外周血SOCS-1的表達及與慢性丙型肝炎自身免疫現象的關系

盧娟娟 杜國義 張惠琴 張麗萍 楊玉霞 李文凡

(甘肅省人民醫院消化科，甘肅 蘭州 730000)

丙型肝炎病毒(HCV)感染后的發病機制尚不十分明確，有研究表明很多慢性丙型肝炎患者存在自身免疫現象，而這種自身免疫現象與肝細胞損害及病毒慢性持續感染有關〔1〕。在體和離體實驗表明HCV感染可導致機體B細胞和T細胞功能失調，T淋巴細胞之間相互協調或(及)制約功能遭到破壞已有報道〔2〕，但作為產生抗體的B淋巴細胞功能有無改變，目前報道不多。本文通過研究HCV感染者體內外周血細胞因子信號傳導抑制因子(SOCS)-1與慢性丙型肝炎自身免疫現象的關系，了解B細胞的功能紊亂與病情發展的關系，進一步探討丙型肝炎的發病機制。

1 材料與方法

1.1對象 2010年6月至2012 年12月在我院消化內科就診的 HCV 感染者78例，均符合中華醫學會肝病學分會 2004年制訂的《丙型肝炎防治指南》，病程超過6個月，血清HCV RNA(RT-PCR法)和(或)抗HCV(ELISA法)陽性，排除其他病毒感染、自身免疫性肝炎、酒精性肝病和代謝性肝病等，近3個月內未使用抗病毒藥物及免疫抑制劑。男48例, 女30例, 年齡25～64歲〔平均(42.3±6)〕歲,病例組又分為慢性丙肝有自身免疫現象組和慢性丙肝無自身免疫現象組，選擇40 例健康人作為健康對照組, 無急慢性心、肝、腎等疾病,兩組年齡、性別無統計學差異(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1檢測項目 取靜脈血5 ml，分別檢測肝功能、HCV RNA、免疫球蛋白、肝纖維化4項及自身抗體(血清抗核抗體、抗平滑肌抗體、抗線粒體抗體、抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原、抗肝腎微粒體抗體-1和抗肝細胞胞質抗體-1)。

1.2.2外周血單個核細胞(PBMC)SOCS-1 mRNA水平測定 采集外周靜脈血5 ml，進行PBMC分離。制備總RNA，所得RNA置于-70℃待用。采用RT-PCR方法，以β-actin為內參照，SOCS-1和β-actin引物序列參照文獻〔3〕方法以及GenBank中查出的相應序列，根據引物設計原則用Primer Express 2.0設計軟件設計引物序列:SOCS-1，正義引物：5'-ACC CCT TCT CAC CTC TTG A-3'，反義：5'-ATA AAG CCA GAG ACC CTC C-3'，擴增片段長度184 bp,β-actin正義引物：5'-GTG GAC ATC CGC AAA GAC-3'，反義：5'-AGT TGC GTT ACA CCC TTT C-3'，擴增片段長度320 bp。凝膠成像系統分析條帶吸光度。表達強度=目標基因A值/β-actin A值。

2 結 果

2.1HBV感染組自身免疫紊亂情況 78例HBV感染組有自身免疫現象者32例(41%)，自身抗體陽性27例，其中抗核抗體陽性21例，抗平滑肌抗體陽性5例，抗肝細胞胞質抗體陽性2例，抗肝腎微粒體抗體陽性2例，抗線粒體抗體及抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原陽性0例。合并肝外自身免疫疾病7例，其中糖尿病4例，甲狀腺功能亢進2例，類風濕關節炎1例。

2.2HCV 感染者有自身免疫現象、無自身免疫現象及健康對照組SOCS-1mRNA 表達水平的比較 三組間SOCS-1 mRNA 表達水平差異有統計學意義(F=6.500，P=0.002)。HCV 感染有自身免疫現象組SOCS-1 mRNA 表達水平(0.38±0.44)低于其他兩組(LSD-t=0.209,0.203；P=0.001,0.042)，無自身免疫現象組SOCS-1 mRNA 表達水平(0.59±0.37)雖低于健康對照組(0.76±0.52)，但無顯著差異(LSD-t=0.190，P=0.079)。

2.3SOCS-1 mRNA 表達水平與其他指標的相關性 SOCS-1 mRNA 表達水平與谷丙轉氨酸(ALT)、HCV RNA、IgG、IgA、IgM無相關性；與透明質酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PcⅢ)、層黏蛋白(LN)有相關性，見表1。

表1 SOCS-1 mRNA 表達水平與其他指標的相關性分析

3 討 論

已有大量研究表明HCV感染患者存在自身免疫現象，包括產生自身抗體及合并肝外自身免疫性疾病，這種自身免疫現象可能與肝細胞損害及病毒的慢性持續感染有關，15%～48.8%的HCV感染患者可以檢測到自身抗體；HCV感染患者還可伴有混合性冷球蛋白血癥、腎小球腎炎、遲發性皮膚卟琳癥、干燥綜合征、自身免疫性甲狀腺炎、特發性血小板減少癥等自身免疫性疾病〔4，5〕。自身抗體的產生可能系HCV誘導機體自身免疫紊亂所致，特別是誘導B淋巴細胞增殖，而研究表明SOCS-1表達的抑制與B淋巴細胞增殖有關〔2〕。

SOCS-1具有抑制Janus激酶-信號轉導子與轉錄激活子(JAK-STAT)信號轉導通路的作用，可抑制B細胞的活化和增殖〔2〕，在缺失SOCS-1或敲除SOCS-1基因情況下大量的DC遷移到胸腺和脾臟中，并在其表面表達高水平的B淋巴細胞刺激因子Blys和分裂誘導配體(ApRIL),使體內B細胞的胞體異常增大和產生自身反應性抗體〔6〕。SOCS-1是重要的肝臟炎性抑制因子，通過調節細胞因子和Toll樣受體誘發反應抑制肝臟炎性；SOCS-1對調節樹突細胞的功能、抑制全身炎性反應和系統自身免疫有重要的調控作用〔6〕。本研究結果表明SOCS-1表達抑制可能是刺激機體產生自身免疫現象的原因，但是血清SOCS-1 mRNA水平與肝功能無相關性，這可能是因為病例數目偏少，也可能因為肝細胞的損害由多種因素所致，不僅與自身免疫因素有關；血清SOCS-1 mRNA水平與血清肝纖維化指標有相關性,折射出與HCV感染慢性化及預后密切相關,這可能因為SOCS-1表達抑制，可以增加組織對炎癥反應的易感性，而免疫反應、炎癥影響肝病的慢性化和纖維化進展速度〔11〕。

4 參考文獻

1Paroli M,Iannucci G,Accapezzato D.Hepatitis C virus infection and autoimmune diseases〔J〕.Int J Gen Med,2012;5:903-7.

2Moorman J,Dong ZP,Ni L,etal.Abnormal B-cell activation associated with TALL-1 over-expression and SOCS-1 suppression during chronic hepatitis C virus infection〔J〕. Immunology,2009;128(2):227-35.

3Boursier J,Louver A.Liver fibrogenesis and genetic factors〔J〕.Clin Res Hepatol Gastroenterol,2011;35(1):S3-9.

4Imanaka K,Tamura S,Fukui K,etal.Enhanced expression of suppressor of cytokine signalling-1 in the liver of chronic hepatitis C: possible involvement in resistance to interferon therapy〔J〕.J Viral Hepat,2005;12(2):130-8.

5Aceti A,Zechini B,Griggi T,etal.Undetectable phospho-STAT 1 in peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C who do not respond to interferon-alpha therapy〔J〕.Liver Int,2005;25(5):987-93.

6Fujimoto M, Naka T.SOCS1, a negative regulator of cytokine signals and TLR responses, in human liver diseases〔J〕.Gastroenterol Res Pract,2010;2(3):156-7.