酸棗仁湯對虛勞不眠小鼠腦內(nèi)NO、SOD和Glu含量及學(xué)習(xí)記憶能力的影響

李家娣 范桂紅 吳 迪 孫雨薇 韓 雪 張亞男

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥局,黑龍江 齊齊哈爾 161041)

目前失眠的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，已成為嚴(yán)重影響人們身心健康的主要疾患之一〔1〕。目前，臨床對其治療仍以藥物為主，西藥以鎮(zhèn)靜、催眠類藥物為主，但需要長期服藥，影響患者的依從性及出現(xiàn)戒斷綜合征〔2〕，且由于對失眠的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，以致臨床缺乏針對性的治療措施。本研究擬探討失眠經(jīng)典方藥酸棗仁湯對學(xué)習(xí)記憶能力的影響及干預(yù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 8周齡SPF級SD小鼠80只〔動物合格證號：SCXK(津)2013-0002〕，雌雄各半，體質(zhì)量(60±20)g，由天津?qū)嶒瀯游镏行奶峁?/p>

1.2實驗分組 依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，即空白對照組(簡稱空白組)、模型對照組(簡稱模型組)、中藥酸棗仁湯治療組(簡稱中藥組)、西藥安定治療組(簡稱西藥組)，每組20只。

1.3給藥方法 每日固定時間進(jìn)行灌胃，其中西藥組胃飼安定0.2 mg·kg-1·d-1，中藥組胃飼酸棗仁湯10 g·kg-1·d-1，模型組、空白組胃飼生理鹽水2 ml/(kg·d)。

1.4實驗儀器及試劑 紫外可見分光光度計(上海欣茂儀器有限公司，UV-7504型)；電熱恒溫水浴鍋(上海儀表供銷公司))；Y型迷宮(廣州威佳科技有限公司)。氯苯丙氨酸(PCPA)購自Sigma公司；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物制劑研究所)；血糖(Glu)試劑北京博奧森公司。

1.5研究方法

1.5.1模型制備 采取大鼠跑臺力竭訓(xùn)練+Y型迷宮十PCPA失眠的動物模型，跑臺力竭實驗主要是對除空白組之外的所有小鼠，每天進(jìn)行20 min的跑臺訓(xùn)練，5只/次，直到其力竭；而后進(jìn)行Y型迷宮訓(xùn)練，即：將小鼠放入Y型迷宮的任一支臂之中，予以小鼠電擊，直至其進(jìn)入安全區(qū)后停止，而后熄燈結(jié)束測試，同時將小鼠所在支臂作為下一測試的起點，進(jìn)行電擊實驗，以測試其走完迷宮所用時間、錯誤總數(shù)及首錯前正確數(shù)，上述兩項實驗開始1 w后，對小鼠進(jìn)行腹腔注射PCPA，劑量為350 mg/kg，至小鼠出現(xiàn)攣縮性疼痛，約持續(xù)60 min，疼痛緩解。72 h后對小鼠進(jìn)行體表特征積分評定，檢驗?zāi)Ｐ汀?/p>

1.5.2檢測指標(biāo)與方法 猝死動物，取出腦組織，將其稱重，吸水紙洗盡水分后置于超低溫冰箱中，NO、SOD 、Glu檢測按照試劑盒中步驟進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠統(tǒng)計學(xué)描述 模型組小鼠在實驗第4天因跑臺力竭實驗死亡1只，西藥組小鼠在實驗第7天因灌胃死亡1只，故共78只小鼠進(jìn)入相關(guān)數(shù)據(jù)分析。

2.2各組小鼠NO、SOD和Glu含量比較 與空白組比較，模型組的SOD含量增加明顯，Glu含量則降低明顯(P<0.05)，NO含量無明顯變化(P>0.05)；與模型組比較，西藥組、中藥組的NO、Glu含量升高明顯，SOD含量降低明顯(P<0.05)；中、西藥組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠NO、SOD和Glu含量比較±s)

2.3各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力比較 與空白組比較，模型組的走完迷宮所用時間、錯誤總數(shù)均增加明顯，首錯前正確數(shù)降低明顯(P<0.05)；與模型組比較，西藥組、中藥組的走完迷宮所用時間、錯誤總數(shù)均降低明顯，首錯前正確數(shù)增加明顯(P<0.05)；中、西藥組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力比較±s)

3 討 論

失眠在中醫(yī)學(xué)中根據(jù)其癥狀，將其隸屬于“不寐”范疇，將其分為實證與虛證兩種，其中實證多由于營衛(wèi)不和，陽不入陰而引發(fā)，虛證則多與精血虧虛，臟不藏神有關(guān)〔3〕。本研究中所用酸棗仁湯為治療失眠的經(jīng)典方劑，出自仲景的《金匱要略》，方中以酸棗仁為君藥，取其養(yǎng)血補(bǔ)肝、寧心安神之功，茯苓與知母共為臣藥，一則輔助君藥以加強(qiáng)安神除煩之功，再則取茯苓健脾利濕，知母滋陰清熱，使其清熱除煩之力強(qiáng)；以調(diào)暢氣機(jī)、舒暢肝氣之白芍為佐藥，與君藥相反相成，以達(dá)養(yǎng)血調(diào)肝之妙；甘草和中緩急為使藥，且能與酸棗仁相合，增強(qiáng)酸甘化陰之能，補(bǔ)充肝血不足之征，全方養(yǎng)肝血以寧心神,清內(nèi)熱以除虛煩為組方原則，諸藥相合，則失眠可望向愈。

有學(xué)者研究證實：酸棗仁湯可減少小鼠的自主活動次數(shù)，延長失眠小鼠的睡眠時間，其催眠效果與劑量具有相關(guān)性〔4〕；而通過酸棗仁湯的不同劑量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)不同劑量均對于小鼠的活動具抑制作用，且可明顯抑制中樞神經(jīng)興奮，延長睡眠百分率及睡眠持續(xù)時間，呈現(xiàn)量效關(guān)系〔5〕。亦有研究表明，安神藥物可提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，尤其是記憶獲得障礙及再現(xiàn)障礙〔6〕，縱觀近年研究，對于本方的研究多針對鎮(zhèn)靜催眠效應(yīng)機(jī)制而展開，對于失眠較容易導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶能力的降低的改善及其機(jī)制研究鮮見。

SOD作為人體內(nèi)最重要的自由基清除劑，模型組的SOD活性增高,則可能由于睡眠剝奪加重了自由基清除系統(tǒng)的反應(yīng)性升高,過度的氧自由基會滅活SOD，使得SOD活性下降，進(jìn)一步加重對腦組織的損害；Glu屬于興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，由于可改變興奮性氨基酸濃度而導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生興奮性毒性，誘發(fā)失眠〔7〕。提示酸棗仁湯可調(diào)控NO、SOD和Glu水平，其功效與西藥相似。

本研究結(jié)果顯示，酸棗仁湯可有效改善虛勞不眠小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與調(diào)控NO、SOD和Glu水平有關(guān)。

4 參考文獻(xiàn)

1袁拯忠，葉 人，項祖闖，等.913例失眠患者中醫(yī)證型分布規(guī)律〔J〕.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011；29(7)：1508-10

2徐勁松，劉繼洪，余志映.加味酸棗仁湯治療陰虛體質(zhì)失眠癥44例臨床觀察〔J〕.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2013；19(12)：1491-3.

3張舜波，王 平，田代志，等.酸棗仁總皂苷對失眠老年大鼠腦氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)及受體表達(dá)的影響〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2014；20(4)：124-7.

4王 慧，羅 坤，武 靜.酸棗仁湯對失眠大鼠中腦中縫背核神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的影響〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2012；18(21):235-9.

5朱秀美，楊國松，李秀才.酸棗仁湯的藥理學(xué)作用研究進(jìn)展〔J〕.中醫(yī)臨床研究，2013；5(14) ：121-2.

6王守勇，謝 鳴.酸棗仁湯組分配方對高架十字迷宮大鼠海馬單胺類遞質(zhì)及其代謝物的影響〔J〕.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012；35(2):117-20.

7張林挺.酸棗仁湯對虛勞失眠大鼠干預(yù)機(jī)理的研究〔D〕.廣州中醫(yī)藥大學(xué)博士論文，2009.