中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病與非中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者腦脊液中基質(zhì)細胞衍生因子-1α的表達對比

曲延章 王蘇亮 韓英杰

(齊齊哈爾醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院血液科,黑龍江 齊齊哈爾 161006)

中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病(CNSL)系由于白血病細胞浸潤至腦膜或腦實質(zhì)，使患者表現(xiàn)出相應的神經(jīng)和(或)精神癥狀,否則診斷的白血病為非CNSL(N-CNSL)。絕大多數(shù)CNSL患者為腦膜浸潤，因此腦脊液(CSF)檢查是最重要的診斷依據(jù)。目前對CNSL的診斷仍以CSF中找到白血病細胞為主要診斷依據(jù)(CSF細胞數(shù)≥10×106/L)，但缺乏敏感性，尤其對CSF中存在的微小殘留病變難以診斷。基質(zhì)細胞衍生因子(SDF)-1主要由骨髓基質(zhì)細胞產(chǎn)生〔1〕。研究表明，SDF-1不僅參與維持正常造血細胞的存活和增殖，同時與惡性造血細胞增殖及在血液、骨髓、淋巴結(jié)的浸潤密切相關(guān)〔2〕。研究表明，SDF-1在急性白血病中高表達〔3〕。SDF-1與其受體(CXCR)，與慢性炎癥、腫瘤的特異性轉(zhuǎn)移，尤其是血液腫瘤的耐藥、浸潤等病理過程有密切聯(lián)系，已成為目前腫瘤研究的熱點之一〔1〕。本文試圖探討CNSL與N-CNSL患者CSF中SDF-1α的表達差異。

1 材料與方法

1.1病例 我院血液科住院的首次發(fā)病未經(jīng)治療的急性早幼粒細胞白血病(APL)患者79例,男40例，女39例；平均65(61～67)歲；其中CNSL 42例,N-CNSL 37例。白血病的診斷符合法國、美國、英國(FAB)協(xié)作組形態(tài)學、免疫學、細胞遺傳學(MIC)診斷標準〔4，5〕及流式細胞學免疫分型。CNSL診斷是采集患者CSF，以有無白血病細胞為根據(jù)。排除既往有神經(jīng)系統(tǒng)疾病史者。對照組取自本院外科外傷手術(shù)腰麻病人，非腦脊髓疾病患者42例，男20例，女22例；平均66(60～74)歲。

1.2主要儀器及試劑 (1)酶標儀(Bio-RAD Model 550，Bi01-Tiok公司)；(2)電熱恒溫培養(yǎng)箱；(3)人SDF-1α酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(Catalog Number DSA00 R&D公司)； (4)振蕩儀；(5)普通離心機。

1.3治療方法 所有病例均采用全反式維甲酸加亞砷酸雙誘導，分子學完全緩解后應用化療、全反式維甲酸、亞砷酸交替維持治療。N-CNSL組在骨髓完全緩解后預防性鞘內(nèi)注藥〔甲氨蝶呤(MTX)10 mg，阿糖胞苷(Ara-c)30 mg，地塞米松(DEX)5 mg〕3次(1次/4～6 w)；CNSL組在確診后鞘內(nèi)注藥2～3次/w，直至CSF正常，以后1次/4～6 w，劑量方法同CNSL的預防。對照組按照外傷的治療原則進行。3組治療前、治療后1個月采集CSF，以觀察SDF-1水平變化。

1.4CSF標本的收集和處理 采集的CSF于普通離心機1 000 r/min離心15 min，取上清后低溫高速離心機于4℃下10 000 r/min離心10 min，留取上清于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5CSF SDF-1α濃度的ELISA檢測 復溫：將所有試劑及標本溫度恢復至室溫；配制清洗緩沖液：用重蒸水1∶20稀釋；建立標準曲線：設標準孔6孔，每孔中各加入標準品50 μl，濃度依次序為0，50，100，250，500，1 000 pg/ml；加樣：待測品孔中每孔各加入待測樣品50 μl；在待測品孔中每孔各加入10 μl的生物素標記液(15 s混勻)；將反應板置(36±2)℃孵育反應45 min；洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4～6次，向濾紙上印干；每孔加酶標記溶液50 μl(15 s混勻)；將反應板置(36±2)℃孵育反應45 min；洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4～6次，向濾紙上印干；每孔加底物工作液A、B各50 μl(5 s混勻)；將反應板置(36±2)℃孵育反應15 min；每孔加入50 μl終止液混勻，終止反應；在450 nm處測吸光值及計算SDF-1α濃度。

1.6統(tǒng)計學處理 采用SAS9.13軟件進行多組間方差分析和兩組間SNK(Newman-Keuls)分析。

2 結(jié) 果

2.13組入院時基線資料的比較 3組肌酐、血紅蛋白、血小板及白細胞計數(shù)均存在統(tǒng)計學差異(P<0.05)，其他指標均無統(tǒng)計學差異。見表1。

表1 3組病人入院時基線資料的比較±s)

2.23組治療前后SDF-1α的表達水平比較 3組治療前CSF中SDF-1α的表達水平存在明顯差異(F=26.923，P<0.05)，CNSL組〔(735.2±87.3)pg/ml〕明顯高于N-CNSL組〔(536.9±63.5)pg/ml〕(P<0.05)及對照組〔(459.3±54.8)pg/ml〕(P<0.05)，N-CNSL組高于對照組(P<0.05)。治療后CNSL組CSF中SDF-1α的表達水平〔(543.8±63.5)pg/ml〕明顯低于治療前(t=8.645,P<0.05)，而N-CNSL及對照組治療后CSF中SDF-1α的表達水平〔(529.7±61.4)、(462.7±57.9)pg/ml〕與治療前組均無顯著性差異(t=1.586、1.576,均P>0.05)。CNSL組治療前后差值均值與N-CNSL、對照組有顯著差異(t=10.36，t=6.86，均P<0.05)。

3 討 論

由造血干細胞惡變而形成的一個原始細胞克隆取代了正常骨髓是急性白血病常見的特點，白血病患者死亡的重要原因是惡變的造血干細胞侵襲和轉(zhuǎn)移。SDF-1是骨髓基質(zhì)細胞和成骨細胞產(chǎn)生的趨化蛋白，SDF-1為一個低分子量的細胞因子，SDF-1/CXCR4生物軸是指由SDF與其特異性受體CXCR4相互作用而構(gòu)成的一個與細胞間信號傳導、細胞遷移有密切關(guān)系的耦聯(lián)分子對。研究表明SDF-1有非常重要的生物學功能〔6〕：在造血干細胞移植中，它是造血干細胞動員和歸巢的關(guān)鍵因子，同時作為趨化因子也影響組織血管發(fā)生、膠原蛋白產(chǎn)生、B淋巴細胞和骨髓組織生成。

目前的臨床研究，已觀察了SDF-1在白血病患兒血清、血漿的高度表達〔3〕，也觀察了SDF-1在白血病成人血清、CSF的高度表達〔7〕,這些均提示該指標的高表達對于該病的發(fā)生發(fā)展、預后評估及髓外浸潤有著一定的意義。本研究結(jié)果提示未治療CNSL組入院時CSF中SDF-1α表達水平提高顯著，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病發(fā)生的重要特征。CNSL患者CSF SDF-1α表達異常，并且在CNSL治療后持續(xù)異常，并有可能復發(fā)，其原因可以通過進一步實驗加以研究。

N-CNSL組入院時CSF中SDF-1α表達升高可能與存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)微小殘留白血病惡性克隆有關(guān)，同時表達增多的SDF-1α對白血病細胞又可能起到維持生存、促進增殖作用，參與形成中樞神經(jīng)系統(tǒng)微小殘留病的形成與增殖，從而形成惡性循環(huán)。本研究沒有采用隨機化臨床試驗是缺陷。

4 參考文獻

1王 艷，劉曉日，殷小成.SDF-1/CXCR4在急性白血病中的研究進展〔J〕.國際兒科學雜志，2009；36(6)：577-9.

2龔 堡，董歸然.SDF-1/CXCR4生物軸與兒童惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移〔J〕.中華兒科雜志，2009；47(3)：237-9.

3李婉麗，楊惠軍，鄭敏翠，等.SDF-1、CXCR4和hs-CRP在兒童急性白血病中的表達〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2010；18(4):794-5.

4First MIC Cooperative Study Group.Morphologic,immunologic,and cytogenetic(MIC) working classification of acute lymphoblastic leukemia〔J〕.Cancer Genet Cytogenet,1986；23(3)：189-97.

5朱易萍.急性白血病的形態(tài)學、免疫學、細胞遺傳學分型〔J〕.實用兒科臨床雜志，2004；19(5)：340-2.

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7溫 泉，陳日玲，蔡康榮，等.SDF-1/CXCR4在小兒急性白血病中的表達及其意義〔J〕.中國實驗血液學雜志，2011；19(2)：324-6.