例[2]。臨床病理分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期25例，Ⅳ期20例。所有標本常規取材，中性甲醛固定，石蠟切片(4 μm)，HE染色。同時，另取標本中的30例的癌旁正常組織作為對照組。

1.2 方法 兔抗人Notch1抗體、鼠抗人c-myc抗體工作液、即用型SP試劑盒和DAB染色劑均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。采用SP法，抗原熱修復，免疫組化染色過程按試劑盒說明操作，蘇木素襯染。

1.3 結果判定 Notch1陽性表達主要定位于細胞質和細胞核，部分定位為細胞膜，c-myc陽性表達定位于細胞質和細胞核，以細胞核或(和)細胞核中出現棕黃色顆粒為陽性表達。每張切片觀察5個高倍視野(400×)，陽性細胞數<5%為(-)，≥5%和<25%為(+)，≥25%和<50%為(++)，≥50%(+++)。

1.4 統計學分析 應用SPSS 16.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，相關性分析采用Spearman等級相關，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織和正常組織中的表達 Notch1 陽性表達主要位于細胞胞質和胞核，少量位于胞膜，呈棕黃色顆粒,陽性率為71.43%(45/63)，c-myc陽性表達主要位于細胞胞質和胞核，呈成棕黃色顆粒，陽性率69.84%(44/63)，二者的陽性表率明顯高于正常組織的3.33%(1/30)和3.33%(1/30)(P<0.01)。

2.2 三陰乳腺癌組織中，二種蛋白的表達與臨床病理指標的關系 在三陰乳腺癌組織中，Notch1的陽性表達與年齡無關，而與腫瘤的大小、組織分級、TNM分期和淋巴結轉移有關。c-myc陽性表達與年齡、腫瘤大小無關，而與腫瘤的組織分級、TNM分期和淋巴結轉移有關。見表1。

表1 Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織中的表達與臨床病理的關系 例

2.3 三陰乳腺癌中Notch1和c-myc蛋白之間表達的關系 Spearman等級相關性分析結果表明，在三陰乳腺癌組織中Notch1與c-myc的表達呈顯著正相關(P<0.01)。見表2。

表2 Notch1和c-myc在三陰乳腺癌組織中表達的相關性 例

3 討論

Notch基因編碼一類大的跨膜Notch受體，在哺乳動物中Notch受體有四種：Notch1～Notch4。Notch基因包括胞外區、跨膜區(trammembrane domain,TM)和胞內區(notch intracellular domain,NICD)[3]。Notch受體與配體結合后激活Notch信號系統，蛋白水解后釋放出NICD，NICD是受體蛋白的活性形式，NICD從細胞膜上脫離后進入細胞核，與DNA結合蛋白CSL結合。CSL和NICD作為Notch信號通路的初級效應分子，其形成NICD-CSL復合體激活靶基因的表達，在細胞的增殖、分化、凋亡以及腫瘤形成等過程中發揮重要的生物學作用[4]。其中Notch1是最常被檢測到的Notch受體家族成員之一。

由于Notch信號通路可以與其它細胞信號通路發生交互作用(talk-cross)，因此許多不同的刺激可激活Notch通路。并且不同的Notch的配體和靶基因，在不同組織以及瘤發展的不同階段，Notch作用也可能不同。因此，在人類惡性腫瘤中，Notch1作用可以是抑癌基因或是癌基因[5]。研究發現，在人類乳腺癌中Notch1更多的起到是癌基因的作用，Notch1信號表達下調可使細胞凋亡癌細胞生長抑制[6]。在三陰乳腺癌中，Notch1表達水平高的患者術后生存率低，并且對化療的敏感性差[7]。本研究也發現，正常組織中Notch1的表達明顯低于三陰乳腺癌組。三陰乳腺癌組中Notch1的表達隨著病理分級增高逐漸增強。Notch1表達與腫瘤大小，臨床分期關系密切(P<0.05)。

myc基因家族屬于核蛋白類的癌基因，包括c-myc(cell-myc)、N-myc(human neuroblastomas)和L-myc(small cell lung carcinomas)三個成員，其中的c-myc是上述三者中作用最強的，定位于8號染色體，結構上由不編碼蛋白質的第1外顯子和編碼蛋白質的第2,3外顯子構成。myc基因家族及其產物可促進細胞增殖，永生化，去分化和轉化等，在多種腫瘤形成過程中處于重要地位[8]。c-myc基因是禽類髓細胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的細胞同源序列，c-myc基因的表達一般與細胞的生長狀態有關，如有生長因子刺激成纖維細胞，可導致c-myc表達增強。在細胞培養過程中，用c-myc表達結構或反義寡脫氧核酸進行研究，發現c-myc在細胞 G0期到S期的過程中也起作用，表明c-myc表達的變化與細胞的增殖及分化狀態有關，其表達產物在調節細胞生長、分化或惡性轉化中發揮作用。c-myc基因主要通過擴增和染色體易位重排的方式激活，與某些組織腫瘤的發生、發展和演變轉歸有重要關系[9，10]。研究發現在乳腺癌細胞系有c-myc或c-myc相關序列的擴增，而且c-myc過量表達與腫瘤的早期復發有關[11]。本研究發現，三陰乳腺癌組織中c-myc的陽性表達與組織分級、病理分期和淋巴結轉移有關(P<0.05)，與患者的年齡和腫瘤大小無關(P>0.05)。c-myc在三陰乳腺癌的陽性表達明顯高于癌旁正常組織。

進一步相關性分析表明，Notch1、c-myc在三陰乳腺癌組織中呈正性相關。其機制可能是：c-myc作為Notch1的下游靶基因，Notch1促進腫瘤的發生發展是 c-myc 依賴性的[12]。由于三陰乳腺癌患者缺乏內分泌及靶向治療的機會，在三陰乳腺癌中研究Notch1和c-myc的表達，有助于為三陰乳腺癌尋找新的靶點。

總之，Notch1、c-myc在三陰乳腺癌的發生、發展過程中存在一種相互協同作用，共同促進腫瘤的發生。二者的聯合檢測有助臨床對三陰乳腺癌的研究，具有一定現實意義。

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4 Leong KG,Karsan A.Recent insights into the role of Notch signaling in tumorigenesis.Blood,2006,107:2223-2233.

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11 Benharroch D,Yermiahu T,Geffen DB,et al.Expression of c-myc and c-ras oncogenes in the neoplastic and non-neoplastic cells of Hodgkin's disease.Eur J Haematol,1995,55:178-183.

12 Klinakis A,Szabolcs M,Politi K,et al.Myc is a Notch1 transcriptional target and a requisite for Notch1-induced mammary tumorigenesis in mice.Proc Natl Acad Sci,2006,103:9262-9267.

ExpressionandsignificanceofNotch1andc-mycinhumantriple-negativebreastcancer

QINJingyun.DepartmentofThoracicSurgery,HandanCentralHospital,Hebei,Handan056001,China

ObjectiveTo investigate the expression of Notch1 and c-myc in human triple-negative breast cancer(TNBC),and to explore its clinical significance.MethodsThe expression levels of Notch1 and c-myc were detected by immunohistochemistry(SP) in 63 cases of TNBC and 30 cases of cancer adjacent normal breast tissues.ResultsThe expression of Notch1 and c-myc in human breast cancer was located in nucleus and cytoplasm.The positive expression rates of Notch1 and c-myc were 71.43%(45/63),69.84%(44/63),respectively in TNBC tissues,which were significantly higher than those in adjacent normal breast tissues(P<0.05).Among 63 cases of TNBC,the positive expression rates of Notch1 and c-myc at histological grade Ⅲ were significantly higher than those at grade Ⅰ～Ⅱ(P<0.05).In addition,the positive expression rates of Notch1 and c-myc in stage Ⅲ～Ⅳ were significantly higher than those in stage Ⅰ～Ⅱ(P<0.05).Furthermore,the expression levels of Notch1 and c-myc were positively correlated to lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionNotch1 and c-myc are highly expressed in TNBC,which is closely correlated with the occurrence,development and metastasis of TNBC.

triple-negative breast cancer；Notch1；c-myc；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.11.004

056001 河北省邯鄲市中心醫院胸外科

R 737.9

A

1002-7386(2014)11-1614-03

2013-12-11)