基質固相分散—超快速液相色譜測定山楂片中的4種蘇丹紅染料

2014-10-24 21:53:25王重洋等

分析化學 2014年4期

王重洋等

摘要：采用基質固相分散超快速液相色譜法測定了山楂片中的蘇丹紅染料，基質固相分散萃取的最佳條件為：0.45 g硅膠分散劑，6 mL乙酸乙酯作為洗脫劑，樣品與分散劑質量比為1∶3。乙腈水為流動相，流速：0.3 mL/min，進樣量：10 μL，柱溫：30 ℃，梯度洗脫，4種蘇丹紅化合物回收率在86.1%～ 108.3% 之間； RSD在2.3%～9.8%之間。測定蘇丹紅的線性范圍為0.01～2.5 mg/kg（蘇丹紅Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ），0.025～2.5 mg/kg（蘇丹紅Ⅳ），檢出限為4.2～8.9 μg/kg，檢出限優于國標方法，可滿足實際樣品分析的要求。

關鍵詞：基質固相分散；超快速液相色譜；蘇丹紅；山楂片

1引言

蘇丹紅是人工合成工業染料，為親脂性偶氮化合物。1995年歐盟（EU）等國家已禁止其作為色素添加在食品中，國際癌癥研究機構將蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ列為動物致癌物，我國衛生監管部門已禁止蘇丹紅作為食品添加劑使用[1]。蘇丹紅作為禁用的工業染料，卻被違法添加到山楂片等食品中，即使過期也能保持鮮艷的紅色。

我國國家標準采用高效液相色譜法檢測食品中蘇丹紅染料，方法檢出限為0.010 μg/g[2]。現有測定蘇丹紅的方法有很多，主要包括HPLC[3]、UPLCMS[4，5]、酶聯免疫[6]以及流動注射化學發光法[7]等。常見的前處理方法主要有微波輔助[8]、固相萃取[9]、基質固相分散[10～12]等技術。基質固相分散（Matrix solid phase dispersion， MSPD）由于可以避免樣品處理過程的損失，減少溶劑用量，且可以整合樣品均化、預處理、過濾、凈化、提取等過程，因此常被用于固體、半固體和高粘性的生物樣品的制備和萃取，在食品分析行業得到了廣泛應用[13]。食品基質較為復雜，且蘇丹紅在食品中非法添加的含量往往較低，選用MSPD樣品前處理過程消除干擾，可滿足復雜食品基質中痕量蘇丹紅的檢測。

由于MSPD無需萃取溶劑、提取條件溫和，適用于現場處理樣品。本實驗采用了基質固相分散超快速液相色譜法（MSPDUFLC）測定山楂片中的蘇丹紅，線性范圍為0.01～2.5 mg/kg，檢出限為4.2～8.9 μg/kg，出峰時間和檢測靈敏度均優于國家標準方法，滿足實際樣品分析的要求。2實驗部分

2.1儀器與試劑

超快速液相色譜儀（日本島津公司），配備兩個泵（型號LC20AD）、自動進樣器（SIL20A）、柱溫箱（CTO20A）和紫外檢測器（SPD20A）；色譜柱（XRODS，100 mm × 2 mm， 2.2 μm）。MSPD裝置由10 mL玻璃注射器自制而成。

蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ購于中國藥品生物制品檢定所。使用乙腈配制100 mg/L蘇丹紅標準儲備液，4 ℃保存。工作溶液采用乙腈稀釋標準儲備液。乙腈、甲醇（色譜級，美國Fisher 公司）；丙酮、乙酸乙酯及正己烷（分析級，北京化工廠）；硅膠（粒徑150 μm）、硅藻土（粒徑38 μm）以及氧化鋁（粒徑75 μm）購于中國藥品生物制品檢定所，在650 ℃下灼燒4 h，烘干2 h，儲藏于干燥器中。二次蒸餾水由MilliQ水純化系統（美國Millipore公司）制得。山楂片購于當地超市。

2.2MSPD過程

將市售山楂片在60 ℃下干燥24 h，然后使用電動粉碎機將其粉碎，過孔徑250 μm的篩子，得到均勻的山楂片粉末。將樣品粉末保存于4 ℃冰箱中，待用。

稱取0.15 g山楂片樣品，加入0.45 g硅膠分散劑，研磨均勻。在10 mL玻璃注射器底部放一層脫脂棉，將混合物轉移到注射器中，樣品上方再放置一層脫脂棉，壓實。以6 mL乙酸乙酯為洗脫劑，重力洗脫目標分析物。收集洗脫液，40 ℃下氮氣吹干，加入200 μL乙腈，過0.22 μm濾膜，待測。

2.3色譜條件

3.2樣品與分散劑質量比的影響

樣品與分散劑的質量比對提取效果有一定的影響。本實驗中，準確稱取0.15 g山楂片樣品，分別考察0.15、0.30、0.45 和0.60 g硅膠對提取效果的影響，采用6 mL乙酸乙酯洗脫，進行基質固相提取，每個樣品平行制備3組。結果表明，山楂片樣品與硅膠的質量比為1∶3時，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的回收效果最好，這是因為在二者質量比為1∶1～1∶3時，隨著分散劑用量的增加，基質更好地被分散，所以回收率有所提高；二者質量比為1∶ 4時，殘留在分散劑中的洗脫液隨之增加，使得回收率反而下降，因此樣品與分散劑最佳質量比為1∶3（表 2）。

3.3洗脫劑及其用量的影響

洗脫劑的選擇對目標物的提取有重要影響。本實驗考察了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯及正己烷5種洗脫劑對4種蘇丹紅的洗脫能力。準確稱取0.15 g山楂片樣品，硅膠用量為0.45 g，洗脫劑用量為6 mL，進行基質固相提取，每個樣品平行制備3組。結果表明，甲醇、正己烷的洗脫能力很弱；乙腈為洗脫劑的回收率明顯高于丙酮，但提取不充分，不適于作為洗脫劑；而乙酸乙酯作為洗脫劑時，由于其極性與蘇丹紅化合物的極性最為相當，洗脫效果明顯優于其它洗脫劑。本實驗選擇乙酸乙酯作洗脫劑（表 3）。

3.5檢出限、定量限和精密度

3.6實際樣品檢測

References

1Hygienic standards for uses of food additives. National Standards of the People′s Republic of China. GB 2760-2007

2GB 2760-2007. The method for the determination of Sudan dyes in foods High performance liquid chromatography. National Standards of the People′s Republic of China

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