硝酸益康唑克霉唑乳膏的制備及質量控制

高松田，徐興亞，周 泉

0 引言

手足癬［1］(Tinea manuum and pedis)是皮膚科臨床中的常見病和多發病，一般外用單方或復方抗真菌藥物。我所臨床常使用益康唑克霉唑癬藥水［2］(雙唑癬藥水，蘇藥制字 H04002328)，但因其二甲基亞砜含量達40%，乙醇含量達50%以上，對皮膚有一定的刺激作用。所以，筆者根據需要研制了硝酸益康唑克霉唑乳膏，臨床療效顯著，現將其制備和質量控制方法報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu Lc-20Ad HPLC色譜儀(日本島津)，Shimadzu Spd-M20a檢測器，Shimadzu Lc Solution色譜工作站;Mettler AB135-S電子分析天平(十萬分之一，德國梅特勒公司)。

硝酸益康唑對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100214-199802，含量:100.0%);硝酸益康唑原料(藥用，江蘇恩華藥業股份有限公司，批號:20111102，含量:99.3%);克霉唑對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100037-200306，含量:100.0%)、克霉唑原料(藥用，常州亞邦制藥有限公司，批號:20110401，含量:99.1%);硝酸益康唑克霉唑乳膏［揚州市疾病預防控制中心皮膚病性病防治所制劑室自制，規格:30 g/盒(克霉唑0.3 g，硝酸益康唑 0.3 g)，批號:20120814、20120824］。液狀石蠟、甘油等輔料均為藥用規格，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為揚州制藥廠生產的超純水。

健康家兔4只，體重3.8～4.2 kg，雌雄各半，揚州大學農學院提供，實驗動物生產許可證號:SCXK(蘇)2005-0003。

2 處方及制備

2.1 處方 克霉唑1 g，硝酸益康唑1 g，液狀石蠟10 g，聚山梨酯-80 3.5 g，脫水山梨醇油酸酯1.5 g，單硬脂酸甘油酯5 g，十六醇10 g，白凡士林5 g，甘油10 g，羥苯乙酯0.5 g，二甲基亞砜6 mL，純化水48 mL，總量為100 g。

2.2 制備方法 取單硬脂酸甘油酯、十六醇、白凡士林及液狀石蠟加熱熔解至75℃左右(油相);另取甘油、聚山梨酯-80、脫水山梨醇油酸酯、羥苯乙酯，純化水加熱至75℃左右(水相)，將油相緩緩加入水相中，隨加隨攪，溫度至50℃，加入克霉唑硝酸益康唑二甲基亞砜(克霉唑和硝酸益康唑溶于二甲基亞砜溶液中)溶液，攪勻即得。

3 質量控制

3.1 性狀 本品為白色乳膏

3.2 鑒別

3.2.1 克霉唑［3］①取本品適量(約相當于克霉唑20 mg)，加0.5 mol/L硫酸溶液10 mL，在水浴中微溫，攪拌使克霉唑溶解，放冷，濾過，取濾液2 mL，加三硝基苯酚試液數滴即生成黃色沉淀。②取上述濾液1 mL，緩緩滴加硫酸1 mL，并不斷振搖，溶液顯橙黃色，加水3 mL稀釋后顏色消失;再加硫酸3 mL，復顯橙黃色。

3.2.2 硝酸益康唑［3］取含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致。

3.3 檢查 應符合2010版《中國藥典》(二部)附錄中乳膏劑項下有關的各項規定［3］。

3.4 含量測定

3.4.1 溶液的制備 ①供試品溶液的制備:取本品約1 g(相當于克霉唑與硝酸益康唑各10 mg)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，置75℃水浴中溫熱5 min，時時振搖，取出后強烈振搖5 min，使克霉唑與硝酸益康唑充分溶解，冷卻至室溫，用磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中2 h，濾膜濾過，取續濾液放至室溫作為供試品溶液。②對照品溶液的制備:精密稱取克霉唑與硝酸益康唑各10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL使溶解，用磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用75%甲醇磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，制成對照品溶液。③陰性樣品溶液的制備:取除克霉唑與硝酸益康唑以外的其他組分，按處方配比配制成空白樣品，按供試品溶液的處理方法，制成陰性樣品溶液。

3.4.2 色譜條件 色譜柱:Alltech Alltima C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm)色譜柱;流動相:磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀與磷酸氫二鉀各2.5 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL)-甲醇(25∶75);流速:1.0 mL/min;柱溫:18℃;檢測波長:264 nm;進樣量為20 μL。對照品、供試品和陰性對照色譜圖見圖1。克霉唑與硝酸益康唑的分離度與理論塔板數均符合要求。陰性對照對測定無干擾。

圖1 HPLC圖譜

3.4.3 標準曲線的繪制 精密稱取克霉唑對照品20.26 mg與硝酸益康唑對照品19.48 mg，置同一200 mL量瓶中，加甲醇150 mL使溶解，用磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液 0.25、0.5、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、75.0 mL，分別置 100 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以克霉唑與硝酸益康唑的峰面積(A)對其濃度(C:μg/mL)進行線性回歸，回歸方程分別為克霉唑A=2.162 9C+1.395 4，r=0.999 9;硝酸益康唑A=2.860 2C+1.420 5，r=0.999 9。結果表明，克霉唑在0.253～101.3 μg/mL、硝酸益康唑在 0.244 ～97.4 μg/mL的范圍內均與峰面積呈良好的線性關系。

3.4.4 穩定性試驗 取批號為20120824的樣品，按“3.4.1”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，在 0、1、2、3、4、6、8 h 分別進樣 20 μL，記錄各色譜峰峰面積，結果克霉唑與硝酸益康唑色譜峰峰面積的RSD(n=7)分別為1.1%、1.4%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

3.4.5 精密度試驗 取批號為20120824的樣品，按“3.4.1”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下連續進樣5次，克霉唑與硝酸益康唑色譜峰峰面積的RSD(n=5)分別為0.8%、1.0%。

3.4.6 回收率試驗 稱取批號為20120824的樣品9份，每份約0.25 g，精密稱定，分別置50 mL量瓶中。精密稱取克霉唑對照品19.80 mg與硝酸益康唑對照品20.49 mg，置同一50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.0、3.0、5.0 mL各3份，分別加入上述9個50 mL量瓶中，按“3.4.1”項下的方法制備供試品溶液。精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果顯示克霉唑與硝酸益康唑的回收率分別為99.87%、101.11%，RSD%分別為 1.4%、1.8%。見表1。

表1 回收率試驗結果(n=9)

3.4.7 重復性試驗 取批號為20120824的樣品，按“3.4.1”項下方法制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下連續進樣2次，克霉唑與硝酸益康唑色譜峰峰面積的RSD(n=6)均1.9%。結果表明，方法的重復性良好。

3.4.8 樣品測定 取批號為20120814、20120824、20120906的樣品，分別按“3.4.1”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，以外標法計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

4 制劑的穩定性考察［4］

取2 批樣品(20120814、20120824、20120906)各30 g于(40±1)℃、(25±2)℃、(5±2)℃溫度中分別放置3、6個月。結果，樣品性狀、含量、微生物限度檢查均無明顯變化。

5 皮膚刺激性試驗［5］

選擇健康家兔4只，脊柱兩側對稱剃毛，兩側面積均為2 cm×2 cm，24 h后將樣品均勻涂布在左側，右側對照觀察。觀察72 h后，兩側皮膚均無紅斑、水腫等不良反應。

6 討論

6.1 手足癬是致病性皮膚絲狀真菌在手足部位引起的皮膚病，硝酸益康唑、克霉唑作用機制為直接損傷真菌的細胞膜，使其通透性發生改變［6］。兩者合用，安全有效，克服了雙唑癬藥水刺激等過敏反應，使用方便。

6.2 克霉唑易氧化，水解成咪唑等產物，配制時可加抗氧劑和穩定性來保證制劑質量［4］。

6.3 質量控制方法參照硝酸益康唑乳膏［3］標準進行，采用磷酸鹽緩沖液∶甲醇=25∶75作為流動相，結果表明峰形較好，可獲得較高的分離度與理論塔板數，拖尾因子達到要求，經方法學驗證結果滿意。

［1］趙辯.臨床皮膚病學［M］.第3版.江蘇科學技術出版社，2001，388-389.

［2］中華人民共和國衛生部藥政局.中國醫院制劑規范(第二版)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，1995，28.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010，320，955，附錄 154.

［4］陳儀生，徐興亞.克霉唑乳膏穩定性考察［J］.青海醫藥雜志，2009，10:56-57.

［5］徐興亞，李倚云，徐菁，等.氯霉素甲硝唑凝膠的制備及質量控制［J］.中國藥師，2002，5(11):652-653.

［6］徐叔云.臨床藥理學［M］.第3版.人民衛生出版社，2005，438-439.