高效液相色譜法檢測老年ICU患者血清美羅培南的濃度及藥代動力學變化

馮錦華

(無錫市第九人民醫院，江蘇 無錫 214062)

美羅培南是一種廣譜性的人工半合成碳青霉烯類抗生素，其抗菌機制是抑制細菌細胞壁的合成〔1〕，作用于革蘭陽性菌和陰性菌，在臨床上用于肺炎等呼吸道感染、腦膜炎、尿路感染、皮膚軟組織感染、婦科感染、敗血癥等疾病〔2〕。常用美羅培南治療老年ICU患者，但老年ICU患者體內代謝常常與普通健康人存在巨大差異，因此研究美羅培南在老年ICU患者的藥代動力學特征具有重要意義。高效液相色譜(HPLC)常用于研究藥物藥代動力學特征〔3〕。本文采用HPLC法檢測老年ICU患者血清中美羅培南的濃度及其藥代動力學特征。

1 材料與方法

1.1藥品與試劑 注射用美羅培南〔純度≥90%，批準文號：國藥準字H20065284，中諾藥業(石家莊)有限公司〕，氫氯噻嗪對照品〔純度≥90%，研域(上海)化學試劑有限公司，批號：100309-200702〕，甲醇、乙腈均為色譜純，天津康科德科技有限公司生產；其他試劑均為分析純。

1.2儀器 島津Agilent1200HPLC系統和紫外檢測器SP-20A，LC軟件色譜工作站；1810B型自動雙重純水蒸餾器、美國熱電ST16R臺式冷凍離心機、XW-80A型渦旋混勻機。

1.3一般資料 8例ICU老年患者，男3例，女5例，年齡65～75歲；血壓<90/60 mmHg；呼吸頻率>30次/min；血氧分壓(PaO2)/吸入氧分壓(FiO2)<300，PaO2<60 mmHg，需行機械通氣治療；社區獲得性肺炎或胸片顯示雙側或多肺葉受累〔4〕。

1.4液相色譜條件 色譜柱Phenosphere C18柱，5 μm(50 mm×4.6 mm)；柱溫:37.5℃，流動相為10 mmol/L磷酸緩沖液(pH7.4)：乙腈(92:8，V/V)，流速：1 ml/min，進樣量：20 μl，檢測波長295 nm。

1.5血清樣品預處理 取200 μl血漿樣品，加入一定量美羅培南和內標氫氯噻嗪，渦旋混勻，加入到預先處理好的Bond Elut固相萃取柱，用0.6 ml濃度為5 mmol的磷酸二氫鉀溶液(pH6.4)沖洗雜質，然后用0.6 ml甲醇-0.1%甲酸(16∶84)洗脫，收集洗脫液，6 000 r/min離心，取上清液進樣〔5〕。

1.6標準曲線的制備 精確吸取一定量美羅培南的對照品溶液和50 μl內標氫氯噻嗪溶液，用200 μl空白血漿稀釋美羅培南濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/ml的血漿系列溶液。經上述血漿樣品預處理步驟進液相分析。

1.7血清樣品采集及處理 靜脈滴注給予美羅培南0.8 g，滴注30 min，在給藥前即刻、給藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0 h采集患者靜脈血1 ml，置于肝素離心管中,離心(1 500 r/min×15 min)，分取血清，于-70 ℃低溫冰箱中保存待測。取出冰箱中樣品，依次按照“1.5”步驟進行血漿樣品預處理，處理進液相分析。

1.8藥動學參數計算方法 以3P97程序經計算機擬合測得的血藥濃度-時間數據 ,用WinNonlon 5.0軟件計算藥代動力學參數。

2 結 果

2.1色譜行為 美羅培南和內標氫氯噻嗪的保留時間分別為5.3、6.8 min。

2.2標準曲線及系統性實驗 以美羅培南峰面積比內標氫氯噻嗪面積(Y)為縱坐標，美羅培南濃度X為橫坐標，進行回歸計算，得標準曲線回歸方程:Y=0.1342C-0.0423,r=0.998 9。線性范圍為0.5～50.0 μg/ml，日內變異系數均<5%；日間變異系數均<5%；相對回收率均在95%～105%；樣品處理回收率均>80%。

2.3藥代動力學參數 血藥濃度-時間數據見圖1，藥代動力學參數Cmax/Dose(53.65±16.87)μg·ml-1·g-1、tmax(0.35±0.08)h、t1/2(2.53±0.14)h、清除率(CL)(8.76±3.76)L/h、V(27.86±17.43)L、AUC0～t(94.36±42.46)μg·h-1·ml-1、AUC0～∞(118.62±68.32)μg·h-1·ml-1、λZ(0.35±0.15)h-1。

圖1 老年ICU患者靜脈滴注給予美羅培南0.8 g后血藥濃度-時間曲線

3 討 論

文獻報道采用HPLC-超濾法監測血液中美羅培南濃度的方法，其檢測限(LOD)、定量限(LOQ)值分別為0.01和0.05 μg/ml，表明超濾法在除去雜質的同時能有效富集血液中的美羅培南，其回收率達90%以上，但考慮到采用超濾法所需成本較高，未采用此法〔6〕。

高效液相色譜法檢測老年ICU患者血清中美羅培南濃度，專屬性強，靈敏度高，分離效果良好，血漿中內源性物質無干擾，測定血液中美羅培南濃度的重要一步是處理血漿樣品，文獻報告，血漿中的蛋白含量對血漿處理效果影響不大，表明其與蛋白結合率較低〔7〕。故本文采用處理血漿后得到血清，測定血清中的藥物含量。本實驗同時考察了有機溶劑萃取和固相萃取兩種方法，發現采用二氯甲烷萃取處理血清來除去雜質后，其水層進液相發現，雜質對測定有干擾，而固相萃取后雜質對測定無干擾，且回收率達80%以上。本文也選擇多種內標，最終選用了氫氯噻嗪作為內標，結果發現其與主藥有很好的分離度。對于血清保存溫度已進行考察，發現在-20℃條件下保存時穩定性較差，同一樣品經過同一步驟后峰性相差較大，這主要原因是美羅培南的穩定性較差，易分解或者氧化。考察了在-70℃條件下保存1個月后穩定性良好，故選擇保存樣品溫度為-70℃。最終方案定為采用HPLC-UV檢測、固相萃取處理樣品、以氫氯噻嗪作為內標來測定血液中美羅培南濃度。

老年ICU患者半衰期與健康成年人相比明顯延長，清除率也低于健康成年人〔CL11.3 L/h〕，表明其在體內代謝速度慢于健康成年人〔8〕。表觀分布容積與其他文獻報道的老年ICU患者藥代動力學研究相近〔1〕。因此，對于老年ICU患者使用美羅培南時，應考慮其代謝慢的藥代動力學特征，給藥方案制定時應同時考慮治療窗和給藥量，在常規劑量治療老年ICU患者時應實施臨床藥物監測，增加用藥安全性。

4 參考文獻

1孫亞欣，肇麗梅，朱 旭，等.RP-HPLC 法測定人血漿和尿液中美羅培南濃度〔J〕,廣東藥學院學報,2011；27(6):567-70.

2李曉燕，孔凡霞，王 瑩，等.高效液相色譜法測定美羅培南側鏈的含量〔J〕.中南藥學,2013；11(7):553-5.

3Daillya E,Bouquiéa R,Deslandes G,etal.A liquid chromatography assay for a quantification of doripenem,ertapenem,imipenem,meropenem concentrations in human plasma:application to a clinical pharmacokinetic study〔J〕.J Chromatography B,2011；879(1):1137-42.

4張 弨， 周 勇，周慶濤，等.HPLC法測定美羅培南血清濃度及其在ICU老年患者中的藥代動力學研究〔J〕.中國臨床藥理學雜志,2013；29(4):273-5.

5陳曉晶，梁海濤，覃韋葦，等.用HPLC法測定人血漿中美羅培南的濃度〔J〕.藥學服務與研究，2013；12(4):316-8.

6Ikeda K,Ikawa K,Morikawa N,etal.High-performance liquid chromatography with ultraviolet detection for real-time therapeutic drug monitoring of meropenem in plasma〔J〕.J Chromatography B,2007；856(1)：371-5.

7倪桂芬.HPLC法測定人血清中美羅培南濃度〔J〕,中國藥師,2005；8(7):577-8.

8Adnana S,Li JX,Wallis SC,etal.Pharmacokinetics of meropenem and piperacillin in critically ill patients with indwelling surgical drains〔J〕.Int J Antimicrobial Agents,2013；42(1):90-3.