冠心病猝死患者心肌組織纖維連接蛋白及內皮素的表達

鄧建平 劉海燕 楊 剛 周振宇 趙景宏

(川北醫學院第二臨床醫學院 南充市中心醫院心內科，四川 南充 637000)

當冠脈血流供應不能滿足心肌的需求即可導致心肌缺血缺氧，心肌缺血可由冠脈血流量的減少和心肌對氧的需求增加而引起〔1〕。冠心病屬于動脈硬化性疾病，嚴重者可以引起心肌梗死、心律失常及心力衰竭等，危及生命。冠狀動脈造影已經成為臨床冠心病診斷的金標準，但是因其屬于有創檢查，而且價格昂貴。關于纖維連接蛋白(FN)、內皮素(ET)與冠心病的相關性研究報道較少。本研究探討冠心病猝死患者心肌組織中FN、ET表達情況。

1 材料與方法

1.1對象 選擇2008年1月至2012年1月我院150份冠狀動脈組織切片標本，將冠狀動脈分為正常血管組、穩定斑塊組和不穩定斑塊組。其中，穩定斑塊組50例，男34例，女16例，年齡(61.7±10.9)歲；不穩定斑塊組50例，男30例，女20例，年齡(59.7±8.8)歲；正常血管組50例，男32例，女18例，年齡(60.5±9.7)歲；3組研究對象一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2檢測方法

1.2.1標本采集 3組患者心臟標本均沿血流方向剖開，分別于室間隔、左心前壁、右心前壁、心尖取一塊心肌組織，10%甲醛溶液固定，常規脫水，石蠟包埋、切片(厚4～5 μm)，為防止組織脫片，采用防脫片膠將組織切片貼附載玻片上，60℃烘片30 min固定。分別進行HE染色和免疫組化染色。

1.2.2免疫組織檢測法〔2〕采用MaxVision免疫組化方法對比檢測FN、ET，即用型快捷MaxVisionTM 廣譜試劑盒、ET 兔抗人多克隆抗體、FN 兔抗人多克隆抗體、液體DAB 顯色試劑盒均購自福建邁新公司。具體步驟參照邁新公司試劑盒說明書進行嚴格操作。采用試劑公司提供的陽性對照片進行對照，均以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.2.3陽性表達圖像分析〔3〕對各組切片免疫組織化學的染色情況先在Olympus BX41 顯微鏡下觀察，采用Olympus圖像分析軟件(日本Olympus有限公司)對所有切片進行圖像分析，對FN、ET免疫組織化學染色陽性反應產物進行定位半定量檢測。每個部位的陽性反應區域隨機選取5個視野，測量陽性反應物區域、平均吸光度、累積吸光度，然后取其平均值。

2 結 果

正常心肌組FN、ET均呈陰性表達；穩定斑塊組FN呈散在、單個細胞性胞質棕褐色著色，ET呈局灶性心肌細胞胞漿陽性表達；不穩定斑塊組Fn呈大片狀心肌細胞胞質棕褐色著色，ET呈血管平滑肌、血管內皮及心肌細胞胞漿呈棕色陽性著色。3組患者心肌中ET、FN陽性反應物累積吸光度值比較差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組心肌組織ET、FN染色圖像結果比較

3 討 論

缺血性心肌病是在嚴重多支冠狀動脈病變基礎上發生多發或復發性心肌梗死；或在慢性心肌缺血、營養障礙的情況下，心肌雖仍能維持組織生存，但左心室功能卻持續地處于低下狀態之中，冠狀動脈供血恢復后左心室功能卻可部分或全部恢復，臨床稱之為心肌冬眠；而冠狀動脈血流已恢復但心肌功能失常仍暫時存在，需要一段時間方能恢復，則稱之為心肌頓抑〔4〕。缺血性心肌病可導致散在或彌漫性心肌纖維化及心肌間質膠原沉積增加等。心肌缺血早期心肌細胞及其組織結構在形態學上無明顯改變,常規方法檢查不到,冠狀動脈造影又屬于有創檢查，而且價格昂貴。

ET具有強烈地收縮冠狀動脈、腎小動脈;刺激心鈉素的釋放，提高全身血壓;抑制腎素釋放等作用〔5〕。研究證明ET是機體產生的一種內源性致損傷因子，其合成或釋放增加可致冠狀動脈痙攣，加重心肌缺血壞死。當較大的冠狀動脈發生粥樣硬化導致管腔堵塞時，使得局部血流阻力明顯增加，阻塞處遠端的小動脈血管床調節達到最大限度的擴張，以減少血流阻力保證有足夠的血流量，如該處冠狀動脈血管擴張儲備已近極限，當心肌耗氧量增加時，通過冠狀動脈的擴張增加血流量的能力非常有限，經上述多種機制反復調控均不能滿足心臟血氧供應以致產生心肌缺血〔6，7〕。冠狀動脈痙攣常發生于有粥樣硬化病變狹窄基礎上，少數可發生于形態正常的冠狀動脈〔8〕。內皮細胞功能障礙可早于臨床出現冠心病癥狀或明顯冠狀動脈狹窄病變之前數年即存在。內皮細胞功能完整的冠狀動脈，血小板激活后釋放產物，如FN、ET等以及運動、乙酰膽堿(Ach)等可使血管產生內皮依賴性舒張；而內皮細胞功能發生障礙時，上述內皮依賴舒張作用減弱，甚至轉變為血管收縮效應〔9〕。病理條件下內皮細胞激活后，內皮素-1、ATⅡ等縮血管物質生成增加，上述因素可能均參與了冠狀動脈痙攣的發生〔10〕。另外，由血管內皮釋放的內皮源性舒張因子(EDRF)及ET在心血管系統中具有強烈生物活性，內皮源性舒張因子擴張血管，而ET是最強的血管收縮物質，這兩種物質的消長，也明顯影響冠狀動脈的張力。進一步使血管腔狹窄程度增加，嚴重者促發斑塊破裂，甚至導致冠狀動脈急性閉塞而誘發急性心肌梗死。

FN為一族高分子糖蛋白，廣泛分布于人體細胞表面和血漿中，有促進巨噬細胞的吞噬功能，促進細胞與纖維基質間連接的生理作用。纖連蛋白與機體創傷修復、組織炎癥、纖維化及硬化過程等有密切關系〔11〕。實驗證明FN參與了動脈粥樣硬化這一過程。隨著血管硬化程度的增加FN含量呈下降趨勢。血漿FN缺乏會引起微血管完整性的破壞和通透性升高，導致血漿大量外滲，可促進血小板迅速黏附、聚集，形成血小板聚集體，并釋放血小板顆粒成分，形成微血栓。血小板激活后其表面膜糖蛋白Ia，和Ib激活，對血小板的始動接觸起重要作用；血小板膜GPⅡb/Ⅲb受體激活、暴露后，成為纖維蛋白和von Willebrand因子等的結合部位，導致血小板間的連接并形成血小板聚集體〔12〕。存在粥樣硬化斑塊病變的冠狀動脈，特別是斑塊破裂時，其內膜無血栓形成的特性已減弱或喪失血小板激活后釋放的產物TXA2、5-HT以及血小板源性生長因子(PDGF)等除可進一步促進血小板聚集外，尚可引起冠狀動脈痙攣，從而導致血栓不斷進展。

本文結果證實FN和ET的陽性表達是心肌缺血和損傷的靈敏指標，對推斷冠心病猝死具有一定的實際應用價值。

4 參考文獻

1阮云軍，邱 健，雷 剛，等.老年冠心病患者多種無創性檢測指標的變化〔J〕.中華老年多器官疾病雜志，2013；12(3)：176-9.

2賈富全，李時榮，顧 捷，等.纖維連接蛋白及內皮素在冠心病心肌中表達研究〔J〕.中華實用診斷與治療雜志，2011；25(1)：55-7.

3Fishbein MC,Wang T,Matijasevic M,etal.Myocardial tissue troponins Tand I：an immunohistochemical study in experimental models of myocardial ischemia〔J〕.Cardiovasc Pathol，2003；12(2):65-71.

4李 鳳，褚 俊，徐修才，等.急性冠狀動脈綜合征患者血漿Fn水平的變化及其臨床意義〔J〕.臨床心血管病雜志，2011；27(1)：30-4.

5楊 杰，王米渠，李煒弘，等.冠心病血瘀證與肌動蛋白相關基因異常表達的相關性〔J〕.中醫雜志，2009；50(6)：538-40.

6陳旭嬌，何 浪，王麗娟. 冠心病患者內皮祖細胞與動脈彈性的相關性研究〔J〕.浙江醫學，2008；30(8)：810-2.

7LI Y，鮑現寶，朱建華，等. 冠心病猝死心肌纖維連接蛋白免疫組化染色觀察〔J〕.中國法醫學雜志，2008；23(4)：228-30.

8Kishimoto C，Kitazawa W，Takada H.Interstitial fibronectindeposition with T cell infiltrates precedes fibrosis in illlrine viral myocarditis〔J〕. Int J Exp Pathol，2003；79(6)：417-20.

9胡志希，胡思遠，李 琳，等.血管緊張素轉換酶基因多態性對早發冠心病血瘀證的影響〔J〕.中西醫結合心腦血管病雜志，2013；11(5)：515-8.

10卿 平，李怡霖，賈燕珺，等.內皮素1與冠狀動脈鈣化的相關性研究〔J〕.中華老年心腦血管病雜志，2013；15(9)：916-9.

11朱 豪.胱抑素C、內皮素、一氧化氮與冠狀動脈病變相關性研究〔J〕 中國實驗診斷學，2013；17(2)：333-4.

12王成鋼，朱小玲，祖曉麟，等.冠狀動脈造影單支病變患者血清NO及內皮素檢測的臨床意義〔J〕.中國醫藥，2012；7(1)：5-6.