HPLC法測定秋水仙藥材中秋水仙堿的含量

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新疆維吾爾自治區食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004

HPLC法測定秋水仙藥材中秋水仙堿的含量

劉偉新沈曉麗蘇萊曼·哈力克

新疆維吾爾自治區食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004

目的研究秋水仙藥材中秋水仙堿的提取分離及對秋水仙堿進行質量控制。方法用0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液提取藥材。色譜柱：Waters MS C18(4.6×250mm)；流動相：甲醇-水(45∶55)；檢測波長：353nm；流速：1.0ml/min。結果能很好的將秋水仙堿分離出來，秋水仙堿在0.074～0.444mg/ml之間線性關系良好，r=0.9999；平均回收率為103.57%，RSD為4.58%。結論本文使用用乙醇做提取溶劑，無毒性;含量測定方法操作簡單，結果準確，重復性好，可用于秋水仙藥材的質量控制。

維吾爾藥材秋水仙；秋水仙堿；質量控制；含量測定

秋水仙為百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鱗莖。為維吾爾藥常用藥材，維吾爾語稱“蘇潤江”。主產于歐洲，尤盛產于地中海和黑海沿岸，非洲和西亞、南亞等地亦有分布 ，目前多從巴基斯坦進口。我國自七十年代起從國外引進種子和球莖，分別在北京、廬山、昆明等地試種。

秋水仙被收載于《衛生部藥品標準維吾爾藥分冊》，秋水仙堿作為秋水仙的主要化學成分，尚未建立含量測定方法。此次，作為國家藥品(維藥)標準提高研究課題，對原有的秋水仙標準進行了修訂、提高，同時，建立了秋水仙堿含量測定的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)，Empower工作站(美國Waters公司)；ZY012臺式電熱干燥箱；METTLER AE 200型電子分析天平(瑞士)。

1.2 材料 秋水仙堿(批號101176-201001，中國藥品生物制品檢定所)。甲醇為色譜純，水為去離子水，其余試劑均為分析純。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供試品藥材分別從伊朗、巴基斯坦進口，由新疆維吾爾藥業有限責任公司、新疆華康藥業股份有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 秋水仙提取分離 取秋水仙粉末(過3號篩)2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液(2.7→100)20ml，振蕩15min，放置24h，濾過，取續濾液，即得。

2.2 秋水仙堿的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters MS C18(4.6×250mm)；流動相：甲醇-水(45∶55)；檢測波長：353nm；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃；進樣量：10μl 。在此色譜條件下，秋水仙堿峰型較好，并且能夠較好的分離。色譜圖見圖1。

2.2.2 對照品溶液的制備 取秋水仙堿對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1ml含24μg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶瓶中，精密加入0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液(2.7→1000)20ml，振蕩15min(恒溫振蕩器；室溫；中等強度)，放置24h，過0.45微孔濾膜，即得。

2.2.4 線性關系考察 精密稱取秋水仙堿6.17mg，置25ml容量瓶中，加入乙醇適量，溶解，并定容至刻度，搖勻，作為對照儲備液。精密量取上述儲備液3、6、9、12、15、18μl，注入高效液相色譜儀，照上述色譜條件測定峰面積。以秋水仙堿濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得回歸方程Y=2446183.144X-18495.7333 (r=0.9999)，結果表明，秋水仙堿量在0.074～0.444mg/ml之間線性關系良好。

2.2.5 精密度實驗 吸取秋水仙堿對照品溶液10μl，在上述色譜條件下，連續進樣6次，結果秋水仙堿峰面積RSD值為0.15%。

2.2.6 重復性試驗 取秋水仙藥材6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品，在相同的色譜條件下，連續進6針，進樣量10μl，依次測定。結果供試品中秋水仙的平均質量分數為0.04%，RSD為0.73%。

2.2.7 穩定性試驗 分別于0、4、8、12、24h后進樣，共5次，結果秋水仙峰面積的 RSD值為0.56%。結果表明，供試品溶液室溫下24h內穩定。

2.2.8 加樣回收試驗 精密稱取已測定的秋水仙藥材供試品6份，每份0.5g，另取0.2468mg/ml秋水仙堿對照品溶液1ml，因所用秋水仙對照品含量為93.0%，實際加入量為0.2295mg/ml，按供試品溶液制備方法同法操作，進樣量10μl。結果秋水仙堿平均回收率為103.57%，RSD為4.58%。

2.2.9 專屬性試驗 將制得的供試品溶液、空白溶液和秋水仙堿對照品溶液，依次進樣，結果：空白溶液不干擾供試品中秋水仙堿的含量測定。

表1 秋水仙藥材中秋水仙堿的含量測定結果(n=2)

2.2.10 供試品測定 取不同產地、不同批次的秋水仙藥材供試品，按供試品制備方法處理，依次測定(n=10)，結果見表1。

根據測定結果，秋水仙藥材的含量定為按干燥品計算，含秋水仙堿 (C22H25NO6)不得少于0.008%，納入標準。

3 結論

秋水仙Colchicum autumnale L．的干燥鱗莖做為維吾爾常用藥材，一直被用來治療關節骨痛，肝炎，黃疸等疾病。秋水仙藥材中秋水仙堿的含量測定也曾有文章報導過，但其提取方法使用大量的三氯甲烷，毒性大，提取方式及含測方法都較為繁復。本文使用的含測方法，用乙醇做提取溶劑，無毒性，操作簡單，結果準確，可用于秋水仙藥材的質量控制。

[1]衛生部藥典委員會．衛生部藥品標準維吾爾藥分冊[S]．烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1999:721．

[2]劉勇民．維吾爾藥志下冊[M]．烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1999：588-592．

[3]何紅平．秋水仙化學成分研究[J]．化學研究與應用，1999，11(5)：509-510．

[4]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會編．中華本草(維吾爾藥卷)[M]．上海：上海科學技術出版社，2005：281-283．

國家藥品(維藥)標準提高研究課題(2010-777)。

劉偉新(1964-)，女,滿族，副主任藥師，主要從事中藥、民族藥檢驗及研究。

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1007-8517(2014)17-0010-02

2014.07.10)