五味子木脂素對裸鼠膠質瘤細胞增殖的影響

金 宏 劉 威 溫 娜 紀朋艷 王 爽 齊 玲 劉曉陽

(吉林醫藥學院基礎醫學院，吉林 吉林 132013)

神經膠質瘤在顱內腫瘤中發病率較高，目前治療方法主要以手術為主，輔以放化學治療，但都效果不佳，術后復發率、死亡率很高。其中位生存期<1年，且大多數患者在確診后 2 年內死亡〔1〕。五味子作為補益類中藥，在護肝、提高免疫、抗腫瘤與抗氧化等方面已受到多項證實。研究表明，木脂素是五味子中主要生物活性成分〔2，3〕，但其對腦膠質瘤中治療作用研究較少。本研究觀察了五味子木脂對體外培養裸鼠神經膠質瘤細胞生長的作用，旨在探討五味子木脂素在腦腫瘤細胞生長中起到的作用。

1 材料與方法

1.1主要試劑 細胞培養基RPMI-1640 (Thermo)，小牛血清(Gibco)，五味子木脂素(北華大學提供)，木瓜蛋白酶(北京鼎國)，四甲基耦氮唑藍(MTT)(Sigma)，二甲基亞砜(DMSO)(Thermo)。

1.2提取原代裸鼠膠質瘤細胞 取新鮮的裸鼠神經膠質瘤組織，冰上操作，剔除壞死出血部分，冷磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，將組織剪成1×1 mm2碎塊，置于離心管中，加入木瓜蛋白酶后將離心管置于37℃培養箱中，消化30 min，吸取上清液，加血清終止消化，以300 r/min離心5 min，棄上清后加培養液反復吹打，過濾后以300 r/min速度離心5 min，離心再次棄上清，加入含10%血清培養液培養，臺盼藍計數活細胞，以2×106將細胞接種于25 cm2培養瓶中，37℃、5% CO2及飽和濕度下培養待用。

1.3培養裸鼠膠質瘤細胞 將提取細胞接種于培養瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的RPMI-1640細胞培養液，將其置入37℃、5%CO2細胞培養箱中培養，隔日換液，待細胞匯合度為 80%～90% 時，用0.25%胰酶消化傳代，取傳3代以后對數生長期細胞進行實驗。

1.4藥物作用后膠質瘤細胞生長情況 將五味子木脂素溶解后，取適量藥液加入含5%小牛血清RPMI-1640細胞培養液，配制成終濃度為0、50、100、200 μg/ml的藥物。將裸鼠膠質瘤細胞，用胰酶消化后，用含5%小牛血清RPMI-1640細胞培養液調整細胞濃度為1×106/ml。將細胞懸液均勻接種于96孔板中，100 μl/孔，置入37℃、5%CO2細胞培養箱中培養24 h，使細胞同步化。分別于24、48、72 h棄去上清液，加入含不同濃度的五味子木脂素，每個藥物濃度重復5次。藥物作用結束時，每孔加入MTT 20 μl，37℃繼續孵育4 h，終止細胞培養，棄去上清液，每孔分別加DMSO 150 μl，震蕩均勻使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶聯免疫檢測儀上490 nm波長處測定各孔吸光度(A)值，用不加細胞的空白孔調零。

2 結 果

不同濃度五味子木脂素作用于裸鼠膠質瘤細胞，結果顯示：隨著藥物濃度的增高，對膠質瘤細胞的生長起到抑制作用，濃度在200 μg/ml時，對細胞的抑制作用最明顯(P<0.01)，說明五味子木脂素在高濃度時可以抑制膠質瘤細胞生長。見表1。

表1 不同濃度五味子木脂素對裸鼠神經膠質瘤細胞的作用±s)

3 討 論

神經上皮組織腫瘤在神經系統腫瘤中發病率較高，同時分類及分型最多〔4〕。其中，又以膠質細胞瘤為最多，約占 50%。目前，手術治療仍是腦膠質瘤的主要治療手段，但是患者的生存期不高，一直維持在15～22個月〔5〕。所以，為了提高膠質瘤患者的生存率，研究新的治療手段顯得十分迫切。近年來隨著祖國醫學的飛速發展，中醫中藥等治療方法已從逐漸過渡到臨床，并取得了一定治療效果，這些方法可有效縮小腫瘤體積、減少腫瘤血供，提高患者生存率。

五味子是我國長期使用的補益類藥物，大量研究證明，五味子中含有的聯苯環辛二烯結構的木脂素類物質是其主要的生物活性成分〔6～9〕，主要包括五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素等，此類物質具有保肝、降酶、保護中樞神經系統、抗艾滋病毒和抗癌等多種活性〔10～12〕。研究表明木脂素發揮抗腫瘤作用主要是通過清除氧自由基、誘導腫瘤細胞分化及凋亡、逆轉腫瘤細胞多耐藥性、抑制腫瘤血管生成等機制來抑制腫瘤的生長及轉移。目前對五味子木脂素在腦膠質瘤細胞中是否發揮抑瘤作用還未見研究。

本實驗結果發現較高濃度五味子木脂素作用裸鼠腦膠質瘤細胞后，可以誘導腫瘤細胞死亡，對細胞生長具有明顯的抑制作用。藥物濃度在200 μg/ml時，對膠質瘤細胞的抑制作用最明顯。充分說明五味子木脂素在治療腦腫瘤中可能發揮重要作用。具體該藥通過何種途徑發揮抑瘤作用還有待進一步研究。

綜上所述，本實驗檢測到五味子木脂素在高濃度時可明顯抑制體外腦膠質瘤細胞的增殖，進一步肯定了五味子木脂素在抗腫瘤方面的應用價值。下一步，將在此研究的基礎上，繼續探索五味子木脂素具體通過哪種方式發揮其抗腦膠質瘤作用。

4 參考文獻

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