Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表達及與腫瘤侵襲轉移的關系

江麗琴　周靜　黃偉政

[摘要] 目的 探討Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表達及與腫瘤侵襲轉移的關系。方法 選取于我院及吉林大學附屬醫院診治的65例卵巢上皮性腫瘤患者和正常卵巢組織標本蠟塊15例。將切除的卵巢組織以免疫組化法檢測Livin及Beclin1蛋白表達情況，分析與卵巢癌組織分化、淋巴結轉移及臨床分期的關系。結果 Livin在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%）、在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。卵巢癌組織分化、淋巴結轉移及臨床分期與Livin與Beclin1表達程度相關（P< 0.05）。 結論 Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表達與腫瘤侵襲轉移中起重要作用，可成為卵巢癌治療的新靶點。

[關鍵詞] 上皮性卵巢癌；Livin；Beclin1；免疫組化

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）23-0135-03

[Abstract] Objective To explore the expression of Livin and Beclin1 in epithelial ovarian cancer and their relations with tumor invasion and metastasis. Methods A total of 65 patients with epithelial ovarian cancer who were admitted and treated in our hospital and Jilin University Affiliated Hospital， plus 15 blocks of normal ovarian tissue samples were selected. Excised ovarian tissues were tested via immunohistochemistry to test the protein expression of Livin and Beclin1， and their relations with tissue differentiation of ovarian cancer， lymphatic metastasis and clinical staging were analyzed. Results Positive rate of expression of Livin， rare expression in normal ovarian tissues （6.7%）， and the highest expression rate in tissues of ovarian cancer （68.6%）； Positive rate of expression of Beclin1， the highest expression rate in normal ovarian tissues （93.3%） and the lowest in tissues of ovarian cancer （37.1%）. Tissue differentiation of ovarian cancer， lymphatic metastasis and clinical staging were interrelated with the expression degree of Livin and Beclin1 （P<0.05）. Conclusion Expression of Livin and Beclin1 in epithelial ovarian cancer and tumor invasion and metastasis plays an important role and may become a new target in the treatment of ovarian cancer.

[Key words] Epithelial ovarian cancer； Livin； Beclin1； Immunohistochemistry

卵巢癌作為女性生殖系統三大惡性腫瘤之一，死亡率最高，5年生存率不足30%。在腫瘤的發生、發展中細胞凋亡受阻是主要機制，可使化療效果大打折扣。Livin基因屬于凋亡抑制蛋白家族，可抑制細胞凋亡，與多種腫瘤的惡性程度與預后有關[1]。Beclin1基因可控制自噬活動，抑制腫瘤的生長，其機制為提高細胞自噬活性，多數腫瘤患者中可見Beclin1表達下調或缺失。本研究為探討Livin及Beclin1基因蛋白與腫瘤侵襲轉移的相關關系，檢測其在卵巢癌組織中的表達情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2000年～2010年于本院及吉林大學附屬醫院診治的原發性卵巢上皮性腫瘤標本65例，術前無化療或放療史，術后組織病理確診。年齡26～72歲，平均（46.3±12.7）歲。15例良性卵巢腫瘤，15例交界性卵巢腫瘤，35例卵巢癌。按國際婦產科聯盟（ FIGO，1985） 卵巢癌分期： Ⅰ期 7例，Ⅱ期 11例，Ⅲ期 13例，Ⅳ期 4例；13例有淋巴結轉移，22例無淋巴結轉移。15例正常卵巢組織來自卵巢活檢病例，經病理證實無異常。

1.2 實驗方法

免疫組織化學染色用品：SP檢測試劑盒、DAB顯色液、兔抗人Beclin1多克隆抗體（由福州邁新生物技術開發公司）、兔抗人Livin 多克隆抗體。已知陽性切片為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗為陰性對照。具體步驟參考說明書進行。

1.3 觀察指標

于400倍光鏡下選取5個視野，對細胞漿內可見棕黃色顆粒的細胞進行標記。隨機選取5個高倍視野或記數500個細胞（盡量多次計算求平均值），細胞核或細胞漿為無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色依次為0～3分[2]。陽性細胞所占比例：無為0分，≤10%為1分，10%～50%為2分，50%～75%為3分，75%～100%為4分[3]。統計Livin和Beclin1陽性患者分化程度、臨床分期及淋巴結轉移情況。endprint

1.4 統計學處理

應用SPSS19.0統計學軟件處理結果，計數資料用χ2檢驗，采用Spearman 等級相關分析Livin、Beclin1之間的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各類卵巢組織中Livin、Beclin1表達結果

Livin 的表達陽性率：在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%），在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1的表達陽性率：在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。見表1。

3 討論

卵巢惡性腫瘤的診斷和治療都是一大難題。細胞凋亡和增殖的平衡是生物個體正常生長發育的基礎，平衡的破壞為疾病尤其是腫瘤的發生、發展提供了必要的平臺，細胞增殖過度和細胞凋亡受阻是卵巢癌形成過程中的重要機制。Livin可發現于胚胎組織中，存在和表達于胎兒發育過程中，在正常人體終末組織一般不出現。Livin細胞定位的研究仍在繼續，需要進一步證實其準確的定位。多種腫瘤研究表明，大多數腫瘤組織可出現Livin表達[4，5]，提示Livin的過表達對腫瘤細胞持續生長具有相關性。自噬（autophagy）性細胞死亡非細胞凋亡、壞死。腫瘤早期，自噬性抑制腫瘤發生，若自噬性下降將使得癌癥發展。有研究發現自噬活性程度同腫瘤的發生發展關系緊密。Livin蛋白表達上調可能在促進卵巢癌細胞異常增殖和惡性轉化中起重要作用，與腫瘤的發生、發展關系密切，因而成為研究熱點。Beclin1基因參與自噬調控，是雙等位抑癌基因，缺失可導致腫瘤轉化為惡性。多種人類惡性腫瘤中存在Beclin1表達的下調或缺失[7，8]，可以認為Beclin1是新型的腫瘤抑制基因。自噬主要作用機制為：調節細胞內過氧化物濃度，調整蛋白代謝、維護內環境、避免腫瘤產生；若自噬功能下降，會出現氧化應激，增加致瘤性突變的積累[9]。自噬現象在真核細胞正常生理病理中均存在，發揮雙重作用，細胞周圍環境改變時，影響不同[10]。因此，抑制腫瘤的生長可運用提高細胞自噬活性進行研究。

本研究表明，Livin在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%），在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。Livin、Beclin1與FIGO分期和淋巴結轉移及組織分化有關（P<0.05）。卵巢癌組織中Livin、Beclin1兩者的表達不存在顯著相關性。表明Livin的表達與癌癥密切相關，對腫瘤細胞持續生長有一定作用，與臨床其他同主題研究結果一致。同時，有研究也表明[6]Livin在卵巢癌發生、演化、浸潤和轉移中的作用也不容忽視。以上各點均可用于治療卵巢癌，Livin很可能作為卵巢癌治療高效分子靶點。Livin、Beclin1在卵巢癌組織中的表達無明顯相關性。可能與樣本量較少或者研究水平、研究設備等有關系，需要進一步研究。

綜上所述，Livin在卵巢癌發生、演化、浸潤以及轉移過程中發揮重要作用；Beclin1蛋白表達下降提示自噬活性下降，與卵巢癌的出現、發展密切相關。

[參考文獻]

[1] Anna CH，L ida M，Sills RC，et al. Expression of potentialbeta-catenin targets，cyclin D1，C-jun，C-Myc，E-cadherin，and EGFR in chemically induced hepatocellar ne2op lasms from B6C3F1 mice[J]. Toxico1 App l Pharmacol，2013，190（2）：1352145

[2] Crook NE，Clem RJ，Miller LK. An apoptosis inhibiting baculovirus gene with a zinc finger-like motif[J]. J Viro1，2013，67（4）：2168-2174.

[3] Lin JH，Deng G，Huang Q，et al. KIAP，a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Connntm，2013，279（3）：820-831.

[4] 劉文博，孔紅霞. Livin、Smac和Ki67在上皮性卵巢癌中的表達及意義[J]. 中國婦幼保健，2011，26（12）：1875-1878.

[5] Yagihashi A，Asanuma K，Nakamura M，et al. Detection of anti-Survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem，2013，47（9）：1729-1731.

[6] Chmollinger JC，Vonderheide RH，Hoar KM，et al. Melan oma inhibitor of apop tosis p rotein （ML-IAP）is a target for immune-mediated tumor destruction[J]. Lung Cancer，2014，46（5）： 299-304.

[7] Aita VM，Liang XH，Murty VV，et al. Cloning and genomic organization of beclin 1，a candidate tumor suppressor gene on chromosome 17q21[J]. Genomic，2012，59（1）：59-65.

[8] Klionsky DJ，Emr SD. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation[J]. Science，2011，290（1）：1717-1720.

[9] Holm E，Hildebrandt W，Kinscherf R. Low postabsorptive net protein degradation in male cancer patients：lack of sensitivity to regulatory amino acids[J]. Oncol Rep，2014， 17（3）：695-700.

[10] Marino G，Lopez-Otin C.Autophagy： Molecular mechanisms，physiological functions and relevance in human pathology[J]. Cell Mol Life Sci，2012，61（12）：1439-1454.

（收稿日期：2014-05-23）endprint

1.4 統計學處理

應用SPSS19.0統計學軟件處理結果，計數資料用χ2檢驗，采用Spearman 等級相關分析Livin、Beclin1之間的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各類卵巢組織中Livin、Beclin1表達結果

Livin 的表達陽性率：在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%），在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1的表達陽性率：在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。見表1。

3 討論

卵巢惡性腫瘤的診斷和治療都是一大難題。細胞凋亡和增殖的平衡是生物個體正常生長發育的基礎，平衡的破壞為疾病尤其是腫瘤的發生、發展提供了必要的平臺，細胞增殖過度和細胞凋亡受阻是卵巢癌形成過程中的重要機制。Livin可發現于胚胎組織中，存在和表達于胎兒發育過程中，在正常人體終末組織一般不出現。Livin細胞定位的研究仍在繼續，需要進一步證實其準確的定位。多種腫瘤研究表明，大多數腫瘤組織可出現Livin表達[4，5]，提示Livin的過表達對腫瘤細胞持續生長具有相關性。自噬（autophagy）性細胞死亡非細胞凋亡、壞死。腫瘤早期，自噬性抑制腫瘤發生，若自噬性下降將使得癌癥發展。有研究發現自噬活性程度同腫瘤的發生發展關系緊密。Livin蛋白表達上調可能在促進卵巢癌細胞異常增殖和惡性轉化中起重要作用，與腫瘤的發生、發展關系密切，因而成為研究熱點。Beclin1基因參與自噬調控，是雙等位抑癌基因，缺失可導致腫瘤轉化為惡性。多種人類惡性腫瘤中存在Beclin1表達的下調或缺失[7，8]，可以認為Beclin1是新型的腫瘤抑制基因。自噬主要作用機制為：調節細胞內過氧化物濃度，調整蛋白代謝、維護內環境、避免腫瘤產生；若自噬功能下降，會出現氧化應激，增加致瘤性突變的積累[9]。自噬現象在真核細胞正常生理病理中均存在，發揮雙重作用，細胞周圍環境改變時，影響不同[10]。因此，抑制腫瘤的生長可運用提高細胞自噬活性進行研究。

本研究表明，Livin在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%），在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。Livin、Beclin1與FIGO分期和淋巴結轉移及組織分化有關（P<0.05）。卵巢癌組織中Livin、Beclin1兩者的表達不存在顯著相關性。表明Livin的表達與癌癥密切相關，對腫瘤細胞持續生長有一定作用，與臨床其他同主題研究結果一致。同時，有研究也表明[6]Livin在卵巢癌發生、演化、浸潤和轉移中的作用也不容忽視。以上各點均可用于治療卵巢癌，Livin很可能作為卵巢癌治療高效分子靶點。Livin、Beclin1在卵巢癌組織中的表達無明顯相關性。可能與樣本量較少或者研究水平、研究設備等有關系，需要進一步研究。

綜上所述，Livin在卵巢癌發生、演化、浸潤以及轉移過程中發揮重要作用；Beclin1蛋白表達下降提示自噬活性下降，與卵巢癌的出現、發展密切相關。

[參考文獻]

[1] Anna CH，L ida M，Sills RC，et al. Expression of potentialbeta-catenin targets，cyclin D1，C-jun，C-Myc，E-cadherin，and EGFR in chemically induced hepatocellar ne2op lasms from B6C3F1 mice[J]. Toxico1 App l Pharmacol，2013，190（2）：1352145

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[5] Yagihashi A，Asanuma K，Nakamura M，et al. Detection of anti-Survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem，2013，47（9）：1729-1731.

[6] Chmollinger JC，Vonderheide RH，Hoar KM，et al. Melan oma inhibitor of apop tosis p rotein （ML-IAP）is a target for immune-mediated tumor destruction[J]. Lung Cancer，2014，46（5）： 299-304.

[7] Aita VM，Liang XH，Murty VV，et al. Cloning and genomic organization of beclin 1，a candidate tumor suppressor gene on chromosome 17q21[J]. Genomic，2012，59（1）：59-65.

[8] Klionsky DJ，Emr SD. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation[J]. Science，2011，290（1）：1717-1720.

[9] Holm E，Hildebrandt W，Kinscherf R. Low postabsorptive net protein degradation in male cancer patients：lack of sensitivity to regulatory amino acids[J]. Oncol Rep，2014， 17（3）：695-700.

[10] Marino G，Lopez-Otin C.Autophagy： Molecular mechanisms，physiological functions and relevance in human pathology[J]. Cell Mol Life Sci，2012，61（12）：1439-1454.

（收稿日期：2014-05-23）endprint

1.4 統計學處理

應用SPSS19.0統計學軟件處理結果，計數資料用χ2檢驗，采用Spearman 等級相關分析Livin、Beclin1之間的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各類卵巢組織中Livin、Beclin1表達結果

Livin 的表達陽性率：在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%），在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1的表達陽性率：在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。見表1。

3 討論

卵巢惡性腫瘤的診斷和治療都是一大難題。細胞凋亡和增殖的平衡是生物個體正常生長發育的基礎，平衡的破壞為疾病尤其是腫瘤的發生、發展提供了必要的平臺，細胞增殖過度和細胞凋亡受阻是卵巢癌形成過程中的重要機制。Livin可發現于胚胎組織中，存在和表達于胎兒發育過程中，在正常人體終末組織一般不出現。Livin細胞定位的研究仍在繼續，需要進一步證實其準確的定位。多種腫瘤研究表明，大多數腫瘤組織可出現Livin表達[4，5]，提示Livin的過表達對腫瘤細胞持續生長具有相關性。自噬（autophagy）性細胞死亡非細胞凋亡、壞死。腫瘤早期，自噬性抑制腫瘤發生，若自噬性下降將使得癌癥發展。有研究發現自噬活性程度同腫瘤的發生發展關系緊密。Livin蛋白表達上調可能在促進卵巢癌細胞異常增殖和惡性轉化中起重要作用，與腫瘤的發生、發展關系密切，因而成為研究熱點。Beclin1基因參與自噬調控，是雙等位抑癌基因，缺失可導致腫瘤轉化為惡性。多種人類惡性腫瘤中存在Beclin1表達的下調或缺失[7，8]，可以認為Beclin1是新型的腫瘤抑制基因。自噬主要作用機制為：調節細胞內過氧化物濃度，調整蛋白代謝、維護內環境、避免腫瘤產生；若自噬功能下降，會出現氧化應激，增加致瘤性突變的積累[9]。自噬現象在真核細胞正常生理病理中均存在，發揮雙重作用，細胞周圍環境改變時，影響不同[10]。因此，抑制腫瘤的生長可運用提高細胞自噬活性進行研究。

本研究表明，Livin在正常卵巢組織幾乎不表達（6.7%），在卵巢癌組織中表達最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢組織表達最高（93.3%），在卵巢癌組織中表達最低（37.1%）。Livin、Beclin1與FIGO分期和淋巴結轉移及組織分化有關（P<0.05）。卵巢癌組織中Livin、Beclin1兩者的表達不存在顯著相關性。表明Livin的表達與癌癥密切相關，對腫瘤細胞持續生長有一定作用，與臨床其他同主題研究結果一致。同時，有研究也表明[6]Livin在卵巢癌發生、演化、浸潤和轉移中的作用也不容忽視。以上各點均可用于治療卵巢癌，Livin很可能作為卵巢癌治療高效分子靶點。Livin、Beclin1在卵巢癌組織中的表達無明顯相關性。可能與樣本量較少或者研究水平、研究設備等有關系，需要進一步研究。

綜上所述，Livin在卵巢癌發生、演化、浸潤以及轉移過程中發揮重要作用；Beclin1蛋白表達下降提示自噬活性下降，與卵巢癌的出現、發展密切相關。

[參考文獻]

[1] Anna CH，L ida M，Sills RC，et al. Expression of potentialbeta-catenin targets，cyclin D1，C-jun，C-Myc，E-cadherin，and EGFR in chemically induced hepatocellar ne2op lasms from B6C3F1 mice[J]. Toxico1 App l Pharmacol，2013，190（2）：1352145

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[3] Lin JH，Deng G，Huang Q，et al. KIAP，a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Connntm，2013，279（3）：820-831.

[4] 劉文博，孔紅霞. Livin、Smac和Ki67在上皮性卵巢癌中的表達及意義[J]. 中國婦幼保健，2011，26（12）：1875-1878.

[5] Yagihashi A，Asanuma K，Nakamura M，et al. Detection of anti-Survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem，2013，47（9）：1729-1731.

[6] Chmollinger JC，Vonderheide RH，Hoar KM，et al. Melan oma inhibitor of apop tosis p rotein （ML-IAP）is a target for immune-mediated tumor destruction[J]. Lung Cancer，2014，46（5）： 299-304.

[7] Aita VM，Liang XH，Murty VV，et al. Cloning and genomic organization of beclin 1，a candidate tumor suppressor gene on chromosome 17q21[J]. Genomic，2012，59（1）：59-65.

[8] Klionsky DJ，Emr SD. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation[J]. Science，2011，290（1）：1717-1720.

[9] Holm E，Hildebrandt W，Kinscherf R. Low postabsorptive net protein degradation in male cancer patients：lack of sensitivity to regulatory amino acids[J]. Oncol Rep，2014， 17（3）：695-700.

[10] Marino G，Lopez-Otin C.Autophagy： Molecular mechanisms，physiological functions and relevance in human pathology[J]. Cell Mol Life Sci，2012，61（12）：1439-1454.

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