兩種血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果分析

林棟 崔四平 蘇婉蘭 陳寶嬋 葉柱江

[摘要] 目的 探討單采血小板與混合血小板在血液采集制備過程中細(xì)菌污染的危險(xiǎn)程度，為血小板的采集制備過程中改良工藝，提高輸血安全性提供可靠數(shù)據(jù)。 方法 采用生物梅里埃公司生產(chǎn)的BaeT/Alert 3D 全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀及應(yīng)用需氧瓶（BPA Culture Bottle）、厭氧瓶（BPN Culture Bottle）對(duì)5210例單采血小板，1653例混合血小板進(jìn)行了細(xì)菌培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性者轉(zhuǎn)種，轉(zhuǎn)種陽(yáng)性者進(jìn)行細(xì)菌鑒定。 結(jié)果 在5210例單采血小板細(xì)菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽(yáng)性6例，陽(yáng)性率為1.15‰；1653例混合血小板中細(xì)菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽(yáng)性10例，陽(yáng)性率6.05‰。 結(jié)論 混合血小板細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率（6.05‰）高于單采血小板（1.15‰），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；血小板細(xì)菌污染情況仍然嚴(yán)峻，應(yīng)引起注意。

[關(guān)鍵詞] 單采血小板；濃縮血小板；混合血小板；細(xì)菌污染；細(xì)菌培養(yǎng)

[中圖分類號(hào)] R446.5???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B???[文章編號(hào)] 2095-0616（2014）11-119-03

Analysis of bacterial culture results of two types of platelet products

LIN?Dong1??CUI?Siping1??SU?Wanlan1??CHEN?Baochan2??YE?Zhujiang1

1.Dongguan Central Blood Station,Dongguan 523930,China;2.Department of Blood Transfusion,Dongguan Donghua Hospital, Dongguan 523110,China

[Abstract] Objective To investigate the criticality of bacterial pollution in the blood collection and preparation process of single donor platelets and mixed platelets in order to provide reliable data for improving the technology in the collection and preparation process of platelets and improving the blood transfusion safety. Methods The BaeT/Alert 3D Full-Automatic Bacterial Culture System produced by BioMérieux and the BPA Culture Bottle and BPN Culture Bottle were used for the bacterial culture of 5210 cases of single donor platelets and 1653 cases of mixed platelets.The samples showing g positive bacterial culture results received subcultivation and the subcultivated sample showing positive results received bacterial identification. Results Of the 5210 cases of single donor platelets,bacterial culture confirmed 6 positive cases,with the positive rate of 1.15‰.Of the 1653 cases of mixed platelets,bacterial culture confirmed 10 positive cases,with the positive rate of 6.05‰. Conclusion The positive bacterial culture rate of mixed platelets (6.05‰)is higher than that of the single donor platelets (1.15‰), with statistically significant difference(P＜0.01).The bacterial pollution situation of platelets is still severe and needs attention.

[Key words] Single donor platelets;Concentrated platelet;Mixed platelet;Bacterial pollution;Bacterial culture

血液制品是細(xì)菌生長(zhǎng)的天然培養(yǎng)基，尤其是血小板制品是在（22±2）℃條件下水平振蕩保存5d，如果血小板采集制備過程中有少數(shù)細(xì)菌污染，它也能夠快速在血小板制品中繁殖并造成血液污染。隨著社會(huì)的發(fā)展，醫(yī)療水平的提高，臨床輸血安全也受到重視。目前雖然嚴(yán)格進(jìn)行獻(xiàn)血者的篩選，提高了酶免的檢測(cè)水平，增加了核酸檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，但血液（特別是血小板）的細(xì)菌污染問題依然存在，因此國(guó)內(nèi)部分血站對(duì)血小板制品進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，以減少細(xì)菌污染的血液用于臨床。本血站于2003年以來就對(duì)血小板制品進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，現(xiàn)對(duì)我站2011～2012年血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1?材料與方法

1.1?標(biāo)本來源

2011年1月～2012年12月，東莞市無償捐獻(xiàn)的單采血小板5210例；利用全血制備的混合血小板1653例。

1.1.1?留取單采血小板的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本?根據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的血小板采集要求，對(duì)無償獻(xiàn)血者進(jìn)行體格檢查、血常規(guī)、乙肝表面抗原、轉(zhuǎn)氨酶等項(xiàng)目快速檢查合格后，用血細(xì)胞分離機(jī)進(jìn)行血小板采集，將最先采集的15mL血液流進(jìn)標(biāo)本小袋，采集完畢后血小板放于（22±2）℃水平振蕩條件下保存24h后，留取8～12mL培養(yǎng)樣本。

1.1.2?留取混合血小板的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本?用一次性三聯(lián)采血袋（300mL、400mL）采集的全血，在采集后6h內(nèi)用富含血小板血漿法（PRP）制備濃縮血小板，制備完畢后血小板放于（22±2）℃條件下水平振蕩保存24h。將各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果合格的5~7袋血型相同的濃縮血小板，使用無菌接駁機(jī)進(jìn)行接駁，制備成一個(gè)治療量的混合血小板，留取（8～12）mL培養(yǎng)樣本。

1.2?主要儀器與試劑

BaeT/Alert 3D全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀、需氧瓶、厭氧瓶（美國(guó)生物梅里埃公司），生物安全柜（造鑫企業(yè)有公司），Cryofuge6000i 離心機(jī)（德國(guó)Heraeus），XHZ-IB血小板恒溫振蕩保存箱（蘇州市醫(yī)用儀器廠），Msc+血細(xì)胞分離機(jī)，Amicus血細(xì)胞分離機(jī)，Trima Accel血細(xì)胞分離機(jī)，Compomat G4血液成分分離機(jī)（德國(guó)費(fèi)森尤斯），LMB血液成分分離機(jī)（德國(guó)），TSCD無菌接駁機(jī)（日本泰爾茂），配套使用一次性全封閉管道系統(tǒng)（血小板耗材），一次性使用注射器等。

1.3?方法

將單采血小板及混合血小板留取的培養(yǎng)標(biāo)本在生物安全柜上進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，先接種厭氧瓶，后接種需氧瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶分別接種4mL標(biāo)本，放進(jìn)BacT/Alert 3D全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，如有陽(yáng)性報(bào)警顯示時(shí)，抽取陽(yáng)性瓶培養(yǎng)液8mL進(jìn)行轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，仍為陽(yáng)性者，進(jìn)行細(xì)菌種類鑒定，細(xì)菌鑒定由東莞市虎門醫(yī)院檢驗(yàn)科完成；若培養(yǎng)至第7天還沒有陽(yáng)性報(bào)警顯示則為陰性。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.3統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?匯集血小板與單采血小板細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果

5210例單采血小板細(xì)菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽(yáng)性6例，陽(yáng)性率為1.15‰；在1653例混合血小板中細(xì)菌培養(yǎng)經(jīng)確定陽(yáng)性10例，陽(yáng)性率6.05‰。混合血小板的細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率高于單采血小板，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1??匯集血小板與單采血小板細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果

血小板制品類型 n 陽(yáng)性數(shù)（n） 陽(yáng)性率（‰）

單采血小板 5210 6 1.15

混合血小板 1653 10 6.05

注：x2=10.84，P＜0.01

2.2?16例血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性的細(xì)菌特異性分布

血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性特異性主要是以革蘭陽(yáng)性桿菌（50.00%）和葡萄球菌屬（25.00%）為主，還少量的單胞菌（12.50%）、霉菌（6.12%）、革蘭氏陰性桿菌（6.12%）。詳見表2。

表2??血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性的細(xì)菌特異性分布

血小板制品類型 陽(yáng)性數(shù)（n） 細(xì)菌特異性

單采血小板 2 革蘭陽(yáng)性桿菌，末檢出特異性

1 表面葡萄球菌

1 金黃色葡萄球菌

1 松鼠葡萄球菌

1 曲霉菌

混合血小板 6 革蘭陽(yáng)性桿菌，末檢出特異性

1 革蘭陰性桿菌，末檢出特異性

1 表面葡萄球菌

1 少動(dòng)鞘氨醇桿菌

1 泡囊短波單胞菌

2.3?16例血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性的報(bào)警反應(yīng)性與時(shí)間關(guān)系

有68.75%在培養(yǎng)24h內(nèi)報(bào)警有反應(yīng)性，有12.50%在培養(yǎng)48h內(nèi)報(bào)警有反應(yīng)性。詳見表3。

表3??血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性的初篩反應(yīng)性時(shí)間分布

培養(yǎng)時(shí)間 陽(yáng)性數(shù)（n） 陽(yáng)性率（%）

24h 11 68.75

48h 2 12.50

72h 1 6.25

＞72h 2 12.50

合計(jì) 16 100.00

3?討論

一個(gè)治療量的混合血小板由5~7袋的濃縮血小板通過無菌接駁機(jī)匯集在同一血袋而成；一個(gè)治療量的單采血小板是使用血細(xì)胞分離機(jī)在全封閉的條件下自動(dòng)將獻(xiàn)血者血液中的血小板分離并懸浮一定量血漿內(nèi)的單采成分血。從表1我們可以看出，混合血小板的細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率高于單采血小板，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），混合血小板細(xì)菌污染的危險(xiǎn)程度高于單采血小板。筆者認(rèn)為原因有四：（1）供者的數(shù)量不同。我們從兩種血液制品的定義中可以看出，混合血小板供者的數(shù)量5倍于單采血小板，供者越多污染機(jī)會(huì)越大。（2）制備過程的不同。混合血小板從全血采集到分離成濃縮血小板，再匯集成一個(gè)治療量的混合血小板，中間經(jīng)過多次的離心與接駁，大大增加細(xì)菌污染的機(jī)會(huì)。（3）采血的環(huán)境不同。全血的采集主要是在采血車上完成，由于采血車上的環(huán)境衛(wèi)生與室內(nèi)采血室的環(huán)境衛(wèi)生差異，使混合血小板受污染的機(jī)會(huì)加大。（4）白細(xì)胞的殘留量不同。血細(xì)胞分離機(jī)的采集血小板時(shí)有自動(dòng)去除白細(xì)胞的功能，使單采血小板的白細(xì)胞殘留量達(dá)到一個(gè)比較低的水平，減少被污染的機(jī)會(huì)。

國(guó)外的一些研究表明單采血小板的細(xì)菌污染為1∶1000～1∶3000及手工混合血小板。

1∶300～1∶1000的有關(guān)細(xì)菌污染的報(bào)道[1-4]；在國(guó)內(nèi)血小板細(xì)菌污染的問題也引起很多輸血界專家們的關(guān)注，并對(duì)血小板采集制備過程中的關(guān)鍵控制點(diǎn)采取一些預(yù)防措施[5-8]；而在細(xì)菌培養(yǎng)過程中造成假陽(yáng)性的原因也進(jìn)行分析與探討[9-11]。2011年1月~2012年12月，我站單采血小板細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率1.15‰，混合血小板細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率6.05‰，血小板制品總細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率為2.33‰，相比2007年的報(bào)道的4.7‰[6]下降了一半，但比國(guó)外報(bào)道的相比也高出很多，血小板制品細(xì)菌污染問題仍然嚴(yán)峻，特別是混合血小板。國(guó)外相關(guān)報(bào)道，血小板細(xì)菌污染鑒定出的微生物包括葡萄球菌屬（42%），大腸埃希菌（9%），棒桿菌屬（8%），沙門氏菌（9%），鏈球菌屬（12%），沙雷氏菌（8%），腸科細(xì)菌（7%）和其他微生物（4%）；國(guó)內(nèi)有關(guān)報(bào)道大約56%的細(xì)菌經(jīng)鑒定為革蘭陽(yáng)性菌，大多為需氧菌[7]。從表2可以得知，本站檢出的細(xì)菌以革蘭陽(yáng)性桿菌（50%）和葡萄球菌屬（25%）為主，還少量的單胞菌（12.5%）、霉菌（6.12%）、革蘭陰性桿菌（6.12%），這基本上與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致。血小板制品細(xì)菌污染的來源既有內(nèi)源性的，也有外源性的。內(nèi)源性的污染主要來自菌血癥狀態(tài)的獻(xiàn)血者、采血時(shí)皮膚表面細(xì)菌或帶有細(xì)菌的皮膚碎片進(jìn)入血袋。為防止內(nèi)源性的血小板細(xì)菌污染只能通過加強(qiáng)體格檢查（尤其是穿刺部位皮膚檢查）、健康征詢等方式排除不合格的獻(xiàn)血者，減少細(xì)菌污染。而外源性的血小板細(xì)菌污染可以從采血環(huán)境空氣消毒、工作人員個(gè)人衛(wèi)生、穿刺處皮膚消毒、儀器耗材，去除最先采集的15mL血液，改良制備工藝等關(guān)鍵點(diǎn)來減少細(xì)菌污染[12]。

從表3中顯示，血小板制品細(xì)菌培養(yǎng)在48h內(nèi)出現(xiàn)初篩反應(yīng)性報(bào)警達(dá)80.25%，即大部分血小板制品細(xì)菌污染可以在48h內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，這樣可以保證絕大部分細(xì)菌污染的血小板不能發(fā)往臨床。一旦經(jīng)培養(yǎng)陽(yáng)性的血小板發(fā)往臨床，只能緊急通知臨床輸血科的收回血液制品方法來彌補(bǔ)，如果血小板已輸注，應(yīng)加強(qiáng)觀察，提前使用抗菌藥，及時(shí)處理可能發(fā)生的細(xì)菌性輸血反應(yīng)。

綜上所述，混合血小板比單采血小板細(xì)菌污染危險(xiǎn)程度高，但是隨著臨床上對(duì)血小板需求日益增長(zhǎng)，單采血小板因單采耗材昂貴、獻(xiàn)血者健康要求高、獻(xiàn)血地點(diǎn)不夠靈活、獻(xiàn)血時(shí)間長(zhǎng)等各種因素，以致臨床單采血小板的供應(yīng)比較緊張。混合血小板制備使用是對(duì)單采血小板在臨床上緊張供應(yīng)局面的有效補(bǔ)充，大大有效緩解單采血小板供應(yīng)壓力[13]。但它的細(xì)菌污染問題也要引起注意，建議有條件的血站應(yīng)對(duì)血小板制品進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，減少細(xì)菌性輸血反應(yīng)，保證臨床用血安全。

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（收稿日期：2014-03-09）