白菜型冬油菜根腐病的室內藥劑篩選和藥效試驗

范祥梅，徐秉良，梁巧蘭

(甘肅農業大學 草業學院/草業生態系統教育部重點實驗室/甘肅省草業工程實驗室/中-美草地畜牧業可持續發展研究中心，甘肅 蘭州 730070)

冬油菜為甘肅省主要油料作物之一，栽培面積占全省油料作物的14.9%，產量占13.3%[1]。隨著冬油菜栽培面積的擴大，冬油菜根腐病也普遍發生，李榮峰等[2]報道，5月中下旬調查其田間發病率嚴重時達6.4%。冬油菜根腐病典型癥狀是在靠近地面處出現褐色病斑，病斑略微凹陷，植株生長不良，生長緩慢，根莖部膨大，易拔段。冬油菜根腐病的發生嚴重影響了冬油菜的品質和產量。目前，在農業生產和園林栽培中，化學防治方法是防治多種植物根腐病的重要手段[3-9]。因此，篩選新型、高效、低毒的殺菌劑，來防治冬油菜根腐病，顯得非常有必要。為此，試驗針對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌兩種病原菌，采用7種藥劑進行室內毒力測定和藥效試驗，篩選對2種病原菌抑制效果好的藥劑，旨在為冬油菜生產實踐中根腐病的防治提供一定的參考依據。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試油菜隴油9號品種，由甘肅農業大學農學院提供；采用PDA培養基和WA培養基[10]；半裸鐮刀菌(Fusariumsemitectum)、尖孢鐮刀菌(F.oxysprorum)病原菌均分離自蘭州市秦王川開發區白菜型冬油菜根腐病根組織，由甘肅農業大學病原實驗室保存備用；供試藥劑25%嘧菌酯懸浮劑購自河北省農藥化工有限公司、99%惡霉靈可濕性粉劑購自山東省煙臺鑫潤精細化工有限公司、86%十三嗎啉油劑購自浙江世佳科技有限公司、77%硫酸銅鈣可濕性粉劑購自江蘇龍燈化學有限公司、85%波爾·甲霜靈可濕性粉劑購自江蘇龍燈化學有限公司、30%苯甲·丙環唑乳油購自浙江世佳科技有限公司、25%苯醚甲環唑乳油購自華北制藥集團愛諾有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥劑對病原菌菌絲生長的影響 參照文獻[11]方法，將7種供試藥劑按推薦濃度，設5個濃度梯度，分別為：25%嘧菌酯懸浮劑200、100、50、25、12.5 μg/mL；99%惡霉靈250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL；86%十三嗎啉油劑107.5、53.75、25.875、13.438、6.718 μg/mL；77%硫酸銅鈣可濕性粉劑2 310、1 155、577.5、288.75、144.375 μg/mL；85%波爾·甲霜靈可濕性粉劑1 360、680、340、170、85 μg/mL；25%苯醚甲環唑乳油125、62.5、31.25、15.625、7.813 μg/mL；30%苯甲·丙環唑乳油60、30、15、7.5、3.75 μg/mL。取1 mL預先配制好的母液加到滅菌冷卻至50 ℃的49 mL PDA 培養基中，搖勻，倒入3個滅菌培養皿中制成設計所需濃度的含毒平板，然后用6 mm 打孔器在預先培養好的病菌菌落邊緣打取菌餅，并置于不同藥劑濃度的PDA平板上，菌絲面朝下，每皿1個菌餅，以無菌水作對照。最后將培養基置于25 ℃培養箱中培養，3 d后用十字交叉法統計菌落直徑(cm)，算出菌落生長直徑(對照菌落直徑-0.6)，并計算藥劑抑菌率。

抑菌率(%)=[(菌落直徑-0.6)-(處理菌落直徑-0.6)]/(對照菌落直徑-0.6)×100%

將藥劑濃度轉化為對數值(x)，為橫坐標，再將抑菌率轉化為機率值(y)，為縱坐標，求出線性毒力回歸方程y=a+bx，然后根據回歸方程求出各藥劑的EC50和濃度對數與幾率值之間相關系數r。

1.2.2 種子處理 在無菌操作下，取適量的供試隴油9號種子，經75%的酒精表面消毒1 min，無菌水沖洗3次后，自然晾干，后用供試藥劑相應質量濃度的藥液對晾干的冬油菜種子進行拌種，藥種比1∶30，拌種好的種子晾干備用。

1.2.3 室內藥效試驗 參考文獻[12]的方法，在預先培養好的供試病菌菌落邊緣用6 mm打孔器打取菌餅后置于配制好的WA(水瓊脂)培養基中央，25 ℃恒溫培養箱中培養5 d，將拌種好的冬油菜種子均勻排列在WA培養基菌落邊緣，每皿 20粒種子，置于25 ℃恒溫培養箱中培養 10 d，統計幼苗的發病率。每種藥劑濃度設3次重復，以不拌種的冬油菜種子為對照。

2 結果與分析

2.1 7種殺菌劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌菌絲生長的影響

7種供試殺菌劑對半裸鐮刀菌均有不同程度的抑制，且隨著濃度的增大，抑制效果也隨之增強。其中，苯甲·丙環唑抑制作用最好，在3.75～60 μg/mL時，抑制率達70.61%～85.45%；十三嗎啉、苯醚甲環唑、惡霉靈、波爾·甲霜靈抑菌效果次之，分別為29.54%～83.77%、25.37%～84.15%、23.08%～80.26%、11.95%～83.41%；硫酸銅鈣和嘧菌酯的效果最差，抑制率分別為5.53%～56.22%、39.55%～48.00%。

7種供試殺菌劑對尖孢鐮刀菌的抑制作用，以苯甲·丙環唑和苯醚甲環唑最強，抑制率為63.86%～97.65%和50.50～88.72%；其次為十三嗎啉、惡霉靈、波爾·甲霜靈，抑制率分別為44.27%～74.36%、28.36%～67.16%、12.17%～65.67%；嘧菌酯和硫酸銅鈣最差，硫酸銅鈣在濃度為144.375、288.75 μg/mL時對尖孢鐮刀菌沒有抑制作用(表1)。

表1 7種殺菌劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的抑制效果

注：同列數據后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同

2.2 7種殺菌劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的毒力比較

7種殺菌劑對半裸鐮刀菌的EC50大小順序為硫酸銅鈣>波爾·甲霜靈>嘧菌酯>惡霉靈>苯醚甲環唑>十三嗎啉>苯甲·丙環唑。其中，苯甲·丙環唑的EC50最小，為0.15 μg/mL，毒力最強；十三嗎啉、苯醚甲環唑、惡霉靈EC50次之，分別為15.67、22.61、62.41 μg/mL；波爾·甲霜靈、嘧菌酯和硫酸銅鈣的抑菌活性最弱，EC50達到了2 293.24 μg/mL。各藥劑濃度與抑菌率之間的相關系數r>0.90，表明二者呈正相關關系(表2)。

7種殺菌劑對尖孢鐮刀菌的抑制作用，除了硫酸銅鈣濃度為288.75、144.375 μg/mL與抑菌率之間不成正相關，不能得到毒力回歸方程外，其他各個藥劑濃度與其對應抑菌率之間均成正相關關系，r>0.90。苯甲·丙環唑、苯醚甲環唑、十三嗎啉的毒力最強，EC50分別為2.11、8.56、11.78 μg/mL；惡霉靈次之，為62.41 μg/mL；嘧菌酯和波爾·甲霜靈的毒力最弱，EC50最大，分別為100.70、490.80 μg/mL(表2)。

研究分析，苯甲·丙環唑、十三嗎啉、苯醚甲環唑、惡霉靈4種藥劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的EC50均較小，毒力最強。嘧菌酯、苯醚甲環唑、惡霉靈、波爾·甲霜靈、十三嗎啉，每一藥劑對2種鐮刀菌的EC50差異不大，嘧菌酯在7倍以內，苯醚甲環唑在3倍以內，惡霉靈，波爾·甲霜靈，十三嗎啉在1.5倍以內，說明此5種藥劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的毒力差異不大。

表2 7種殺菌劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的毒力比較

2.3 7種殺菌劑對冬油菜根腐病菌的室內藥效試驗

苯甲·丙環唑、苯醚甲環唑、十三嗎啉、惡霉靈4種藥劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的防效顯著高于其他3種藥劑，發病率分別比對照降低了81.82%和75.48%、79.54%和66.04%、77.27%和56.61%、72.72%和67.93%。硫酸銅鈣的防效最差、分別為27.30%和37.58%。各種藥劑對半裸鐮刀菌的防效優于尖孢鐮刀菌(表3)。

表3 7種殺菌劑對冬油菜根腐病菌的室內防效

3 討論與結論

李榮峰等[2]研究得出，甘肅省白菜型冬油菜根腐病是由半裸鐮刀菌、鏈格孢(Alternariaalternate)、尖孢鐮刀菌、黑根霉(Rhizopusnigricans)和青霉菌(Penicilliumsp.)等引起。試驗針對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌兩種病原菌，采用7種藥劑進行室內毒力測定和皿內藥效試驗。毒力測定結果表明，苯甲·丙環唑、十三嗎啉、苯醚甲環唑、惡霉靈4種藥劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的EC50均較小，毒力較強，可以用于實踐。嘧菌酯、苯醚甲環唑、惡霉靈、波爾·甲霜靈、十三嗎啉，此5種藥劑對兩種鐮刀菌的EC50差異不大，說明2種鐮刀菌對這5種藥劑的敏感性相似，在實踐防治此兩種鐮刀菌病害時，可互相借鑒施藥方案[13]。室內藥效試驗結果表明，苯甲·丙環唑、苯醚甲環唑、十三嗎啉、惡霉靈4種藥劑對半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌的防效顯著優于其他3種藥劑，與室內毒力測定的結果基本一致。

硫酸銅鈣為144.375和288.75 μg/mL時，對尖孢鐮刀菌有促進生長的作用，此結果與趙春莉等[14]報道的結論有差異，其原因需進一步研究。嘧菌酯為25、50、100 μg/mL時，濃度處理間對半裸鐮刀菌的抑制率沒有顯著差異，這與潘月敏等[15]報道的當嘧菌酯濃度在1～200 μg/mL時，各濃度處理間抑制效果無明顯差異的結論相一致。嘧菌酯為甲氧基丙烯酸酯類藥劑，是線粒體呼吸抑制劑，試驗中，其對2種鐮刀菌的敏感性較差，是因為在離體條件下，其無法抑制病原菌的旁路代謝途徑的緣故[13]，室內藥效試驗表現較室內毒力測定時好，其防效適中，與苯甲·丙環唑、十三嗎啉、苯醚甲環唑、惡霉靈4種藥劑的防效相差不是很大。惡霉靈[16]為內吸性好、低毒、無公害殺菌劑和植物生長調節劑，在離體條件下沒有體現出其對植物的生長調節作用，在大田中會體現出更加好的防治效果。單一殺菌劑使用容易使病菌產生抗藥性，有報道稱，苯醚甲環唑與多菌靈復配[14]，惡霉靈與多菌靈復配[17]，對鐮刀菌抑制效果有明顯的增效作用。因此，在今后的田間防治中，應該使用不同作用機理的殺菌劑進行復配防治，達到高效、環保、經濟的理想效果。半裸鐮刀菌和尖孢鐮刀菌都是土壤習居菌[18-19]，能長期存活于土壤中，它們可侵染許多經濟作物和牧草，如蠶豆[12]、苜蓿[20]、沙打旺等[21]，試驗只是進行了各種藥劑對離體條件下2種鐮刀菌菌絲生長的抑制效果和室內藥效試驗，田間防治效果還有待于進一步探討。

參考文獻:

[1] 蒲金涌，姚小英，鄧掙鏞，等．氣候變暖對甘肅冬油菜 (BrassicacompestrisL.)種植的影響[J]．作物學報，2006，32(9)：1397-1401．

[2] 李榮峰，徐秉良，梁巧蘭，等．白菜型根腐病病原鑒定及室內毒力測定[J]．甘肅農業大學學報，2012，34(2)：98-104．

[3] 羅光宏，陳葉，王振，等．黃芪根腐病發生危害與防治[J]．植物保護，2005，31(4)：74-76．

[4] 趙振忠，溫鳳英，國占忠．甜菜根腐病發生與防治[J]．中國糖料，2001(1)：58-59．

[5] 朱秀波．大豆根腐病的防治[J]．農村實用科技信息，2012(6)：52-53．

[6] 黃向東，薛冬，王書言．牡丹土傳病害及其研究進展[J]．中國農學通報，2012，28(28)：419-422．

[7] 趙秀娟，王樹桐，張鳳巧，等．草莓根腐病研究進展[J]．中國農學通報，2006，22(8)：33-34．

[8] 劉海波，王永雄．紫花苜蓿根腐病研究進展[J]．草原與草坪，2006(3)：3-6．

[9] 馬從，許正強，姚拓，等．蘭州市五泉山公園草本植物真菌病害調查及防治建議[J]．草原與草坪，2010,30(5)：41-45．

[10] 方中達．植病研究方法(第3版)[M]．北京：中國農業出版社，1998．

[11] 黃彰欣.植物化學保護實驗指導[M]．北京：中國農業出版社，1993．

[12] 侯思雯．甘肅高寒陰濕地區蠶豆苗期根腐病的研究[D]．蘭州：甘肅農業大學，2011．

[13] 嚴清平，袁善奎，王曉軍，等．5種鏈格孢屬植物病原真菌對10種殺菌劑的敏感性比較[J]．植物保護，2008，34(2)：124-127．

[14] 趙春莉，李金英．黃花根腐病菌的室內藥劑篩選[J]．北方園藝，2012(19)：155-156．

[15] 潘月敏，高智謀，汪敬鑫，等．幾種殺菌劑復配對棉花紅腐病菌的聯合毒力研究[J]．棉花學報，2007，19(2)：93-97．

[16] 宋寶安，黃劍.惡霉靈合成進展[J]．農藥，2001，40(4)：13-14．

[17] 王獻慧，梁志懷，魏林，等．硫磺多菌靈和惡霉靈不同比例混配對蓮藕腐敗病菌的室內毒力測定[J]．湖南農業科學，2012(23)：71-73．

[18] 胡會然，孫英成，陳放，等．麻瘋樹枯萎病病原菌分離鑒定及室內藥劑篩選[J]．四川大學學報，2009，46(6)：1823-1827．

[19] 張俊忠，馬凡茹，陳秀蓉．東祁連山高寒草地土壤3種鐮孢菌生物學特性的研究[J]．草原與草坪，2008(1)：41-48．

[20] 李敏權．苜蓿根和根頸腐爛病病原及種質抗病性研究[D]．蘭州：甘肅農業大學，2002．

[21] 李彥忠．沙打旺黃萎根腐病的研究[D]．蘭州：蘭州大學，2007．