關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射三氧化二砷對膠原誘導性關(guān)節(jié)炎大鼠體重及X線評分的影響

李鴻江 董玉意 李拾林 呂國榮 蔡思清 劉 紅 顏建湘

(福建醫(yī)科大學第二臨床學院影像科,福建 泉州 362000)

類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性、炎性、系統(tǒng)性的自身免疫性疾病，以損害滑膜、軟骨和骨為特征。目前RA的治療方式主要是關(guān)節(jié)腔注射治療，藥物包括非甾體類抗炎藥(NSAIDs)、慢性抗風濕藥(DMARDs)、抗代謝藥物、糖皮質(zhì)激素類藥物及新型生物制劑〔1～3〕，但療效不顯著，且常伴有胃腸道及血液系統(tǒng)等副作用。三氧化二砷(ATO)俗稱砒霜，能夠使畸形蛋白質(zhì)產(chǎn)生自我消滅的能力〔4，5〕，目前將其應(yīng)用于RA的報道較少。本研究選擇大鼠膠原誘導性關(guān)節(jié)炎(CIA)模型，對其關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射ATO，記錄其對CIA大鼠體質(zhì)量及X線評分的影響。

1 材料與方法

1.1研究對象 Wistar大鼠，清潔級，雌雄均有，6～8周齡，體質(zhì)量(200±20)g，由本院動物實驗中心提供，動物使用許可證號:SCXK(閩)2011-012。

1.2主要試劑 Ⅱ型膠原(Sigma公司)、弗氏不完全佐劑(IFA)(Sigma公司);ATO(北京雙鷺藥業(yè)股份有限公司，10 mg，國藥準字H20080665);磷酸鹽緩沖液(PBS，北京生物制品研究所，1 ml，國藥準字S10850002)。

1.3主要儀器 彩超儀(美國GE公司，VOLUSON730型);Digital Diagnose X線攝片機(美國BENNETT公司，MF-150G型); 動物體重計(日本新光電子株式會社，ASN-DH-R12KU型)。

1.4分組 選擇體質(zhì)量無差異的動物，將其隨機分為正常對照組(n=9)、對照組(n=12)和治療組(n=15)。正常對照組常規(guī)飼養(yǎng)，對照組和治療組制備CIA大鼠模型。

1.5制備模型 Ⅱ型膠原10 mg (2 mg/ml) 溶解于0.05 mol/L 冰醋酸中， 4℃保存24 h后與等量IFA混合，冰浴(-4℃)下充分乳化得乳化液(1 mg/ml)。初次免疫：每只動物尾根、背部皮下多點注射配制的乳化液0.3 ml(含膠原0.3 mg)，15 d后給予免疫加強，采用腹腔注射的方法給予配制的乳化液0.2 ml(含膠原0.2 mg )，建立CIA大鼠模型。3 w后以大鼠陸續(xù)出現(xiàn)踝關(guān)節(jié)紅腫為模型成功。

1.6方法 正常對照組給予踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射10% ATO溶液0.1 ml，對照組給予踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射PBS溶液0.1 ml，治療組給予踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射10% ATO溶液0.1 ml，每3天 1次，共4次，末次注射3 d后取材。

1.7觀察指標 記錄造模前、注射藥物前后大鼠體質(zhì)量的變化情況；注射藥物后的關(guān)節(jié)X線表現(xiàn)及治療前后關(guān)節(jié)評分(SharpRA評分標準)：(1)侵蝕:無骨侵蝕計0分;廣泛骨侵蝕和丟失計5分;介于兩者之間計2～4分。(2)關(guān)節(jié)腔變窄:無狹窄計0分;局部狹窄計1分；彌漫狹窄但面積<50%計2分；彌漫狹窄、面積>50%計3分；強直計4分。X線評分為兩項之和。

2 結(jié) 果

2.1各組治療前后動物造模情況及體質(zhì)量變化 對照組、治療組大鼠初次免疫3 d時，注射部位有小潰瘍，20 d足部及踝關(guān)節(jié)腫脹，足墊增厚，表皮充血，皮膚變薄，部分呈急性炎癥，活動有障礙，攝食、飲水有減少趨勢，提示造模成功。組間比較，造模前三組體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療前對照組、治療組相對于造模前體質(zhì)量升高(P<0.05)，對照組、治療組之間體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療前后比較，正常對照組、對照組體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療組體質(zhì)量降低(P<0.05)；治療后，三組之間體質(zhì)量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 動物體質(zhì)量的變化情況

2.2各組注射藥物后動物關(guān)節(jié)X線表現(xiàn) 正常對照組大鼠X線片無異常。對照組大鼠踝關(guān)節(jié)發(fā)現(xiàn)明顯的軟組織腫脹影及膨脹性破壞，部分關(guān)節(jié)間隙變窄、變小、模糊、不易分辨。治療組軟組織腫脹較對照組大鼠程度輕，關(guān)節(jié)間隙雖然存在模糊，但并不明顯。見圖1。

圖1 各組動物注射藥物后關(guān)節(jié)X線表現(xiàn)

2.3各組治療前后關(guān)節(jié)X線評分 治療前，與正常對照組比較，對照組、治療組X線評分更高(P<0.05)，對照組、治療組之間X線評分差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；組內(nèi)治療前后比較，正常對照組、對照組X線評分差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療組X線評分降低(P<0.05)；治療后，三組之間X線評分差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組治療前后關(guān)節(jié)X線評分變化情況分)

3 討 論

RA時活性T細胞浸潤引起滑膜血管增殖而導致關(guān)節(jié)軟骨和骨的破壞，30%可在發(fā)病1年內(nèi)出現(xiàn)關(guān)節(jié)的侵蝕〔6～8〕，更有甚者喪失勞動力，可增加肺部腫瘤、心血管事件等的危險程度，病死率較高。

CIA是用于闡明關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制及開發(fā)新型治療藥物較為經(jīng)典的RA動物模型。本研究結(jié)果提示關(guān)節(jié)腔注射ATO治療關(guān)節(jié)炎效果明顯。由于RA是多種因素共同作用而導致的，其具體作用機制需要更深入的研究來證實。

綜上所述，關(guān)節(jié)腔注射ATO治療關(guān)節(jié)炎，可降低RA動物體質(zhì)量的增加值，改善X線表現(xiàn)，效果明顯。

4 參考文獻

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