兩種血小板制品細菌培養結果分析

林棟 崔四平 蘇婉蘭 陳寶嬋 葉柱江

[摘要] 目的 探討單采血小板與混合血小板在血液采集制備過程中細菌污染的危險程度，為血小板的采集制備過程中改良工藝，提高輸血安全性提供可靠數據。 方法 采用生物梅里埃公司生產的BaeT/Alert 3D 全自動細菌培養儀及應用需氧瓶（BPA Culture Bottle）、厭氧瓶（BPN Culture Bottle）對5210例單采血小板，1653例混合血小板進行了細菌培養，細菌培養陽性者轉種，轉種陽性者進行細菌鑒定。 結果 在5210例單采血小板細菌培養經確定陽性6例，陽性率為1.15‰；1653例混合血小板中細菌培養經確定陽性10例，陽性率6.05‰。 結論 混合血小板細菌培養陽性率（6.05‰）高于單采血小板（1.15‰），兩者比較差異有統計學意義（P＜0.01）；血小板細菌污染情況仍然嚴峻，應引起注意。

[關鍵詞] 單采血小板；濃縮血小板；混合血小板；細菌污染；細菌培養

[中圖分類號] R446.5???[文獻標識碼] B???[文章編號] 2095-0616（2014）11-119-03

Analysis of bacterial culture results of two types of platelet products

LIN?Dong1??CUI?Siping1??SU?Wanlan1??CHEN?Baochan2??YE?Zhujiang1

1.Dongguan Central Blood Station,Dongguan 523930,China;2.Department of Blood Transfusion,Dongguan Donghua Hospital, Dongguan 523110,China

[Abstract] Objective To investigate the criticality of bacterial pollution in the blood collection and preparation process of single donor platelets and mixed platelets in order to provide reliable data for improving the technology in the collection and preparation process of platelets and improving the blood transfusion safety. Methods The BaeT/Alert 3D Full-Automatic Bacterial Culture System produced by BioMérieux and the BPA Culture Bottle and BPN Culture Bottle were used for the bacterial culture of 5210 cases of single donor platelets and 1653 cases of mixed platelets.The samples showing g positive bacterial culture results received subcultivation and the subcultivated sample showing positive results received bacterial identification. Results Of the 5210 cases of single donor platelets,bacterial culture confirmed 6 positive cases,with the positive rate of 1.15‰.Of the 1653 cases of mixed platelets,bacterial culture confirmed 10 positive cases,with the positive rate of 6.05‰. Conclusion The positive bacterial culture rate of mixed platelets (6.05‰)is higher than that of the single donor platelets (1.15‰), with statistically significant difference(P＜0.01).The bacterial pollution situation of platelets is still severe and needs attention.

[Key words] Single donor platelets;Concentrated platelet;Mixed platelet;Bacterial pollution;Bacterial culture

血液制品是細菌生長的天然培養基，尤其是血小板制品是在（22±2）℃條件下水平振蕩保存5d，如果血小板采集制備過程中有少數細菌污染，它也能夠快速在血小板制品中繁殖并造成血液污染。隨著社會的發展，醫療水平的提高，臨床輸血安全也受到重視。目前雖然嚴格進行獻血者的篩選，提高了酶免的檢測水平，增加了核酸檢測技術的應用，但血液（特別是血小板）的細菌污染問題依然存在，因此國內部分血站對血小板制品進行細菌培養，以減少細菌污染的血液用于臨床。本血站于2003年以來就對血小板制品進行細菌培養，現對我站2011～2012年血小板制品細菌培養結果進行分析，報道如下。

1?材料與方法

1.1?標本來源

2011年1月～2012年12月，東莞市無償捐獻的單采血小板5210例；利用全血制備的混合血小板1653例。

1.1.1?留取單采血小板的細菌培養標本?根據《獻血者健康檢查要求》的血小板采集要求，對無償獻血者進行體格檢查、血常規、乙肝表面抗原、轉氨酶等項目快速檢查合格后，用血細胞分離機進行血小板采集，將最先采集的15mL血液流進標本小袋，采集完畢后血小板放于（22±2）℃水平振蕩條件下保存24h后，留取8～12mL培養樣本。

1.1.2?留取混合血小板的細菌培養標本?用一次性三聯采血袋（300mL、400mL）采集的全血，在采集后6h內用富含血小板血漿法（PRP）制備濃縮血小板，制備完畢后血小板放于（22±2）℃條件下水平振蕩保存24h。將各項檢驗結果合格的5~7袋血型相同的濃縮血小板，使用無菌接駁機進行接駁，制備成一個治療量的混合血小板，留取（8～12）mL培養樣本。

1.2?主要儀器與試劑

BaeT/Alert 3D全自動細菌培養儀、需氧瓶、厭氧瓶（美國生物梅里埃公司），生物安全柜（造鑫企業有公司），Cryofuge6000i 離心機（德國Heraeus），XHZ-IB血小板恒溫振蕩保存箱（蘇州市醫用儀器廠），Msc+血細胞分離機，Amicus血細胞分離機，Trima Accel血細胞分離機，Compomat G4血液成分分離機（德國費森尤斯），LMB血液成分分離機（德國），TSCD無菌接駁機（日本泰爾茂），配套使用一次性全封閉管道系統（血小板耗材），一次性使用注射器等。

1.3?方法

將單采血小板及混合血小板留取的培養標本在生物安全柜上進行細菌培養，嚴格執行無菌操作，先接種厭氧瓶，后接種需氧瓶，每個培養瓶分別接種4mL標本，放進BacT/Alert 3D全自動細菌培養儀進行細菌培養，在培養過程中，如有陽性報警顯示時，抽取陽性瓶培養液8mL進行轉種培養，仍為陽性者，進行細菌種類鑒定，細菌鑒定由東莞市虎門醫院檢驗科完成；若培養至第7天還沒有陽性報警顯示則為陰性。

1.4?統計學處理

采用SPSS17.3統計軟件進行統計學分析，計數資料用率表示，采用x2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2?結果

2.1?匯集血小板與單采血小板細菌培養結果

5210例單采血小板細菌培養經確定陽性6例，陽性率為1.15‰；在1653例混合血小板中細菌培養經確定陽性10例，陽性率6.05‰。混合血小板的細菌培養陽性率高于單采血小板，兩者比較差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1??匯集血小板與單采血小板細菌培養結果

血小板制品類型 n 陽性數（n） 陽性率（‰）

單采血小板 5210 6 1.15

混合血小板 1653 10 6.05

注：x2=10.84，P＜0.01

2.2?16例血小板制品細菌培養陽性的細菌特異性分布

血小板制品細菌培養陽性特異性主要是以革蘭陽性桿菌（50.00%）和葡萄球菌屬（25.00%）為主，還少量的單胞菌（12.50%）、霉菌（6.12%）、革蘭氏陰性桿菌（6.12%）。詳見表2。

表2??血小板制品細菌培養陽性的細菌特異性分布

血小板制品類型 陽性數（n） 細菌特異性

單采血小板 2 革蘭陽性桿菌，末檢出特異性

1 表面葡萄球菌

1 金黃色葡萄球菌

1 松鼠葡萄球菌

1 曲霉菌

混合血小板 6 革蘭陽性桿菌，末檢出特異性

1 革蘭陰性桿菌，末檢出特異性

1 表面葡萄球菌

1 少動鞘氨醇桿菌

1 泡囊短波單胞菌

2.3?16例血小板制品細菌培養陽性的報警反應性與時間關系

有68.75%在培養24h內報警有反應性，有12.50%在培養48h內報警有反應性。詳見表3。

表3??血小板制品細菌培養陽性的初篩反應性時間分布

培養時間 陽性數（n） 陽性率（%）

24h 11 68.75

48h 2 12.50

72h 1 6.25

＞72h 2 12.50

合計 16 100.00

3?討論

一個治療量的混合血小板由5~7袋的濃縮血小板通過無菌接駁機匯集在同一血袋而成；一個治療量的單采血小板是使用血細胞分離機在全封閉的條件下自動將獻血者血液中的血小板分離并懸浮一定量血漿內的單采成分血。從表1我們可以看出，混合血小板的細菌培養陽性率高于單采血小板，兩者比較差異有統計學意義（P＜0.01），混合血小板細菌污染的危險程度高于單采血小板。筆者認為原因有四：（1）供者的數量不同。我們從兩種血液制品的定義中可以看出，混合血小板供者的數量5倍于單采血小板，供者越多污染機會越大。（2）制備過程的不同。混合血小板從全血采集到分離成濃縮血小板，再匯集成一個治療量的混合血小板，中間經過多次的離心與接駁，大大增加細菌污染的機會。（3）采血的環境不同。全血的采集主要是在采血車上完成，由于采血車上的環境衛生與室內采血室的環境衛生差異，使混合血小板受污染的機會加大。（4）白細胞的殘留量不同。血細胞分離機的采集血小板時有自動去除白細胞的功能，使單采血小板的白細胞殘留量達到一個比較低的水平，減少被污染的機會。

國外的一些研究表明單采血小板的細菌污染為1∶1000～1∶3000及手工混合血小板。

1∶300～1∶1000的有關細菌污染的報道[1-4]；在國內血小板細菌污染的問題也引起很多輸血界專家們的關注，并對血小板采集制備過程中的關鍵控制點采取一些預防措施[5-8]；而在細菌培養過程中造成假陽性的原因也進行分析與探討[9-11]。2011年1月~2012年12月，我站單采血小板細菌培養陽性率1.15‰，混合血小板細菌培養陽性率6.05‰，血小板制品總細菌培養陽性率為2.33‰，相比2007年的報道的4.7‰[6]下降了一半，但比國外報道的相比也高出很多，血小板制品細菌污染問題仍然嚴峻，特別是混合血小板。國外相關報道，血小板細菌污染鑒定出的微生物包括葡萄球菌屬（42%），大腸埃希菌（9%），棒桿菌屬（8%），沙門氏菌（9%），鏈球菌屬（12%），沙雷氏菌（8%），腸科細菌（7%）和其他微生物（4%）；國內有關報道大約56%的細菌經鑒定為革蘭陽性菌，大多為需氧菌[7]。從表2可以得知，本站檢出的細菌以革蘭陽性桿菌（50%）和葡萄球菌屬（25%）為主，還少量的單胞菌（12.5%）、霉菌（6.12%）、革蘭陰性桿菌（6.12%），這基本上與國內外報道一致。血小板制品細菌污染的來源既有內源性的，也有外源性的。內源性的污染主要來自菌血癥狀態的獻血者、采血時皮膚表面細菌或帶有細菌的皮膚碎片進入血袋。為防止內源性的血小板細菌污染只能通過加強體格檢查（尤其是穿刺部位皮膚檢查）、健康征詢等方式排除不合格的獻血者，減少細菌污染。而外源性的血小板細菌污染可以從采血環境空氣消毒、工作人員個人衛生、穿刺處皮膚消毒、儀器耗材，去除最先采集的15mL血液，改良制備工藝等關鍵點來減少細菌污染[12]。

從表3中顯示，血小板制品細菌培養在48h內出現初篩反應性報警達80.25%，即大部分血小板制品細菌污染可以在48h內被發現，這樣可以保證絕大部分細菌污染的血小板不能發往臨床。一旦經培養陽性的血小板發往臨床，只能緊急通知臨床輸血科的收回血液制品方法來彌補，如果血小板已輸注，應加強觀察，提前使用抗菌藥，及時處理可能發生的細菌性輸血反應。

綜上所述，混合血小板比單采血小板細菌污染危險程度高，但是隨著臨床上對血小板需求日益增長，單采血小板因單采耗材昂貴、獻血者健康要求高、獻血地點不夠靈活、獻血時間長等各種因素，以致臨床單采血小板的供應比較緊張。混合血小板制備使用是對單采血小板在臨床上緊張供應局面的有效補充，大大有效緩解單采血小板供應壓力[13]。但它的細菌污染問題也要引起注意，建議有條件的血站應對血小板制品進行細菌培養，減少細菌性輸血反應，保證臨床用血安全。

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（收稿日期：2014-03-09）