腫瘤干細胞標志物CD44在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義

王鑫 吉亞君

肺癌是目前影響人類健康和生命安全的重要疾病, 由于此類疾病的潛伏期較長, 前期癥狀不典型等特點, 在肺癌患者初診、確診時往往已經(jīng)是中晚期, 即使進行手術治療3年生存率也較低, 因此對于肺癌的機制進行進一步的研究和了解, 提高早期診斷率是控制此類疾病, 改善肺癌患者生存期和生活質量的關鍵。CD44是位于染色體11p13上的單一基因編碼的糖蛋白, 本次試驗應用免疫組化法進行CD44在非小細胞肺癌和正常肺組織中表達的檢測, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月～2012年12月之間來本院確診并進行手術治療的40例非小細胞肺癌(NSCLC)患者,包括男27例, 女13例, 年齡24～77歲, 平均年齡(62.5±4.9)歲。病理組織分型包括鱗癌20例, 腺癌20例, 術中取肺癌組織作為研究材料, 同時選取其他開胸手術治療的20例患者正常肺組織為對照組。

1.2 方法 采用免疫組化法進行兩組CD44表達的檢驗,步驟如下：① 脫蠟, 水化組織切片；②預處理組織切片；③PBS沖洗, 2 min/次, 共沖洗3次；④一抗孵育30 min或60 min； ⑤ PBS沖洗 , 2 min/次 , 共沖洗 3次 ； ⑥ PicTure-Plus液孵育15～30 min；⑦PBS沖洗, 2 min/次, 共沖洗3次；⑧DAB染色, 光鏡下控制時間； ⑨蒸餾水漂洗；⑩復染及封片。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0進行統(tǒng)計學處理。計量資料以均數(shù)± 標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

CD44表達部位在細胞膜或細胞漿, 陽性細胞內可見棕黃色顆粒狀物質, 顆粒狀、不均勻分布, 400倍視野下隨機選取5個視野, 每個視野可見100個腫瘤細胞, 將染色陽性細胞總和除以500得到該例細胞陽性率, 以10%為界限, 陽性細胞數(shù)>10%則視為陽性表達。本次研究中CD44蛋白在肺癌組織中的陽性表達率為65.0%(26/40), 在正常組織中的陽性表達率為20.0%(4/20), 在肺癌組織中的陽性表達明顯高于正常組織, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討論

Dall等人曾指出CD44在細胞間質相互作用、腫瘤細胞生長以及腫瘤細胞轉移過程中都有著重要的作用, 但缺乏必要的臨床依據(jù)加以證明, 直至CD44與腫瘤細胞轉移的相關性被Nawa等［1］人證實, 他們的研究發(fā)現(xiàn)含變異體的v6僅在高度轉移性的大鼠癌細胞中表達, 在非轉移性的癌細胞中不表達, 而針對CD44變異體的抗體則能夠有效的抑制癌細胞的生長和轉移, 從而證實了這一點。Sasaki等［2］人采用免疫印跡法對肺癌細胞中的CD44表達進行了檢測, 發(fā)現(xiàn)陽性表達率為71.43%, 而陽性表達均為非小細胞肺癌, 9例小細胞肺癌中無一例陽性表達。區(qū)景松等人采用免疫組化法檢測CD44與NSCLC的關系中發(fā)現(xiàn), CD44的高低和患者的發(fā)病時間存在一定相關性, 原發(fā)灶的表達率要顯著高于轉移灶的表達率。

在本次研究中發(fā)現(xiàn), CD44在非小細胞肺癌組織中的陽性表達率達到65.0%, 這個數(shù)值遠遠高于對照組的20.0%,兩者對比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 這說明CD44在肺癌組織中的表達顯著提高。有文獻研究顯示［3］, CD44的表達和患者年齡、性別、腫瘤分化程度以及組織學類型均無明顯相關, 但與是否轉移、臨床分期和患者生存期存在顯著相關, 考慮原因主要是由于：①腫瘤細胞能夠通過CD44與其他細胞建立聯(lián)系, 通過CD44黏附到透明質酸上更加利于克隆；②CD44能夠對于會刺激腫瘤細胞增殖的配體進行識別；③CD44會參與透明質酸的降解, 加速了腫瘤細胞的侵入。

對于CD44在小細胞肺癌中的低表達, 有學者［4］認為可能是由于CD44在腫瘤各個階段的表達不同, 或是表達過度導致細胞-基質相互作用造成表達的下調。Finke等人的研究發(fā)現(xiàn)CD44在結腸癌中的表達增強存在一定的階段性, 在發(fā)展早期存在高度表達, 而發(fā)生轉移后表達降低, 在非小細胞肺癌中是否存在這樣的現(xiàn)象仍需進一步的研究證實。但從目前來看CD44蛋白在非小細胞肺癌中的表達對于臨床診斷是有一定的幫助的, 能夠作為非小細胞肺癌臨床診斷的標志物。

［1］Nawa A, Sawada H, TohY, et al.Tumormetastas is- associated human CD44 gene: Effects of antisense oligonucleotides on cell growth.Intern JMed Biol Environ, 2000, 28(1): 33- 39.

［2］Sasaki H, Moriyama S, Nakashima Y, et al.Expression of the CD44 in advanced lung cancer .Lung Cancel, 2002, 35(2):149-154.

［3］Thome M, Schneider P, Hofmann K, et al.Viral FLICE inhibitoryproteins(CD44) prevent apoptosis induced by death receptors.Nature, 1997, 386(6624) : 517- 521.

［4］車國軍, 周清華, 唐夢琳, 等.肺癌中的血管生成及其臨床意義探討 .中國腫瘤臨床雜志, 2002, 29( 9): 609 - 612.