慢性重型乙型肝炎患者外周血DNT細胞及T細胞亞群的表達及意義

劉坤 楊亞萍 刁青 陳璀 孫謝文

·論著·

慢性重型乙型肝炎患者外周血DNT細胞及T細胞亞群的表達及意義

劉坤 楊亞萍 刁青 陳璀 孫謝文

目的研究外周血CD+3CD-4CD-8(DNT)細胞及T細胞亞群在慢性重型乙型肝炎患者的表達及意義。方法正常對照者32例、慢性乙型肝炎(CHB)40例、慢性重型乙型肝炎(CSHB)35例患者為研究對象，采用流式細胞儀檢測各組外周血DNT細胞及T細胞亞群。結果CHB組和CSHB組DNT細胞占T淋巴細胞的百分比與對照組比較明顯增高(P<0.05)；而CSHB組增高程度更為顯著，與CHB組比較差異亦有統計學意義(P<0.05)。HBV DNA載量與DNT細胞占T淋巴細胞的百分比呈正相關(r=0.742，P<0.05)。CHB組與對照組比較，僅CD+4亞群明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)；CSHB組和CHB組比較，CD+4亞群及CD+4/CD+8明顯降低，CD+8亞群明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。結論慢性重型乙型肝炎患者DNT細胞顯著增高及T細胞亞群比例異常可能是慢性乙型肝炎發生發展的重要因素。

慢性重型乙型肝炎；DNT細胞；T細胞亞群

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年6月至2013年10月期間我院收治的慢性HBV感染者75例，其中，男55例，女20例；年齡16～73歲，中位年齡40.8歲；CHB患者40例和CSHB患者35例。均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》對慢性乙型肝炎的診斷標準[5]。所有患者6個月內均未接受抗病毒治療。排除其他病毒引起的肝炎、HIV陽性者及肝癌、酒精性肝病等。同時選取我院健康體檢者32例為對照組，其中男20例，女12例；年齡21～68歲，中位年齡39.8歲；均經查體證實HBsAg陰性，肝功能正常。

1.2 檢測方法

1.2.2 HBV DNA載量測定：使用美國ABI7300型基因擴增儀，采用實時熒光定量PCR法檢測標本，試劑盒由上海生工生物工程技術有限公司提供。HBV DNA≤103copies/ml為陰性，HBV DNA>103～105copies/ml為低載量，HBV DNA 105～107copies/ml為中載量，HBV DNA>107copies/ml為高載量。

2 結果

2.1 3組DNT細胞分布比較 CHB組和CSHB組DNT細胞絕對數與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。DNT細胞占T淋巴細胞的百分比與對照組比較明顯增高，差異有統計學意義(P<0.05)；而CSHB組增高程度更為顯著，與CHB組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1各組DNT細胞分布比較

組別DNT細胞絕對數(個/mm3)DNT(%)1對照組(n=32)118±596±4 CHB組(n=40)112±558±4*CSHB組(n=35)124±6211±5*#

注：與對照組比較，*P<0.05；與CHB組比較，#P<0.05

2.2 不同HBV DNA載量與HBV患者DNT細胞分布比較 陰性組與對照組比較，DNT細胞占T淋巴細胞的百分比差異無統計學意義(P>0.05)；隨著HBV DNA載量增高，DNT細胞百分比逐漸升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2不同HBV DNA載量與HBV患者DNT細胞分布比較

組別DNT對照組(n=32)6±4陰性組(n=8)6±4低載量組(n=12) 8±4*#中載量組(n=32) 10±5*#△高載量組(n=23) 11±5*#☆

注：與對照組比較，*P<0.05；與陰性組比較，#P<0.05；與低載量組比較，△P<0.05；與中載量組比較，☆P<0.05

2.3 HBV DNA載量與HBV患者DNT細胞分布的相關性 HBV DNA載量的對數值與DNT細胞占T淋巴細胞的百分比呈正相關(r=0.742，P<0.05)。

組別CD+4CD+8CD+4/CD+8對照組(n=32)42±4 25±31.7±0.4CHB組(n=40)38±4*25±31.5±0.4CSHB組(n=35)30±4*# 33±4*#0.9±0.3*#

注：與對照組比較，*P<0.05；與CHB組比較，#P<0.05

3 討論

慢性乙型肝炎患者由于病毒持續復制可誘導機體產生各種細胞因子、炎性介質及宿主免疫病理反應，這些復雜作用最終造成大塊肝組織壞死進而發生為慢性重型乙型肝炎、肝衰竭甚至多臟器功能衰竭，患者病死率高達40%～60%。研究表明，淋巴細胞介導的細胞免疫功能紊亂是影響慢性乙型肝炎病變發展及預后的重要因素，其中免疫調節細胞在這一病理損傷過程中發揮重要作用[6]。

總之，慢性重型乙型肝炎患者存在DNT細胞高表達及T淋巴細胞比例失衡，這是導致機體免疫功能低下，感染慢性化的主要原因。

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3 Juvet SC,Han M,Vanama R,et al.Autocrine IFNγ controls the regulatory function of lymphoproliferative double negative T cells.PLoS One,2012,7:e47732.

4 D’Acquisto F，Crompton T.CD3+CD4-CD8-(double negative) T cells:saviours or villains of the immune response.Biochem Pharmaco，2011，82:333-340.

5 中華醫學會肝病學分會和感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南.實用肝臟病雜志，2011，14:81-89.

6 Chisari FV,Isogawa M,Wieland SF.Pathogenesis of hepatitis B virus infection.Pathol Biol (Paris),2010,58:258-266.

7 Kim EY,Juvet SC,Zhang L． Regulatory CD4(-)CD8(-) double negative T cells.Methods Mol Biol,2011,677:85-98．

8 陸玉蕾,王曉晶,嚴偉明,等.TCRγδ+CD3+CD4-CD8-雙陰性T細胞在3型鼠肝炎病毒誘導的小鼠慢性病毒性肝炎發病中的作用.實用肝臟病雜志,2012,15:339-342.

ExpressionandsignificanceofdoublenegativeTcellsandlymphocytesubtypeinpatientswithchronicseverehepatitisB

LIUKun,YANGYaping,DIAOQing,etal.DepartmentofLiverDiseases,TheThirdHospitalofQinhuangdaoCity,Hebei,Qinhuangdao066001,China

ObjectiveTo investigate the expression and significance of CD+3CD-4CD-8(DNT)cells and lymphocyte subtype in patients with chronic severe hepatitis B.MethodsThe serum samples from 32 healthy subjects,40 patients with chronic hepatitis(CHB)and 35 patients with chronic severe hepatitis B (CSHB) were collected in this study.The DNT cells and lymphocyte subtype in peripheral blood were detected by flow cytometry.ResultsThe percent of DNT cells in CHB and CSHB groups [(8.44±4.25)% and (10.78±5.33)%,respectively] were significantly higher than those in control group [(6.23±3.77)%,P<0.05],moreover,the increase extent in CSHB group was more obvious than that in CHB group (P<0.05).The HBV DNA load was positively correlated to DNT cells (r=0.742,P<0.05).The CD+4+ T lymphocytes in CHB group were significantly decreased,as compared with those in control group (P<0.05).The percentages of CD+4T lymphocytes and the ratio of CD+4/CD+8in CSHB group were significantly decreased,however,CD+8T lymphocytes were significantly increased,as compared with those in CHB group (P<0.05).ConclusionThe obvious increase of DNT cells and the abnormality of T lymphocyte subset percentage in patients with chronic severe hepatitis B may be one of important reasons for the pathogenesis and development of chronic hepatitis B．

chronic severe hepatitis B;double negative T cells;T-lymphocytes subsets

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.15.002

066001 河北省秦皇島市第三醫院肝病科

R 512.62

A

1002-7386(2014)15-2248-03

2014-01-07)