老年缺血性腦卒中患者血清sFas和sFasL水平變化及臨床意義

吳春芳 趙雪艷 陳 勇 張起順

(河南大學淮河醫院神經內科，河南 開封 475000)

近年研究表明，缺血性腦卒中與細胞凋亡有著密切關系〔1〕。細胞凋亡因子(Fas)及其配體(FasL)是在細胞凋亡過程中發揮重要調控作用的促細胞凋亡因子，且FasL能誘導免疫炎癥反應，在調控免疫炎癥反應過程中發揮重要中介作用〔2〕。在正常生理條件下，Fas和FasL的表達有限，而在缺血應激條件下，Fas和FasL能夠大量表達，其中可溶性Fas(sFas)和可溶性FasL(sFasL)會分泌到胞質中，從而發揮促細胞凋亡作用。因此，在缺血性腦卒中患者血清中能檢測到高水平的sFas和sFasL〔3〕。本研究主要探討sFas和sFasL在老年缺血性腦卒中患者的動態表達水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年6月至2013年6月來我院就診的老年缺血性腦卒中患者63例，均經CT檢查確診。入選標準：(1)無嚴重自身免疫性疾病或心血管系統疾病；(2)無惡性腫瘤；(3)無嚴重感染；(4)無嚴重肝、腎等重要臟器病變；(5)無精神障礙性疾病；(6)無血液系統疾病。男39例，女24例；年齡60～81〔平均(73.4±10.3)〕歲；所有患者入院后均采用格拉斯哥昏迷評分(GCS)標準進行評分，輕度組23例：GCS評分>12；中度組21例：8分

1.2試劑與儀器 sFas和sFasL酶聯免疫吸附(ELISA)檢測試劑盒(購于美國R&D有限公司)；酶標儀購自美國Thermo公司；其他試劑均為國產分析純試劑。

1.3研究方法 抽取觀察組患者發病后24、48、72 h、7、14 d的外周靜脈血2 ml；對照組抽取外周靜脈血2 ml。所有樣品于4℃條件下，2 000 r/min離心15 min，收集血清，-70℃儲存待測。血清sFas和sFasL水平的檢測嚴格按照試劑盒說明書進行操作，按正常人血清sFas和sFasL水平進行梯度稀釋，所有標本均設復孔，利用酶標儀測定450 nm的OD值，并根據所測數值制作標準曲線，最后計算出觀察組患者血清sFas和sFasL濃度。

2 結 果

2.1sFas和sFasL標準曲線的制定 見圖1，本研究建立的sFas和sFasL具有很好的線性關系(R2=0.989，0.975)。

2.2兩組sFas和sFasL水平比較 觀察組血清中sFas和sFasL水平在發病后24 h開始顯著升高，均于發病后48 h達到峰值，此后隨時間延長而逐漸下降。與對照組相比，觀察組不同病情患者血清sFas和sFasL水平均顯著升高，且在發病早期與對照組比較更為顯著。患者病情越重，sFas和sFasL水平升高幅度越大。重度腦卒中患者均高于中度和輕度患者(P<0.05)；中度腦卒中患者均高于輕度患者(P<0.05)。見圖2。

2.3sFas和sFasL表達水平與腦卒中病情分級的關系 sFas和sFasL表達水平與腦卒中GCS評分呈正相關(r=0.582,0.714)(P<0.05)。

圖1 sFas和sFasL標準曲線的制定

圖2 各組sFas和sFasL水平比較

3 討 論

Fas(CD95)是一類細胞跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體家族成員，是在免疫系統介導細胞凋亡過程中起著關鍵作用的凋亡刺激因子〔4，5〕。Fas主要表達于人成熟的T、B淋巴細胞上，廣泛分布于各種組織細胞的表面。FasL是Fas在體內的天然配體，二者結合是Fas在體內發揮作用的唯一途徑。Fas/FasL作為介導細胞凋亡的重要膜蛋白分子，在正常免疫反應、造血調控、機體細胞數量的恒定與調控、無功能或異常細胞的清除等生理功能以及多種遺傳性、獲得性疾病的病理機制中具有十分重要的意義。Fas和FasL均可分泌或脫落至細胞外，成為可溶性功能活動分子，即sFas和sFasL〔6〕。

Zhang等〔7〕研究提示Fas信號在肺癌體內促進生長的關鍵作用，并進一步表明Fas信號可以通過腫瘤細胞前列腺素E2(PGE2)招募髓源性抑制細胞來促進肺癌生長。Chang等〔8〕研究表明，異烏藥內酯可能通過誘導P21引起A549細胞的細胞周期阻滯，并誘導Fas和sFasL介導的細胞凋亡途徑。Srivastava等〔9〕，揭示了尿sFas可作為原發或復發膀胱移型細胞癌的非侵入性診斷的生物標志物。Kim等〔10〕研究發現，黃芪甲苷能夠通過阻斷Fas/Fasl介導的凋亡途徑從而達到治療脫發的目的。Pardalis等〔11〕研究顯示，與正常組小鼠相比，模型組小鼠血清sFas和sFasL水平顯著升高，并于48 h達到高峰。

對于缺血性腦卒中患者，早在20世紀90年代Ohtsuka等〔12〕就已經發現了Fas/FasL系統與腦卒中的相關性。最近，Mahovic等〔13〕提示細胞凋亡在腦梗死發病機制中可能的作用。Gupta〔14〕研究提示，由于年齡的增高，機體細胞的凋亡進程加速，從而引起體內促凋亡的相關因子的表達升高。

本研究提示，腦卒中患者在發病早期由于急性缺血和缺氧，刺激了Fas基因的表達并誘導了sFasL的表達，隨著神經細胞被誘導凋亡，Fas和FasL開始下降，逐漸恢復至接近正常水平，這一研究結果與時鵬等〔15〕一致。此外，本結果提示sFas和sFasL水平有望作為缺血性腦卒中患者預后的評價指標。

綜上所述，血清sFas和sFasL參與了老年缺血性腦卒中的病理發展過程，能反映腦卒中的病情發展階段，對臨床診斷、治療以及預后評判起到指導作用。

4 參考文獻

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10Kim MH，Kim SH，Yang WM，etal.Beneficial effects of astragaloside Ⅳ for hair loss via inhibition of Fas/Fas L-mediated apoptotic signaling〔J〕.PLoS One，2014；9(3)：e92984.

11Pardalis V，Palli E，Lambropoulou M，etal.Expression of Fas (CD95/APO-1) and Fas ligand (FasL) in experimentally-induced acute pancreatitis〔J〕.J Invest Surg，2014；27(2)：65-72.

12Ohtsuka T，Hamada M，Sasaki O，etal.Clinical implications of circulating soluble Fas and Fas ligand in patients with acute myocardial infarction〔J〕.Coron Artery Dis，1999；10(4)：221-5.

13Mahovic D，Zurak N，Lakusic N，etal.The dynamics of soluble Fas/APO 1 apoptotic biochemical marker in acute ischemic stroke patients〔J〕.Adv Med Sci，2013；58(2)：298-303.

14Gupta S.Molecular and biochemical pathways of apoptosis in lymphocytes from aged humans〔J〕.Vaccine，2000；18：1596-601.

15時 鵬，王文靜，王兆平.急性腦梗死患者血清sFas和sFasL水平的觀察研究〔J〕.國際腦血管病雜志，2010；18(11)：823-6.