IL-6對大鼠骨髓間充質干細胞 VCAM-1表達的影響*

徐 蘊 竇珊珊 柳新平 崔利德 徐旭東

(濟寧醫學院基礎學院，山東 濟寧 272067)

骨髓間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)因具有來源廣泛，易于分離培養，且不受倫理制約等優勢，使其成為細胞替代治療的理想種子細胞[1-2]。然而骨髓MSCs移植后能在局部存留并分化的細胞量很少，不能滿足需要，從而難以達到理想治療效果。因此該療法詳細機制的闡明將為組織再生治療開辟新的前景。 Caplan等[3]認為，骨髓MSCS是存在于機體的一種多能干細胞，損傷組織釋放的炎癥因子可能與其從骨髓到達損傷組織完成修復作用有關。研究[4]表明炎性因子可促進血管內皮細胞與骨髓MSCs間的黏附，但機制有待進一步證明。本實驗著重觀察炎性因子IL-6對大鼠骨髓MSCs表達VCAM-1的影響，為全面闡明骨髓MSCs移植治療機制提供一份資料，同時對提高其臨床應用療效打下理論基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

Wistar大鼠；L-DMEM培養基(Hyclone公司); 胎牛血清(Hyclone公司); 青霉素和鏈霉素(華北制藥廠); 胰酶(Gibco公司); IL-6 (Peprotech公司)；免疫組織化學檢測試劑盒 (博士得生物工程公司); PE標記抗大鼠VCAM-1單克隆抗體(BioLegend公司); Biozol總RNA提取試劑 (BioFlu公司); RT試劑盒K1622(Fermentas公司)，包括反轉錄酶、RNA抑制酶、Buffer、4種dNTP及Oligo引物等; DNA MarkerⅡ和Taq PCR MasterMix(天為時代有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1細胞培養 取150 g左右的Wistar大鼠，處死，取兩側股骨，收集骨髓，離心，用含10%FBS的L-DMEM完全培養基重懸，以0.5×107/ml的密度接種于培養瓶中;置37℃、5% CO2及飽和濕度的孵箱中培養。3 d后首次更換培養基，去除未黏附細胞，以后每3～4 d換液1次。待細胞長至90%融合，用0.25%的胰蛋白酶消化，按1:3傳代。取第3代rMSCs用作試驗。

1.2.2實驗分……